一种重组人分泌型DDRGK1-Fc及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种重组人分泌型DDRGK1

【技术实现步骤摘要】
一种重组人分泌型DDRGK1
‑
Fc及其应用


[0001]本专利技术属于骨与关节疾病治疗领域，特别涉及一种重组人分泌型DDRGK1
‑
Fc及其应用。

技术介绍

[0002]目前对于骨相关疾病的治疗主要是予以药物或手术治疗，其中手术的创伤过大常导致骨折的延迟愈合以及不愈合，对于这种情况常缺乏有效的促进成骨方案。对于骨质疏松，往往仅能通过药物进行提升骨量的防治，目前没有有效的手术疗法。
[0003]DDRGK1由314个氮基酸组成，其中1
‑
28为信号肽部分，决定DDRGK1在内质网定位或外分泌。研究发现：DDRGK1和UFL1主要定位于内质网，DRGK1和UFL1可作为Ufm1的底物，从而参与类泛素化修饰过程，在该过程中DDRGK1蛋白267位点的赖氨酸残基对于其与UFM1的结合至关重要(A Novel Type of E3 Ligase for the Ufm1 Conjugation System，2010)。在胰腺朗格汉斯细胞和其他分泌细胞中发现类泛素化相关蛋白包括UFM1,UFL1,DDRGK1和CDK5RAP3高表达，UFM1的内质网定位需要依赖于DDRGK1的结合，发现UFM1或DDRGK1的蛋白沉默可诱导胰腺B细胞内质网应激并促进细胞凋亡，因此UFM1
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DDRGK1介导的类泛素化修饰参与调控内质网应激诱导的细胞凋亡(Ubiquitin fold modifier 1(UFM1)and its target UFBP1 protect pancreatic beta cells from ER stress
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induced apoptosis，2011)。DDRGK1与IkBα直接结合，抑制其磷酸化及泛素化降解，从而增强IkBa稳定性，DDRGK1敲除可抑制NF
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Kb信号通路(DDRGK1 regulates NF
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kB activity by modulating IκBαstability，2013)。
[0004]Fc相当于IgG的CH2和CH3功能区，得名于其可结晶的化学特征(Fragment crystallizable)，其无抗原结合活性，但具有固定补体、结合Fc受体等功能。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种重组人分泌型DDRGK1
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Fc及其应用，本专利技术经过实验论证，合成重组人分泌型DDRGK1
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Fc，具有较好的促成骨功能，并应用于制备治疗骨与关节相关疾病、促进软骨形成、促进椎间盘形成的药物，为骨与关节疾病的治疗打开了新的思路并取得了较为坚实的科学证据。
[0006]本专利技术提供一种重组人分泌型DDRGK1
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Fc，所述DDRGK1
‑
Fc包括切除1
‑
28位点的从定位为细胞膜转变成分泌型的重组人分泌型DDRGK1，所述DDRGK1的N端连接HA，所述DDRGK1的C末端连接Fc片段。
[0007]优选地，所述HA的氨基酸序列：MKTIIALSYIFCLVFAGRA。
[0008]优选地，所述Fc片段氨基酸序列：
[0009]DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS
LSLSPGK。
[0010]本专利技术还提供一种重组人分泌型DDRGK1
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Fc在制备治疗骨与关节相关疾病的药物中的应用。
[0011]优选地，应用于制备治疗骨质疏松、骨折或骨缺损的药物。
[0012]本专利技术还提供一种重组人分泌型DDRGK1
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Fc在制备促进软骨形成的药物中的应用。
[0013]本专利技术还提供一种重组人分泌型DDRGK1
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Fc在制备促进椎间盘形成的药物中的应用。
[0014]本专利技术还提供一种包括上述的重组人分泌型DDRGK1
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Fc的药物。
[0015]优选地，所述药物的剂型选自注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。
[0016]有益效果
[0017]本专利技术经过实验论证，合成重组人分泌型DDRGK1
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Fc，具有较好的促成骨功能，并应用于制备治疗骨与关节相关疾病、促进软骨形成、促进椎间盘形成的药物，为骨与关节疾病的治疗打开了新的思路并取得了较为坚实的科学证据。
附图说明
[0018]图1为重组人分泌型DDRGK1
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Fc的表达构建体示意图。
[0019]图2为改用HA信号肽的重组人分泌型DDRGK1和DDRGK1的表达构建体示意图以及蛋白胶图。
[0020]图3为重组人分泌型DDRGK1
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Fc和改用HA信号肽的重组人分泌型DDRGK1蛋白纯化胶图。
[0021]图4中A为分泌型DDRGK1和重组人分泌型DDRGK1
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Fc的体外成骨数据，B为小鼠胫骨缺损注射蛋白后7天的μCT分析图，其中1号框为分泌型DDRGK1蛋白组，2号框为重组人分泌型DDRGK1
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Fc蛋白组，C为小鼠胫骨缺损注射蛋白后骨小梁数目(Tb.N)的统计分析图，D为小鼠胫骨缺损注射蛋白后骨体积分数(BV/TV)的统计分析图。
[0022]图5为分泌型DDRGK1蛋白、分泌型DDRGK1
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Fc蛋白与细胞内DDRGK1蛋白的成骨效果比较，其中(A)为使用1％茜素红S溶液对细胞外基质钙沉积的观察，(B)为茜素红染色面积百分比指标。
具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0024]实施例1
[0025](1)实验材料
[0026]1.1仪器：高速离心机(贝克曼Avanti JXN
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26)，哺乳细胞摇床(永联生物科技有限公司)AKTA PURE(GE)
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人分泌型DDRGK1
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Fc，所述DDRGK1
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Fc包括切除1
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28位点的从定位为细胞膜转变成分泌型的重组人分泌型DDRGK1，所述DDRGK1的N端连接HA，其特征在于，所述DDRGK1的C末端连接Fc片段。2.根据权利要求1所述的重组人分泌型DDRGK1
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Fc，其特征在于，所述HA的氨基酸序列：MKTIIALSYIFCLVFAGRA。3.根据权利要求1所述的重组人分泌型DDRGK1
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Fc，其特征在于，所述Fc片段氨基酸序列：DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELT...

【专利技术属性】
技术研发人员：周唐峻，夏莹，杨骁，秦安，曹禹，赵杰，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：