本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其涉及以NLRC3为靶点在制备治疗脓毒症继发感染的药物中的应用。本发明专利技术提供了髓系NLRC3抑制剂或巨噬细胞特异性NLRC3抑制剂在制备用于治疗/缓解脓毒症小鼠免疫抑制继发感染中的应用，所述NLRC3抑制剂具备阻断髓系NLRC3的功能。本发明专利技术研究发现：在脓毒症小鼠模型中，髓系特异性或巨噬细胞特异性NLRC3下调可提高脓毒症免疫抑制宿主继发感染时机体清除细菌的能力及生存率。进而为该类患者的治疗提供了一种新的有效的基因治疗方法，在提高脓毒症宿主继发感染的生存率方面，有较好的应用前景。有较好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
以NLRC3为靶点在制备治疗脓毒症继发感染的药物中的应用
[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及以NLRC3为靶点在制备治疗脓毒症继发感染的药物中的应用。
技术介绍
[0002]脓毒症是宿主对感染的免疫失调而导致危及生命的器官功能障碍的临床综合征，一直以来都是重症监护病房内患者死亡的首要原因。当前除了传统的液体复苏、抗感染、对症支持之外，尚无有效的治疗方法。因此，研发防治脓毒症的新策略，仍是当前亟待攻克的难题。
[0003]研究显示，绝大多数幸存脓毒症宿主起病后持续数天甚至数周内，便表现出免疫抑制，在这期间，宿主极容易发生继发性感染而增加死亡，然而，大部分继发感染病原体是多种耐药菌，这极大地增加了感染控制难度。因此，控制脓毒症免疫抑制宿主继发感染可能降低脓毒症病死率的重要途径。
[0004]当前，免疫细胞功能紊乱被认为是脓毒症继发感染重要发病机制。单核/巨噬细胞是这些免疫细胞中最重要的一种，它具有识别、摄取并杀灭入侵的微生物，释放促炎症介质和抗原呈递等功能，其功能失活将使机体无法及时有效地识别、摄取及清除病原菌，进而诱发机体遭受继发感染。目前，现有技术中缺乏有效的医疗方法以降低脓毒继发感染发生率。因此，针对单核巨噬细胞，探寻新的治疗方法可能是防治脓毒症免疫抑制宿主继发感染的一种有潜在价值的策略。
[0005]NOD样受体家族蛋白3(NLRC3)是一种新发现的由第16号染色体的基因所编码的在进化上高度保守、主要表达于单核/巨噬细胞、T细胞等免疫细胞的胞浆蛋白，它可以降低CD4+T细胞和巨噬细胞的免疫活性。然而目前，尚未有证据表明NLRC3能够作为脓毒症的治疗靶点。
技术实现思路
[0006]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供以NLRC3为靶点在制备治疗脓毒症继发感染的药物中的应用。
[0007]本专利技术提供了NLRC3抑制剂在制备治疗和/或改善脓毒症继发感染的药物中的应用。
[0008]本专利技术中，所述治疗和/或改善包括：提高生存率和/或提高病原菌清除能力。
[0009]本专利技术中，所述病原菌包括脓毒症继发感染的病原菌，其包括病原真菌和/或病原细菌。一些实施例中，以铜绿假单胞菌验证NLRC3抑制剂对病原菌的清除能力。
[0010]具体的，所述病原菌清除包括清除外周血和/或肺部的病原菌。
[0011]本专利技术中所述NLRC3抑制剂是优选为靶向髓系细胞NLRC3的抑制剂，更具体的，其为靶向巨噬细胞NLRC3的抑制剂。
[0012]本专利技术揭示了靶向下调巨噬细胞NLRC3表达在脓毒症免疫抑制继发感染中的作
用。依据包括两方面，一方面，单核巨噬细胞中NLRC3表达升高且与脓毒症宿主免疫抑制继发感染密切相关。另一方面，髓系特异性NLRC3敲除或靶向下调巨噬细胞NLRC3表达可缓解脓毒症小鼠免疫抑制继发感染。
[0013]本专利技术还提供了治疗和/或改善脓毒症继发感染的药物，其包括NLRC3抑制剂。
[0014]一些实施例中，所述NLRC3抑制剂包括如下I)～III)中的任意一种：
[0015]I)、敲除或敲低NLRC3的试剂；
[0016]II)、抑制NLRC3活性的试剂；
[0017]III)、提高NLRC3抑制物的水平或活性的物质。
[0018]一些具体实施例中，所述NLRC3抑制剂为NLRC3的siRNA，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0019]一些具体实施例中，所述NLRC3抑制剂为NLRC3的shRNA，其核酸序列如SEQ ID NO:5所示。
[0020]一个具体实施例中，本专利技术所述的药物包括稀释液和携带NLRC3的shRNA的慢病毒载体；所述慢病毒载体的骨架载体为pHBAAV系列载体。
[0021]更进一步的，本专利技术所述药物中NLRC3抑制剂是靶向髓系细胞的抑制剂。更具体的，本专利技术所述药物中的NLRC3抑制剂是靶向巨噬细胞的抑制剂。在本专利技术中，所述抑制剂为慢病毒载体或者腺病毒、腺相关病毒载体，其中含有巨噬细胞特异性启动子。一些具体实施例中，所述pHBAAV系列载体包括：核酸序列如SEQ ID NO:5所示片段、巨噬细胞特异性启动子SP146、AAV片段和CMV启动子。
[0022]本专利技术中，所述药物的剂型为注射剂，其包括注射液剂和/或注射用粉针剂。其中稀释液选自PBS缓冲液。其中病毒颗粒浓度为0.05
×
10
10
个/μL～0.05
×
10
12
个/μL，一些具体实施例中，所述药物中病毒颗粒的浓度为0.05
×
10
11
个/μL。
[0023]本专利技术还提供了治疗和/或改善脓毒症继发感染的方法，其包括给予本专利技术所述的药物。
[0024]本专利技术提供了巨噬细胞NLRC3抑制剂在制备用于治疗/缓解脓毒症小鼠免疫抑制继发感染中的应用，所述NLRC3抑制剂具备阻断巨噬细胞NLRC3的功能。本专利技术还研究发现：在脓毒症小鼠模型中，髓系特异性NLRC3敲除或巨噬细胞NLRC3抑制剂可提高脓毒症免疫抑制宿主继发感染时机体清除病原菌的能力及的生存率。进而为该类患者的治疗提供了一种新的有效治疗方法，在提高脓毒症宿主继发感染的生存率方面，有较好的应用前景。
附图说明
[0025]图1示脓毒症患者单核细胞NLRC3表达(左)，NLRC3表达预测脓毒症继发感染的曲线下面积(AUC)(右)；
[0026]图2示髓系特异性NLRC3敲除对脓毒症小鼠继发铜绿假单胞菌(PA)感染时的生存曲线；
[0027]图3示髓系特异性NLRC3敲除小鼠继发细菌感染后肺匀浆中TNF
‑
α、IL
‑
6和IL
‑
1β(A)，以及肺匀浆、外周血中的细菌负荷(B)；
[0028]图4中A为巨噬细胞特异性NLRC3基因下调载体示意图，B和C为AAV载体转染后肺泡巨噬细胞和肺巨噬细胞GFP荧光强度；D为Mir30
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Nlrc3序列信息；
[0029]图5示巨噬细胞特异性NLRC3基因下调载体感染小鼠肺泡巨噬细胞(AMs)、肺巨噬细胞(LMs)及肺泡上皮细胞(LECs)NLRC3表达(A)，继发铜绿假单胞菌(PA)后小鼠生存曲线(B)，肺匀浆和外周血细菌负荷(C)以及肺匀浆中TNF
‑
α、IL
‑
6和IL
‑
1β(D)；
[0030]图6示AAV2/9
‑
SP146
‑
mir30
‑
m
‑
Nlrc3
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GFP质粒图谱。
具体实施方式
[0031]本专利技术提供了NLRC3在制备治疗脓毒症继发感染的药物中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.NLRC3抑制剂在制备治疗和/或改善脓毒症继发感染的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述治疗和/或改善包括：提高生存率和/或提高病原菌清除能力。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述提高病原菌清除能力包括提高清除铜绿假单胞菌的能力。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述病原菌清除包括清除外周血和/或肺部的病原菌。5.治疗和/或改善脓毒症继发感染的药物，其特征在于，包括NLRC3抑制剂。6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述NLRC3抑制剂包括如下如下I)～III)中的任意一种：I)、敲除或敲低NLRC3的试剂；II)、抑制NLRC3活性的试剂；III)、提高...
【专利技术属性】
技术研发人员：尚游，徐继前，姚尚龙，周洁，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：
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