一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体及其编码基因、制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体及其编码基因、制备方法和应用，属于生物技术领域中的人源化单克隆抗体制备技术领域。本发明专利技术提供的人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，该人源化抗人γδTCR单克隆抗体能够在体外刺激扩增外周血γδT细胞，获得的γδT细胞能够分泌多种细胞因子，且能够有效杀伤多种肿瘤细胞。能够有效杀伤多种肿瘤细胞。能够有效杀伤多种肿瘤细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种人源化抗人
γδ
TCR单克隆抗体及其编码基因、制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
中的人源化单克隆抗体及其制备
，具体涉及一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体及其编码基因、制备方法和应用。

技术介绍

[0002]T淋巴细胞根据其细胞膜表面的T细胞受体(T cell receptor，TCR)的组成不同，可分为两个亚群：αβT细胞亚群和γδT细胞亚群。前者的TCR是由α和β两条糖蛋白链组成，占T细胞总数的绝大部分；后者的TCR则是由γ和δ链组成，只占外周血T细胞的极少部分(<5％)，但其在表皮及粘膜等上皮组织中含量丰富。
[0003]虽然γδT细胞的发现晚于αβT细胞，但是在生物进化过程中，γδT细胞的发生出现在生物的免疫系统进化出适应性免疫的早期，且要早于αβT细胞。由于它在进化中的特殊地位，γδT细胞虽然是适应性免疫的一部分，但仍保留了固有免疫的功能与特性。由于这种“双重”特性，γδT细胞被称为“沟通固有免疫和适应性免疫的桥梁”。γδT细胞具有多种生物学功能：1)可以分泌细胞因子介导炎症反应；2)促进B淋巴细胞分泌抗体及诱导抗体的类别转换；3)识别肿瘤抗原具有MHC非限制性且不需特异的抗原呈递，通过细胞毒活性作用直接裂解靶细胞；4)发挥免疫调节作用。
[0004]近年来，肿瘤过继免疫治疗在血液系统肿瘤中取得突破性进展，而在实体瘤治疗中由于肿瘤微环境内的免疫抑制作用受到极大的限制。研究发现γδT细胞能够有效渗入实体肿瘤中发挥抗肿瘤作用。抗体固相化体外扩增是获得γδT细胞的一个重要手段，然而目前在抗体固相化体外扩增方法中刺激γδT细胞增殖的γδTCR单克隆抗体多为鼠源性抗体，而鼠源性的单克隆抗体应用于人体治疗时存在诸多问题：一是不能有效地激活人体中补体和Fc受体相关的效应系统；二是被人体免疫系统所识别，产生人抗鼠抗体；三是在人体循环系统中被很快清除掉。因此，鼠源性抗γδTCR单克隆抗体在临床治疗中受到很多限制。现有技术中还没有关于人源化抗人γδTCR单克隆抗体的报道。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术一个方面提供一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体，其重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成，轻链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或由其组成。
[0006]在一些实施方式中，所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链恒定区包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其组成，轻链恒定区包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其组成。
[0007]在一些实施方式中，所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或由其组成，轻链包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或由其组成。
[0008]本专利技术另一方面提供一种编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的基因；优选地，其中编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链的基因包含如SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列或由其组成，编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的轻链的基因包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列或由其组成。
[0009]本专利技术另一方面还提供一种含有编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。
[0010]本专利技术再一方面提供一种制备所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的方法，其包括以下步骤：
[0011]1)将鼠源抗人γδTCR单克隆抗体的重轻链可变区的CDR分别移植到人源化重轻链可变区模板中，分别得到人源化抗体重轻链可变区的氨基酸序列，其中所得人源化抗体重链可变区包含如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成，所得人源化抗体轻链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或由其组成；
[0012]2)将步骤1)所得人源化抗体重轻链可变区的氨基酸序列分别与人源化抗体重轻链恒定区的氨基酸序列连接，分别得到人源化抗体的重链和轻链的氨基酸序列；
[0013]3)将步骤2)所得人源化抗体的重链和轻链的氨基酸序列进行逆翻译后，分别得到人源化抗体的重链和轻链的编码基因；和
[0014]4)对步骤3)所得人源化抗体的重链和轻链的编码基因进行真核表达，得到所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体。
[0015]在一些实施方式中，所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体在活化扩增γδT细胞中的应用也属于本专利技术的内容。
[0016]在一些实施方式中，所述活化扩增γδT细胞的方式包括固相化体外扩增。
[0017]在一些实施方式中，所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体还联合细胞因子对所述γδT细胞进行活化扩增；可选地，所述细胞因子包括IL
‑
15、IL
‑
21、或其组合。
[0018]在一些实施方式中，所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体或由所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体扩增获得的γδT细胞在制备杀伤肿瘤细胞的药物中的应用也属于本专利技术的内容。
[0019]在一些实施方式中，所述肿瘤细胞包括但不限于Daudi细胞、K562细胞、OVCAR
‑
8细胞、HepG2细胞和SW480细胞。
[0020]基于以上技术方案提供的人源化抗人γδTCR单克隆抗体由鼠源单克隆抗体经重轻链可变区的CDR移植获得，得到的人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。实施例结果表明，本专利技术提供的人源化抗人γδTCR单克隆抗体(任选地还可联合细胞因子，例如IL
‑
15、IL
‑
21、或其组合)能够在体外刺激人PBMC中的γδT细胞增殖，11天时其纯度可达70％以上，优选可达90％以上，且增殖获得的γδT细胞能高效分泌细胞因子IFN
‑
γ、TGF
‑
α和CD107α，并能有效杀伤多种肿瘤细胞，包括Daudi细胞、K562细胞、OVCAR
‑
8细胞、HepG2细胞和SW480细胞，因此由本专利技术提供的人源化抗人γδTCR单克隆抗体体外刺激扩增获得的γδT细胞对肿瘤细胞具有较好的细胞毒作用，可用于临床上肿瘤的过继免疫治疗。
[0021]此外，本专利技术提供的人源化抗人γδTCR单克隆抗体作为一种高度人源化抗体，其本身也具有多种优势：(1)由于不含有作为异源物质的鼠源单克隆抗体，且不含有在制备鼠
源单克隆抗体可能引入的小鼠腹水中的鼠源病毒，因此不会使患者产生人抗鼠抗体反应，且可以提高临床应用的安全性；(2)人源化单克隆抗体作为一种重组抗体，可以由真核表达体系表达，因此可以大规模生产临床级别的抗体，降低成本，并保证产品的一致本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人源化抗人γδTCR单克隆抗体，其重链可变区包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或由其组成，轻链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或由其组成。2.根据权利要求1所述的人源化抗人γδTCR单克隆抗体，其重链铰链区和恒定区包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或由其组成，轻链恒定区包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列或由其组成。3.根据权利要求1或2所述的人源化抗人γδTCR单克隆抗体，其重链包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或由其组成，轻链包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或由其组成。4.一种编码权利要求1
‑
3中任一项所述的人源化抗人γδTCR单克隆抗体的基因；优选地，其中编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的重链的基因包含如SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:16所示的核苷酸序列或由其组成，编码所述人源化抗人γδTCR单克隆抗体的轻链的基因包含如SEQ ID NO:14所示的核苷酸序列或由其组成。5.含有权利要求4所述的基因的表达载体、转基因细胞系和宿主菌。6.一种制备权利要求1
‑
3中任一项所述的人源化抗人γδTCR单克隆抗体的方法，其包括以下步骤：1)将鼠源抗人γδTCR单克隆抗体的重轻链可变区的CDR分别移植到人源化重轻链可变区模板中，分别得到人源化抗体重轻链可变区的氨基酸序列，其中所得人源化抗体重链可变区包含如...

【专利技术属性】
技术研发人员：何维，蔡孟华，张建民，陈慧，胡愉，许依，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：