促进小鼠骨骼肌细胞中ATG13基因表达的miR-542-5p序列及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种促进小鼠骨骼肌细胞中ATG13基因表达的miR

【技术实现步骤摘要】
促进小鼠骨骼肌细胞中ATG13基因表达的miR
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542
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5p序列及其应用


[0001]本专利技术涉及属于分子生物学及医学领域，具体涉及一种促进小鼠骨骼肌细胞中ATG13基因表达的miR
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542
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5p序列及其应用。

技术介绍

[0002]ICU
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获得性肌无力（ICU
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AW）的特点是肢体无力等神经肌肉损伤，是ICU患者常见的神经肌肉并发症，平均发病率为57%左右。ICU
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AW的主要临床表现是对称性肢体无力，还有可能引发脱机困难，进而延长患者的ICU住院时间，影响出院后的生活质量等。由于许多患者在危重病5年后仍存在功能下降，因此肌肉萎缩的恢复可能非常缓慢。肌肉功能障碍也发生在包括慢性阻塞性肺病 在内的几种慢性疾病中，导致发病率和死亡率增加。目前国内有关 ICU
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AW 危险因素的研究较少，ICU
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AW的病因仍不清楚，早期识别并及时干预有助于改善患者愈后及生活质量。
[0003]ATG13作为传统的自噬相关基因，主要通过PERK信号传导参与内质网转换，是细胞维持稳态和存活的中心调控因子。自噬作为一种在细胞应激下降解蛋白质和细胞器的明确和自我消化的过程，可以维持细胞的稳态，有利于细胞存活。前期研究表明，ATG13是骨骼肌发育、基础稳态和适应所必需的。胚胎或成人骨骼肌中ATG13的损失导致肌肉质量和力量的损失，线粒体异常、肌质网肿胀、内化细胞核和液泡显着等问题。
[0004]MicroRNA(miRNA)是一类内源的、广泛存在于生物体内的长度约为20～24个核苷酸的非编码RNA，参与各类调控，影响生物体发育，在细胞内具有多种重要的调控作用。最近，各类研究表明miRNA在细胞稳态中起关键作用。最近miR
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3p 和 miR
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5p被预测为靶向控制蛋白质周转和能量平衡的途径，从而影响肌肉质量和功能的途径。因此miR
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542
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5p很可能是肌肉萎缩的重要因素。
[0005]鉴于ATG13在ICU
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AW病理进程中的重要作用，我们拟通过调节miR
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5p的表达量来调节ATG13蛋白的表达从而实现其在ICU
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AW中的应用。这为ICU
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AW治疗提供了新的研究思路，对医学具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的：针对ICU患者常见的神经肌肉并发症的影响，提供一种miR
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542
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5p药物靶点在骨骼肌损伤疾病中的应用，能够通过调节靶分子ATG13抑制细胞自噬减轻线粒体损伤，从而维持骨骼肌细胞的胞质稳态和正常生理功能。
[0007]实现上述目的，本专利技术的技术方案是：一种促进小鼠骨骼肌细胞中ATG13基因表达的miR
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542
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5p序列，所述序列为5'
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CUCGGGGAUCAUCAUGUCACGA
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3 '。
[0008]本专利技术又提供了一种miR
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542
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5p序列在ICU
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AW的应用，包括以下步骤：步骤一、利用内毒素注射方法建立ICU
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AW动物模型，取后肢腓肠肌，提取总RNA，查询和肌肉分化相关的miRNAs，设计引物，利用qPCR技术检测ICU
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AW小鼠模型中差异表达显
著的miRNAs；步骤二、利用数据库分析miR
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542
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5p与ATG7的靶向关系，并通过双荧光素酶验证实验检测；步骤三、设计miR
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542
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5p核苷酸，序列为5'
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CUCGGGGAUCAUCAUGUCACGA
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3 '。
[0009]设计miR
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5p抑制物，序列为：抑制物：正义链5'
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UCGUGACAUGAUGAUCCCCGAG
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3'：步骤四、采用内毒素注射方法建立ICU
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AW动物模型，利用纳米微球缓释体系通过腹腔注射miR
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542
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5抑制物，脱颈处死小鼠后，剥离取出腓肠肌和膈肌，检测miR
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542
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5p对骨骼肌的影响。
[0010]本专利技术的技术效果在于：miR
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542
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5p的抑制物能够通过调控ATG13的表达，缓解肢体无力，可以作为治疗肢体无力的药物，对肢体无力有潜在的预防和治疗价值。
[0011]miR
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542药物靶点在骨骼肌损伤疾病中的应用，能够通过调节靶分子ATG13抑制细胞自噬诱导线粒体损伤，从而维持骨骼肌细胞的胞质稳态和正常生理功能。
附图说明
[0012]图1为ICU
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AW动物模型中miR
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542
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5p的表达水平；图2为miR
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5p靶蛋白的预测与验证；图3为miR
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542
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5p抑制物对小鼠骨骼肌的影响。
具体实施方式
[0013]下面将结合附图，对本实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0014]另外，本专利技术各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。
[0015]参见图1~图3，一种促进小鼠骨骼肌细胞中ATG13基因表达的miR
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5p序列，所述序列为5'
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CUCGGGGAUCAUCAUGUCACGA
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3 '。
[0016]一种miR
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542
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5p序列在ICU
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AW的应用，包括以下步骤：步骤一、利用内毒素注射方法建立ICU
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AW动物模型，取后肢腓肠肌，提取总RNA，查询和肌肉分化相关的miRNAs，设计引物，利用qPCR技术检测ICU
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AW小鼠模型中差异表达显著的miRNAs；步骤二、利用TargetScan等数据库分析本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进小鼠骨骼肌细胞中ATG13基因表达的miR
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5p序列，其特征在于，所述序列为5'
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CUCGGGGAUCAUCAUGUCACGA
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3 '。2.基于权利要求1所述的miR
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5p序列在ICU
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AW中的应用，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、利用内毒素注射方法建立ICU
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AW动物模型，取后肢腓肠肌，提取总RNA，查询和肌肉分化相关的miRNAs，设计引物，利用qPCR技术检测ICU
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AW小鼠模型中差异表达显著的miRNAs；步骤二、利用数据库分析miR
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5p与ATG13的靶向关...

【专利技术属性】
技术研发人员：王韵，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，
类型：发明
国别省市：