聚乙二醇化鱼精蛋白-二氢卟吩e6偶联物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种聚乙二醇化鱼精蛋白

【技术实现步骤摘要】
聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]光动力治疗是近年来新兴的肿瘤治疗方法。光敏剂是光动力治疗的关键要素，光敏剂吸收特定波长光照后在氧分子的参与下发生光敏氧化，产生单线态氧或活性氧，进而氧化破坏肿瘤细胞中的生物大分子，抑制肿瘤细胞增殖。
[0003]二氢卟吩e6是一种性能优越的光敏剂，具有高的单线态氧产生效率，被广泛开发用于光动力治疗。由于二氢卟吩e6具有疏水性，在溶液中容易聚集，在实际应用中面临困难。研究人员发展了多种纳米载药系统用于改善二氢卟吩e6的水溶性、提升光动力治疗效果，如脂质体、白蛋白纳米颗粒等。但是如何增强二氢卟吩e6的细胞摄取效率仍是目前所面临的技术难点。
[0004]鱼精蛋白是一种碱性蛋白，主要在鱼类(如蛙鱼、蹲鱼、鲱鱼等)成熟精子细胞核中作为和DNA结合的核精蛋白存在。鱼精蛋白为阳离子蛋白，对细胞膜具有较高的亲和性，因此可以将鱼精蛋白作为药物载体，用于提高药物的细胞摄取效率。但是鱼精蛋白难溶于有机溶剂，将鱼精蛋白与疏水性药物偶联面临技术挑战。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一是提供一种聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物，其具有比游离二氢卟吩e6更高的细胞摄取效率和更强的肿瘤细胞光动力杀伤作用。该偶联物由甲氧基聚乙二醇醛基和硫酸鱼精蛋白先通过席夫碱反应制备得到聚乙二醇化鱼精蛋白，然后再与二氢卟吩e6缩合制备得到。
[0006]本专利技术的另一目的是提供聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物的制备方法，按照下述步骤进行：
[0007](1)聚乙二醇化鱼精蛋白的制备
[0008]以甲氧基聚乙二醇醛基和硫酸鱼精蛋白为原料，在磷酸盐缓冲液(6.7mM,pH 7.4)中，氮气保护下室温搅拌反应24～48小时，然后于超纯水中透析3天，冷冻干燥得聚乙二醇化鱼精蛋白。
[0009]其中，甲氧基聚乙二醇醛基和硫酸鱼精蛋白摩尔比为1～1.2:1，甲氧基聚乙二醇醛基分子量为1000～20000。
[0010](2)聚乙二醇化鱼精蛋白
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二氢卟吩e6偶联物的制备
[0011]以聚乙二醇化鱼精蛋白和二氢卟吩e6为原料，以1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐为缩合剂，4
‑
二甲氨基吡啶为催化剂，在有机溶剂中、氮气保护条件下加热至50℃反应12～24小时，然后冷却至室温，加入至透析袋中，于超纯水中透析三天，冷冻干燥
即可得到聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物。
[0012]其中，甲氧基聚乙二醇化鱼精蛋白、二氢卟吩e6、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐、4
‑
二甲氨基吡啶摩尔比为1:1:4～8:0.5～1，有机溶剂为二甲基亚砜或N,N
‑
二甲基甲酰胺。
[0013]本专利技术的第三个目的是提供聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物在肿瘤光动力治疗方向的应用。
[0014]本专利技术的优点在于：
[0015]本专利技术首先将鱼精蛋白聚乙二醇化，提高了蛋白在有机溶剂中的溶解性，为偶联二氢卟吩e6提供了有利条件；
[0016]本专利技术提供的聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物具有良好的水溶性和高于游离二氢卟吩e6的肿瘤细胞摄取量，对肿瘤细胞的光动力杀伤作用强于游离二氢卟吩e6。
附图说明：
[0017]图1为本专利技术实施例1制备的聚乙二醇化鱼精蛋白的核磁共振氢谱图。
[0018]图2为本专利技术实施例3制备的聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物的核磁共振氢谱图。
[0019]图3为本专利技术实施例1和实施例3制备的聚乙二醇化鱼精蛋白和聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物的红外光谱图。
具体实施方式
[0020]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。
[0021]实施例1聚乙二醇化鱼精蛋白的制备
[0022]在50mL圆底烧瓶中加入30mL磷酸盐缓冲液(6.7mM，pH 7.4)，加入磁子搅拌，加入硫酸鱼精蛋白(500mg，0.1mmol)和甲氧基聚乙二醇醛基(分子量2000,200mg,0.1mmol)搅拌溶解，氮气保护下室温搅拌反应48小时，然后于超纯水中透析3天(截留分子量3500)，冷冻干燥得聚乙二醇化鱼精蛋白白色粉末状固体，产率89％。
[0023]通过核磁共振氢谱和红外光谱对所合成聚乙二醇化鱼精蛋白进行了表征。如图1所示，聚乙二醇化鱼精蛋白的核磁共振氢谱中同时出现了聚乙二醇(b)和鱼精蛋白(a)的特征峰，红外光谱(图3)同时出现了聚乙二醇的C
‑
O
‑
C伸缩振动峰(1113cm
‑1)和鱼精蛋白酰胺键的C＝O伸缩振动峰(1652cm
‑1)，表明聚乙二醇化鱼精蛋白的成功合成。
[0024]实施例2聚乙二醇化鱼精蛋白的制备
[0025]在50mL圆底烧瓶中加入30mL磷酸盐缓冲液(6.7mM,pH 7.4)，加入磁子搅拌，加入硫酸鱼精蛋白(500mg，0.1mmol)和甲氧基聚乙二醇醛基(分子量5000,600mg,0.1mmol)搅拌溶解，氮气保护下室温搅拌反应24小时，然后于超纯水中透析3天(截留分子量3500)，冷冻干燥得聚乙二醇化鱼精蛋白白色粉末状固体，产率85％。
[0026]实施例3聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物的制备
[0027]在50mL圆底烧瓶中加入5mL二甲基亚砜，加入实施例1制备的聚乙二醇化鱼精蛋白(70mg,0.01mmol)、二氢卟吩e6(6mg,0.01mmol)、1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(15mg,0.08mmol)和4
‑
二甲氨基吡啶(1mg,0.01mmol)，氮气保护下加热至50℃搅拌反
应24小时，然后冷却至室温，加入至透析袋中，于超纯水中透析三天(截留分子量3500)，冷冻干燥得聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物墨绿色粉末状固体，产率92％。
[0028]通过核磁共振氢谱和红外光谱对所合成聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物进行了表征。如图2所示，聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物的核磁共振氢谱中同时出现了聚乙二醇(b)、二氢卟吩e6(c)和鱼精蛋白(a)的特征峰，与聚乙二醇化鱼精蛋白相比本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物，其特征在于，所述偶联物由甲氧基聚乙二醇醛基和硫酸鱼精蛋白先通过席夫碱反应制得聚乙二醇化鱼精蛋白，然后再与二氢卟吩e6缩合得到。2.根据权利要求1所述的聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物，其特征在于，所述偶联物具有体外光动力效应；具有光动力杀伤肿瘤细胞作用。3.一种根据权利要求1所述的聚乙二醇化鱼精蛋白
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二氢卟吩e6偶联物的制备方法，其特征在于，所述偶联物的制备方法步骤如下：(1)以甲氧基聚乙二醇醛基和硫酸鱼精蛋白为原料，在磷酸盐缓冲液中，氮气保护下室温搅拌反应24～48小时，然后于超纯水中透析3天，冷冻干燥得聚乙二醇化鱼精蛋白；(2)以步骤(1)中的聚乙二醇化鱼精蛋白和二氢卟吩e6为原料，以1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐为缩合剂，4
‑
二甲氨基吡啶为催化剂，在有机溶剂中反应，然后冷却至室温，加入至透析袋中，于超纯水中透析三天，冷冻干燥即可得到聚乙二醇化鱼精蛋白
‑
二氢卟吩e6偶联物。4.根据权利要求3所述的聚乙二醇化鱼精蛋白
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二氢卟吩e6偶联物的制备步骤，其特征在于，步骤(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡航，袁婷，钱嘉豪，徐德锋，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：