一种间充质干细胞衰老相关分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种间充质干细胞衰老相关分子标志物及其应用，所述的分子标志物为miR

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞衰老相关分子标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学、细胞生物学以及干细胞培养与应用领域，尤其涉及一种间充质干细胞衰老相关分子标志物及其应用。

技术介绍

[0002]细胞衰老被看作是组织和生物衰老的细胞对应物，细胞生长出现不可逆的停滞状态、功能和行为改变。细胞衰老允许机体阻止受损细胞的增殖，是肿瘤病变的一个屏障。然而，经历了永久性增殖阻滞的细胞可能对整个个体有害，衰老细胞在衰老组织中存在并依赖于年龄的积累，这种积累会加速组织功能的衰退，促进年龄相关疾病的发生。
[0003]MicroRNAs(miRNAs)是一类约由22个核苷酸组成的特殊RNAs，影响靶向mRNA的翻译和稳定性来调控转录后的基因表达，被视为基因调控的重要贡献者。miRNAs是衰老相关基因表达的重要调控分子。细胞外囊泡(extracellular vesicles，EV)是细胞分化、衰老、转化等刺激所诱导产生的异质性囊泡，由脂质双层膜形成，包含蛋白质、核酸和脂质及其衍生物等物质。EV是细胞间通讯的重要参与者，EV也可反映释放细胞的病理状态，可作为多种病理的有前途的生物标志物。细胞因为外界干预和不同功能需求而产生不同种类的miRNA，封装在EV中的miRNAs受到各种应激刺激和微环境条件的严格调控。衰老细胞分泌的EV内容物与正常细胞不同，EV的miRNA可作为有前途的衰老相关分子标志物。
[0004]干细胞是再生医学的基础，间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSC)是再生医学和组织工程领域的关键治疗工具之一。然而，在体内或体外培养过程中，MSC会随着供体年龄增长和疾病状况而功能退化，并逐渐失去干性。体外长期培养过程会诱发MSC复制性衰老，细胞形态由类似梭形趋于扁平，增殖能力降低，分化潜能下调，溶酶体密度增加，线粒体密度增加和膜电位发生改变。体外培养过程中出现MSC衰老退化现象，一定程度上制约了干细胞基础研究、产业化发展与临床应用。因此，研究和开发MSC衰老相关分子标志物，是目前推进MSC应用亟需解决的关键问题，其有助于开发监测和评估MSC状态/质量的新方法，提升MSC质量和产量。
[0005]因此，现有技术还有待改进。

技术实现思路

[0006]鉴于上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种间充质干细胞衰老相关分子标志物及其应用，旨在通过开发一种间充质干细胞衰老相关分子标志物，解决目前检测或监测间充质干细胞在体外培养中的衰老时存在的问题。
[0007]本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]一种间充质干细胞衰老相关分子标志物，其中，所述分子标志物为miR
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311，所述miR
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311的核苷酸序列如SEQ.ID NO 1所示。
[0009]一种间充质干细胞衰老相关分子标志物的应用，其中，所述应用为非诊断目的，将如上所述的分子标志物应用于检测间充质干细胞的衰老。
[0010]所述的应用，其中，所述间充质干细胞包括脐带血来源间充质干细胞以及诱导性多能干细胞衍生间充质干细胞。
[0011]所述的应用，其中，所述间充质干细胞的衰老指标包括细胞形态、细胞增殖能力、胞内溶酶体密度、胞内线粒体密度、干性相关基因的表达水平或细胞成骨分化潜能的改变中的至少一种。
[0012]所述的应用，其中，所述干性相关基因包括NANOG或SOX2。
[0013]一种间充质干细胞衰老检测试剂盒，其中，试剂盒包括如上所述的间充质干细胞衰老相关分子标志物。
[0014]所述的试剂盒，其中，试剂盒还包括miR
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311检测引物和探针。
[0015]所述的试剂盒，其中，所述miR
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311检测引物的核苷酸序列如SEQ.ID NO 2所示。
[0016]一种间充质干细胞衰老检测试剂盒的应用，其中，所述应用为非诊断目的，将如上任一所述的试剂盒应用于筛选间充质干细胞衰老相关药物分子。
[0017]有益效果：本专利技术提供了一种间充质干细胞衰老相关分子标志物及其应用，所述的分子标志物为miR
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311。本专利技术通过对脐带血来源间充质干细胞、诱导性多能干细胞衍生间充质干细胞以及间充质干细胞衍生细胞外囊泡中进行的研究表明：miR
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311表达水平随间充质干细胞的衰老而增加。因此，miR
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311可作为间充质干细胞衰老的分子标志物，为体外检测间充质干细胞衰老提供理论基础，有助于开发监测和评估间充质干细胞状态/质量的新方法，应用于间充质干细胞规模化生产的质量监测，提升间充质干细胞质量和产量，推动间充质干细胞在再生医学和组织工程学领域中的应用。
附图说明
[0018]图1为本专利技术实施例提供的分子标志物miR
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311的前体结构示意图。
[0019]图2为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC细胞外囊泡的小RNA测序分析结果。
[0020]图3为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC细胞形态示意图。
[0021]图4为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC细胞增殖能力对比示意图。
[0022]图5为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC胞内溶酶体密度变化的示意图。
[0023]图6为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC胞内线粒体密度变化的示意图。
[0024]图7为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC的干性基因Nanog和Sox2表达水平。
[0025]图8为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC的衰老相关基因p16
INK4A
和p21表达水平。
[0026]图9为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC的成骨分化结果的示意图。
[0027]图10为本专利技术实施例中健康人群和早老症患者来源的iMSC的细胞外囊泡中miR
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311表达水平示意图。
[0028]图11为本专利技术实施例中诱导性多能干细胞来源和脐带血来源MSC的miR
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311表达水平示意图。
具体实施方式
[0029]本专利技术提供一种间充质干细胞衰老相关分子标志物及其应用，为使本专利技术的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本专利技术进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0030]本专利技术实施例提供一种间充质干细胞衰老相关分子标志物，所述分子标志物为miRNA，所述miRNA为miR
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311。
[0031]所述miR
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311的核苷酸序列如SEQ.ID NO 1所示：
[0032]SEQ.ID NO 1：GUGGGGUGUUAGGUCAUUC
[0033]本专利技术实施例中，首先提取间充质干细胞的RNA并进行small RN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞衰老相关分子标志物，其特征在于，所述分子标志物为miR
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311，所述miR
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311的核苷酸序列如SEQ.ID NO 1所示。2.一种间充质干细胞衰老相关分子标志物的应用，其特征在于，所述应用为非诊断目的，将如权利要求1所述的分子标志物应用于检测间充质干细胞的衰老。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞包括脐带血来源间充质干细胞以及诱导性多能干细胞衍生间充质干细胞。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞的衰老指标包括细胞形态、细胞增殖能力、胞内溶酶体密度、胞内线粒体密度、干性相关基因的表达水平或细胞成骨分化潜能的改变中的至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：何良格，周光前，
申请(专利权)人：杭州深乐衰老医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：