卵巢癌原代细胞的培养基、培养方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种卵巢癌原代细胞的培养基及体外培养方法及其应用。该培养基包含MST1/2激酶抑制剂；选自Y27632、法舒地尔、和H

【技术实现步骤摘要】
卵巢癌原代细胞的培养基、培养方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及培养基及其应用，更具 体涉及一种卵巢癌原代细胞的培养基及培养方法和用途。

技术介绍

[0002]卵巢癌是指发生在卵巢的恶性肿瘤性疾病，是女性生殖器官常见 的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌。卵巢癌以上皮 癌最多见，其次是恶性生殖细胞肿瘤，其中卵巢上皮癌死亡率占各类 妇科肿瘤的首位，对女性生命可造成严重威胁。卵巢癌早期多无症状， 晚期可出现下腹不适、腹胀、食欲下降等消化道症状，主要的治疗方 式包括手术切除、药物治疗和放射治疗，总体预后较差。
[0003]化学治疗是治疗卵巢肿瘤的主要方法之一。虽然目前临床可以使 用的化疗药物已经有许多，但卵巢肿瘤的临床治疗有效率仅为25％ 左右。其主要原因在于，目前患者所使用的化疗药物的方案大多是根 据临床医生的经验，在没有考虑到患者个体差异的前提下，通过尝试
ꢀ‑
评估
‑
换药尝试
‑
再评估的方法，不但未能提高药物的治疗效果，同时 会错过最佳的治疗时期，从而使肿瘤进入晚期。此外，在整个治疗过 程中，患者会承受药物副作用以及极高的医疗费用的负担。
[0004]因此，在体外建立原代肿瘤模型，并利用它进行高效的药物筛选 实验是一个有良好前景的方案。目前建立原代卵巢肿瘤的体外培养模 型主要的方法有人源肿瘤异种移植模型(Patient
‑
Derived tumorXenograft,PDX)，该方法是将患者的肿瘤细胞移植到裸鼠体内，再考 察不用抗肿瘤药物对其的治疗效果。然而，PDX方法也有一些不足， 例如：人与鼠之间的物种差异；测试周期长(4周以上)；成本高(20 万以上)；假阳性与假阴性等。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种卵巢癌原代细胞的培养 基及体外培养方法和应用。
[0006]本专利技术的一个方面在于提供一种卵巢癌原代细胞的培养基，所述 培养基包含MST1/2激酶抑制剂；选自Y27632、法舒地尔、和H
‑
1152 中的至少一种的Rho蛋白激酶抑制剂；胰岛素
‑
转铁蛋白
‑
硒补充剂； 胰岛素；前列腺素E2；表皮生长因子；胃泌素；胰岛素样生长因子
ꢀ‑
1；霍乱毒素；双调蛋白；N2；和B27。
[0007]其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学 可接受的盐、或溶剂化物，
[0008][0009]其中，
[0010]R1选自C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C2
‑
C6 螺环烷基、以及任选地被1
‑
2个独立地R6取代的芳基(例如苯基和 萘基等)、芳基C1
‑
C6烷基(例如苯甲基等)和杂芳基(例如噻吩基 等)；
[0011]R2和R3各自独立地选自C1
‑
C6烷基，优选C1
‑
C3烷基，更优选 甲基；
[0012]R4和R5各自独立地选自氢、C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8 环烷基烷基、C1
‑
C6烷基羟基、C1
‑
C6卤代烷基、C1
‑
C6烷基氨基 C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基C1
‑
C6烷基、和C3
‑
C6杂环基C1
‑
C6烷 基(所述杂环基选自例如哌啶基、四氢吡喃基等)；
[0013]R6选自卤素(优选氟和氯，更优选氟)、C1
‑
C6烷基(优选甲基)、 C1
‑
C6烷氧基(优选甲氧基)、和C1
‑
C6卤代烷基(优选三氟甲基)。
[0014]优选的实施方式中，MST1/2激酶抑制剂包括式(Ia)的化合物 或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
[0015][0016]其中，
[0017]R1选自C1
‑
C6烷基、任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯基、任 选地被1
‑
2个独立地R6取代的噻吩基、和任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯甲基，R1更优选为任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯基；
[0018]R5选自氢、C1
‑
C6烷基、和C3
‑
C6环烷基，R5更优选为氢；
[0019]R6各自独立地选自卤素、C1
‑
C6烷基、和C1
‑
C6卤代烷基，R6更优选为氟、甲基或三氟甲基。
[0020]优选地，所述MST1/2抑制剂是选自以下化合物或其药学可接受 的盐、或溶剂化物中的至少一种。
[0021][0022][0023][0024][0025][0026]最优选地，本专利技术的MST1/2激酶抑制剂为化合物1。
[0027]在本专利技术的实施方式中，本专利技术的培养基中各成分的含量满足以 下任意一项或多项或全部满足：
[0028](1)所述MST1/2激酶抑制剂在培养基中的含量为2.5～20μ M；
[0029](2)所述Rho蛋白激酶抑制剂在培养基中的含量为2.5～20μM；
[0030](3)所述胰岛素
‑
转铁蛋白
‑
硒补充剂相对于培养基的体积比为 1:800～1:50；
[0031](4)所述胰岛素在培养基中的含量为1～27μg/mL；
[0032](5)所述前列腺素E2在培养基中的含量为2.5～10μM；
[0033](6)所述表皮生长因子在培养基中的含量为2.5～40ng/mL；
[0034](7)所述胃泌素在培养基中的含量为1～9nM；
[0035](8)所述胰岛素样生长因子
‑
1在培养基中的含量为25～100 ng/mL；
[0036](9)所述霍乱毒素在培养基中的含量为0.05～0.8μg/mL；
[0037](10)所述双调蛋白在培养基中的含量为1～81ng/mL；
[0038](11)所述B27添加剂相对于培养基的体积比范围优选为1：25～ 1：400；
[0039](12)所述N2添加剂相对于培养基的体积比范围优选为1：50～ 1：400。
[0040]在本专利技术的实施方式中，所述培养基还含有选自DMEM/F12、 DMEM、F12或RPMI
‑
1640的初始培养基；和选自链霉素/青霉素、 两性霉素B和Primocin中的一种或多种的抗生素。
[0041]在优选的实施方式中，当抗生素选自链霉素/青霉素时，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卵巢癌原代细胞的培养基，其特征在于，包含：MST1/2激酶抑制剂；选自Y27632、法舒地尔、和H
‑
1152中的至少一种的Rho蛋白激酶抑制剂；胰岛素
‑
转铁蛋白
‑
硒补充剂；胰岛素；前列腺素E2；表皮生长因子；胃泌素；胰岛素样生长因子
‑
1；霍乱毒素；双调蛋白；N2；和B27，其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，其中，R1选自C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C2
‑
C6螺环烷基、以及任选地被1
‑
2个独立地R6取代的芳基、芳基C1
‑
C6烷基和杂芳基；R2和R3各自独立地选自C1
‑
C6烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C1
‑
C6烷基羟基、C1
‑
C6卤代烷基、C1
‑
C6烷基氨基C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基C1
‑
C6烷基、和C3
‑
C6杂环基C1
‑
C6烷基；R6选自卤素、C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、和C1
‑
C6卤代烷基。2.如权利要求1所述的培养基，其中R1选自C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C2
‑
C6螺环烷基、以及任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯基、萘基、苯甲基和噻吩基；R2和R3各自独立地选自C1
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C3烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C1
‑
C6烷基羟基、C1
‑
C6卤代烷基、C1
‑
C6烷基氨基C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基C1
‑
C6烷基、哌啶基C1
‑
C6烷基、和四氢吡喃基C1
‑
C6烷基；R6选自卤素、C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、和C1
‑
C6卤...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘青松，赫玉影，黄涛，陈程，
申请(专利权)人：合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：