一种IgA血管炎人源菌群小鼠模型及构建方法技术

本发明专利技术公开了一种IgA血管炎人源菌群小鼠模型及构建方法，属于生物技术领域。所述的模型分为IgA血管炎初发模型和IgA血管炎复发模型，所述的模型肠道菌群具有供体IgA血管炎症患者特征的肠道微生物。所述的构建方法采用小鼠灌胃的方式进行粪菌移植。本发明专利技术操作简便，建模成功率高，为探索IgA血管炎发生与肠道微生物相关的机制提供了研究模型。生物相关的机制提供了研究模型。生物相关的机制提供了研究模型。

【技术实现步骤摘要】
一种IgA血管炎人源菌群小鼠模型及构建方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种IgA血管炎人源菌群小鼠模型及构建方法。

技术介绍

[0002]IgA血管炎(Immunoglobulin A vasculitis，IgAV)也称为过敏性紫癜(Henoch
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Scholein Purpura，HSP)，是由IgA介导的免疫性小血管炎，多发生于学龄期儿童，最常累及皮肤，还可伴有关节、胃肠道及肾脏受累。目前IgAV的发病机制尚未阐明。研究表明肠道微生物与IgAV密切关联，并在IgAV的发病机制中起着重要作用。研究发现IgAV患儿临床表现与特定肠道微生物相关，然而，肠道微生物在IgAV患儿发病过程中的具体机制尚不清楚，鉴于相关机制研究在人体进行受到伦理道德限制，故需选择合适的动物定植IgAV患儿特征肠道微生物用于机制研究。目前尚无经典IgAV动物疾病模型可用于肠道微生物与IgAV相关性研究，人源菌群(Human flora
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associated，HFA)小鼠是将人类肠道微生物移植到小鼠肠道中构建的小鼠模型，可用于肠道微生物经肠黏膜免疫介导相关疾病的机制研究。

技术实现思路

[0003]为此，需要提供一种操作简单，真实反应IgAV疾病状况的动物模型，供后续研究。
[0004]为实现上述目的，专利技术人提供了如下技术方案：
[0005]一种IgA血管炎人源菌群小鼠模型，包括IgA血管炎初发模型和IgA血管炎复发模型，所述的初发模型肠道菌群具有供体IgA血管炎症初发患者特征的肠道微生物，包括普雷沃氏菌属(Prevotella)、Paraprevotella、双歧杆菌属(Bifidobacterium)中的一种以上；所述的复发模型肠道菌群具有IgA降解性肠道共生菌，包括产碱杆菌科细菌。
[0006]进一步的，所述的初发模型肠道微生物还包括葡萄球菌属、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、伯克氏菌属、萨特氏菌属、柯林斯氏菌属(Collinsella)、Catenibacterium、梭杆菌属(Fusobacterium)中的一种以上；所述的复发模型肠道微生物还包括梭状芽胞杆菌属(Clostridium)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、微小杆菌属(Exiguobacterium)、Paenisporosarcina、Akkermansia、不动杆菌属(Acinetobacter)、短状杆菌属(Brachybacterium)、F16科、梭杆菌属中的一种以上。
[0007]所述的IgA血管炎人源菌群小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：
[0008]菌液的制备：收集IgA血管炎初发或复发患者的粪便样本，加入生理盐水(1g粪便：15mL生理盐水)，混合均匀，得到混悬液；过滤混悬液，除去残渣后，离心(5000r/min，3min)，收集上清菌液备用；
[0009]粪菌移植(FMT)：采用灌胃的方式将上一步制备的菌液灌入小鼠胃内，连续灌胃3～4天；
[0010]模型建立：第一次灌胃后，连续饲养小鼠7～21天，按昼夜明暗交替保持12/12小时光照/黑暗循环，自由摄食饮水。
[0011]进一步的，所述的IgA血管炎人源菌群小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：
[0012]粪菌悬液制备：收集初发或复发IgA血管炎患者的粪便80～100g，加入180～220ml生理盐水，过滤后获得粪菌悬液；粪菌悬液与甘油按体积比(4.5～5.5):1混合均匀，离心，弃去上清液；沉淀再次高速冷冻离心，弃去上清液；
[0013]粪菌胶囊制备：将沉淀物置入胶囊中，并封闭；
[0014]粪菌移植：采用灌胃的方式将上一步制备的胶囊灌入小鼠胃内，连续灌胃3
‑
4天；
[0015]模型建立：第一次灌胃后，连续饲养小鼠7～21天。
[0016]进一步的，所述的粪菌胶囊制备方法为将沉淀物置入抗酸2号胶囊(体积约0.37ml)并封闭；或将沉淀物置入1号明胶胶囊(体积约0.50ml)，再分别使用0号胶囊(体积约0.68ml)和00号胶囊(体积约0.93ml)重封2次；或将沉淀物置入0号明胶胶囊中并封闭，再采用00号耐酸羟丙甲纤维素胶囊进行二次封闭。
[0017]进一步的，根据不同菌属定植时间确定灌胃后的饲养时间。其中，在IgA血管炎初发患者人源菌群小鼠模型中，葡萄球菌属在FMT后0～7d定植，肠杆菌科在FMT后7～14d定植，伯氏菌目(包括伯克氏菌属、萨特氏菌属)、柯林斯氏菌属、Catenibacterium、梭杆菌属在FMT后14～21d定植；在IgA血管炎复发患者人源菌群小鼠模型中，微小杆菌属、Paenisporosarcina、Akkermansia在FMT后0～7d定植，不动杆菌属在FMT后7～14d定植，短状杆菌属、F16科、梭杆菌属在FMT后14～21d定植。
[0018]进一步的，所述的IgA血管炎患者的纳入标准为：年龄＜18岁，性别不限；可触性皮疹并伴以下任何一条：
①
腹痛，
②
关节炎/关节痛，
③
血尿和/或蛋白尿，
④
任何部位活检提示IgA沉积。
[0019]进一步的，所述的小鼠选用SPF级C57BL/6J小鼠。
[0020]进一步的，所述的小鼠的灌胃量为200～300μL/次，灌胃频次每天至少1次。
[0021]进一步的，所述的复发IgA血管炎患者粪便样本菌群结构为Burkholderiaceae科丰度1.2～1.5％，红蝽菌科丰度0.1～0.3％，韦荣球菌科丰度0.1～0.4％，肠杆菌科丰度13.5～15％。
[0022]进一步的，所述的复发模型血清IL
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17A≥25.10pg/ml，IL
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21≥89.95pg/ml。
[0023]建模成功的判断方法：在IgAV初发患者人源菌群小鼠中检测出特征菌属(普雷沃氏菌属和Paraprevotella)，在IgAV复发患者人源菌群小鼠中检测出IgAV复发患者特征菌属(梭状芽胞杆菌属或产碱杆菌科细菌)；并且上述特征菌属为IgAV初发患者与IgAV复发患者、IgAV初发患者人源菌群小鼠和IgAV复发患者人源菌群小鼠的差异菌属，即代表IgAV初发与复发患者的差异菌属成功转移至小鼠肠道中。在复发模型的小鼠血清中可以检测到IgA和B细胞激活因子(B
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cellactivatingfactor，BAFF)、白细胞介素(Interleukin，IL)
‑
17A、IL
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21升高，其中IL
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17A、IL
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21显著升高。
[0024]进一步的，IgA血管炎人源菌群小鼠模型在筛选治疗IgA血管炎药物中的应用。
[0025]进一步的，IgA血管炎人源菌群小鼠模型的检测试剂盒，包括普雷沃氏菌属、Paraprev本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IgA血管炎人源菌群小鼠模型，包括IgA血管炎初发模型和IgA血管炎复发模型，其特征在于，所述的初发模型肠道菌群具有供体IgA血管炎症初发患者特征的肠道微生物，包括普雷沃氏菌属、Paraprevotella、双歧杆菌属中的一种以上；所述的复发模型肠道菌群具有IgA降解性肠道共生菌，包括产碱杆菌科。2.根据权利要求1所述的IgA血管炎人源菌群小鼠模型，其特征在于，所述的初发模型肠道微生物还包括葡萄球菌属、肠杆菌科、伯克氏菌属、萨特氏菌属、柯林斯氏菌属、Catenibacterium、梭杆菌属中的一种以上；所述的复发模型肠道微生物还包括梭状芽胞杆菌属、葡萄球菌属、微小杆菌属、Paenisporosarcina、Akkermansia、不动杆菌属、短状杆菌属、F16科、梭杆菌属中的一种以上。3.一种如权利要求1或2所述的IgA血管炎人源菌群小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：菌液制备：收集IgA血管炎初发或复发患者的粪便样本，加入生理盐水，混合均匀，得到混悬液；过滤混悬液，除去残渣后，离心，收集上清菌液备用；粪菌移植：采用灌胃的方式将上一步制备的菌液灌入小鼠胃内，连续灌胃3
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4天；模型建立：第一次灌胃后，连续饲养小鼠7～21天，光照/黑暗循环进行昼夜明暗交替，自由摄食饮水。4.一种如权利要求1或2所述的IgA血管炎人源菌群小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：粪菌悬液制备：收集初发或复发IgA血管炎患者的粪便80～100g，加入180～220ml生理盐水，过滤后获得粪菌悬液；粪菌悬...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂晓晶，陈伊，曾煜闺，冯爱，陈君妍，张远真，
申请(专利权)人：中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院，
类型：发明
国别省市：