一种喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法技术

本申请提供一种喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法，具有整体性、模糊性、特征性强等特点，能够全面地反映出中药化学成分之间的关系，展示出中药内在关系的完整面貌，是目前对中药复方制剂进行质量控制的一种可行模式。另外采用HPLC指纹图谱对喉咽清进行质量控制，优点是相对薄层扫描法，高效液相色谱仪具有精密度和准确性高、稳定性好，成本低等优点，且本发明专利技术方法对于喉咽清样品处理简单，不需要像现行《中国药典》喉咽清质量控制项进行水解、萃取等复杂操作。操作。操作。

【技术实现步骤摘要】
一种喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法


[0001]本申请涉及医药
，具体涉及一种喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法。

技术介绍

[0002]咽炎分为急性咽炎和慢性咽炎。急性咽炎为咽部黏膜及黏膜下组织的急性炎症，咽淋巴组织常被累及，炎症早期可局限，随病情进展常可涉及整个咽腔，以秋冬及冬春之交较常见。主要表现为咽部干燥，灼热，疼痛，吞咽疼痛明显，咽部充血肿胀等。慢性咽炎又可分为慢性单纯性咽炎、慢性肥厚性咽炎和萎缩性咽炎，其中慢性单纯性咽炎较多见，病变主要在黏膜层，表现为咽部黏膜慢性充血，黏膜及黏膜下结缔组织增生，黏液腺可肥大，分泌功能亢进，黏液分泌增多。患者常咯出咽内黏痰，或感觉咽部有异物感，咯不出，咽不下。病程长，易复发，症状顽固。
[0003]现行《中国药典》关于喉咽清口服液的质量标准，含量测定项中是先将样品水解、石油醚萃取后，通过薄层层析分离采用薄层色谱扫描法，测定水解产物中齐墩果酸的含量，但通过水解方式所得到的该成分是多种皂苷的苷元，而不是单一成分，故无法全面控制该制剂质量，且采用薄层色谱扫描法进行定量实验，无论准确性、稳定性还是精密度上都不好，薄层色谱扫描法用于定量研究已经处于逐步被取消境地。另外现行通过水解方式测定齐墩果酸的含量，齐墩果酸是多种皂苷的苷元而不是喉咽清的单一活性指标成分，因而不能精准的控制喉咽清的质量。

技术实现思路

[0004]本申请为了解决现有的方法通过薄层色谱扫描法测定水解产物中齐墩果酸的含量，但通过水解方式所得到的该成分是多种皂苷的苷元，而不是单一成分，故无法全面控制该制剂质量，故质量控制标准存在准确性、稳定性、精密度都不理想的问题，提供一种处理简便、精密度和准确性高、稳定性好、成本低的喉咽清质量控制方法，为不同批次的喉咽清在质量控制与整体评价方面提供可参考的方法的喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法。
[0005]一种喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
[0006]S1、供试品溶液的制备：准确称取喉咽清，加入甲醇溶液超声提取后稀释定容，混合完全使用0.45μm的微孔滤膜过滤，得供试品溶液；
[0007]S2、对照品溶液的制备：精密称取对照品绿原酸、阿魏酸、大车前苷、β
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蜕皮甾酮、R
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牛膝甾酮、S
‑
牛膝甾酮、异绿原酸A、异绿原酸C，以甲醇为溶剂，配制成绿原酸浓度为0.11mg/mL、阿魏酸浓度为0.30mg/mL、大车前苷浓度为0.27mg/mL、β
‑
蜕皮甾酮浓度为0.08mg/mL、R
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牛膝甾酮浓度为0.05mg/mL、S
‑
牛膝甾酮浓度为0.06mg/mL、异绿原酸A浓度为0.35mg/mL、异绿原酸C浓度为0.31mg/mL的混合对照品溶液；
[0008]S3、色谱条件：色谱柱为C
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反相色谱柱；柱温为20～40℃，检测波长为250nm，采用流动相A为乙腈，流动相B为0.1％体积浓度的磷酸水溶液，总流速为0.8～1mL/min；进行梯度洗脱；
[0009]S4、测定：吸取供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪中，用步骤S3的高效液相色谱检测，匹配24个共有峰，确定8个特征峰，建立喉咽清指纹图谱。
[0010]优选的，所述步骤S1供试品溶液的制备方法中，供试品喉咽清与甲醇的比例为1:10。
[0011]优选的，所述步骤S1供试品溶液的制备方法中，超声提取的功率为250W，频率为40kHz，提取1h。
[0012]优选的，所述步骤S2对照品溶液的制备方法中，具体包括：精密称取对照品绿原酸、阿魏酸、大车前苷、β
‑
蜕皮甾酮、R
‑
牛膝甾酮、S
‑
牛膝甾酮、异绿原酸A、异绿原酸C，以甲醇为溶剂，以频率40kHz超声3min，混匀后采用0.45μm微孔滤膜过滤，即得混合对照品溶液。
[0013]优选的，所述步骤S3色谱条件中所述的梯度洗脱，梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行：
[0014]0～8min时，流动相A为10％的乙腈溶液；
[0015]8～25min时，流动相A为10～13％的乙腈溶液；
[0016]25～35min时，流动相A为13～15％的乙腈溶液；
[0017]35～50min时，流动相A为15～20％的乙腈溶液；
[0018]50～55min时，流动相A为20％的乙腈溶液；
[0019]55～75min时，流动相A为20～25％的乙腈溶液；
[0020]75～85min时，流动相A为25％的乙腈溶液；
[0021]90min时，流动相A为10％的乙腈溶液。
[0022]优选的，所述步骤S3的色谱条件中所述的色谱柱，柱长为150mm，内径为4.6mm，粒径为5μm；所述的色谱柱，柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.7μm。
[0023]优选的，所述步骤S4中8个特征峰分别为：6号峰绿原酸、13号峰阿魏酸、14号峰大车前苷、15号峰β
‑
蜕皮甾酮、17号峰R
‑
牛膝甾酮、18号峰S
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牛膝甾酮、20号峰异绿原酸A和22号峰异绿原酸C；其中15号峰为参照峰。
[0024]优选的，所述6号峰绿原酸的相对保留时间t
R
为0.382；
[0025]所述13号峰阿魏酸的相对保留时间t
R
为0.915；
[0026]所述14号峰大车前苷的相对保留时间t
R
为1.000；
[0027]所述15号峰β
‑
蜕皮甾酮的相对保留时间t
R
为1.017；
[0028]所述17号峰R
‑
牛膝甾酮的相对保留时间t
R
为1.063；
[0029]所述18号峰S
‑
牛膝甾酮的相对保留时间t
R
为1.092；
[0030]所述20号峰异绿原酸A的相对保留时间t
R
为1.260；
[0031]所述22号峰异绿原酸C的相对保留时间t
R
为1.393。
[0032]优选的，所述步骤S1供试品的制备方法中，喉咽清为喉咽清颗粒、喉咽清颗粒(无蔗糖)或喉咽清口服液中的任意一种。
[0033]优选的，所述步骤S1供试品的制备方法，具体包括以下步骤：取装量差异项下的喉咽清颗粒或喉咽清颗粒(无蔗糖)，混匀，研细，按比例精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇，密塞，称定重量，超声处理1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0034]按比例精密量取喉咽清口服液，置于容器中，加入甲醇，摇匀，离心，取上清液，滤
过，取续滤液，即得。
[0035]与现有技术相比，本申请的有益效果如下：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、供试品溶液的制备：准确称取喉咽清，加入甲醇溶液超声提取后稀释定容，混合完全使用0.45μm的微孔滤膜过滤，得供试品溶液；S2、对照品溶液的制备：精密称取对照品绿原酸、阿魏酸、大车前苷、β
‑
蜕皮甾酮、R
‑
牛膝甾酮、S
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牛膝甾酮、异绿原酸A、异绿原酸C，以甲醇为溶剂，配制成绿原酸浓度为0.11mg/mL、阿魏酸浓度为0.30mg/mL、大车前苷浓度为0.27mg/mL、β
‑
蜕皮甾酮浓度为0.08mg/mL、R
‑
牛膝甾酮浓度为0.05mg/mL、S
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牛膝甾酮浓度为0.06mg/mL、异绿原酸A浓度为0.35mg/mL、异绿原酸C浓度为0.31mg/mL的混合对照品溶液；S3、色谱条件：色谱柱为C
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反相色谱柱；柱温为20～40℃，检测波长为250nm，采用流动相A为乙腈，流动相B为0.1％体积浓度的磷酸水溶液，总流速为0.8～1mL/min；进行梯度洗脱；S4、测定：吸取供试品溶液、对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪中，用步骤S3的高效液相色谱检测，匹配24个共有峰，确定8个特征峰，建立喉咽清指纹图谱。2.根据权利要求1所述的喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤S1供试品溶液的制备方法中，供试品喉咽清与甲醇的比例为1:10。3.根据权利要求1所述的喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤S1供试品溶液的制备方法中，超声提取的功率为250W，频率为40kHz，提取1h。4.根据权利要求1所述的喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤S2对照品溶液的制备方法中，具体包括：精密称取对照品绿原酸、阿魏酸、大车前苷、β
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蜕皮甾酮、R
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牛膝甾酮、S
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牛膝甾酮、异绿原酸A、异绿原酸C，以甲醇为溶剂，以频率40kHz超声3min，混匀后采用0.45μm微孔滤膜过滤，即得混合对照品溶液。5.根据权利要求1所述的喉咽清HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：所述步骤S3色谱条件中所述的梯度洗脱，梯度洗脱程序以如下体积浓度配置进行：0～8min时，流动相A为10％的乙腈溶液；8～25min时，流动相A为10～13％的乙腈溶液；25～35min时，流动相A为13～15％的乙腈溶液；35～50min时，流动相A为15...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳文，张恒，李顺祥，王玉凤，曾琼丽，李震，万荃，王雄龙，
申请(专利权)人：湖南时代阳光药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：