【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用共价固定化自组装多肽的快速简便的抗体检测
[0001]本公开涉及使用被抗体识别的固定化多肽检测血浆中抗体的方法和表面。
技术介绍
[0002]血小板减少症是一种与低血小板计数相关的病症。免疫性血小板减少症(ITP)是一种免疫性出血障碍,其导致低血小板计数并有死亡风险。尽管ITP的确切原因仍知之甚少,但文献显示绝大多数ITP病例是由抗血小板表面受体GPIbα和/或αIIbβ3(GPIIbIIIa)产生的自身抗体介导的。最近,研究表明GPIbα
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和αIIbβ3
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介导的ITP的血小板清除机制不同,并且对相同类型的治疗没有反应。ITP中抗体介导的血小板清除可分为两种途径:1)Fc依赖性:抗体经由Fab部分与血小板结合,将调理过的血小板与巨噬细胞Fc受体桥接。调理过的血小板随后被巨噬细胞吞噬和清除(麦克米伦(McMillan)等人,1974)。然而,上述Fc依赖性模型不能解释血小板清除的所有机制,因为去除Fc的抗GPIbα单克隆抗体(mAb)仍会诱导血小板减少症(尼斯万特(Nieswandt)等人,2000)。2)Fc非依赖性:这种新的途径目前还没有被完全表征,但已经观察到了(李(Li)等人,2015;韦伯斯特(Webster)等人,2006),(尼斯万特等人,2000)。最近的发现证明大多数抗GPIbα诱导的血小板去唾液酸化和AMR相关的肝血小板清除对诊断和治疗两者都具有重要意义(李等人,2015;徐(Xu)等人,2018)。对这种新的Fc非依赖性途径的进一步理解在ITP的临床处理 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测对血液或血液制品中存在的多肽具有特异性的抗体的存在的方法,所述方法包括:a)使(i)固定在表面上的至少一种第一自组装多肽与(ii)可疑包含所述抗体的样品接触,所述至少一种第一自组装多肽包含第一胞外结构域部分;以及b)检测所述第一自组装多肽中的至少一种与所述抗体之间的复合物是否存在,其中所述复合物的存在指示所述样品中所述抗体的存在;其中所述至少一种第一自组装多肽包含式(Ia)或(Ib)的第一嵌合多肽:NH2–
FPM
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FAAL
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FAT
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COOH
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(Ia)NH2–
FAT
–
FAAL
–
FPM
–
COOH
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(Ib)式中:FPM是衍生自所述血液或所述血液制品中存在的所述多肽的第一多肽部分;FAAL是第一任选的氨基酸接头;FAT是具有至少一个酸性氨基酸残基的第一氨基酸尾部,所述酸性氨基酸残基各自具有包含羧基基团的R基团;
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是胺键;第一嵌合多肽的羧基基团共价缔合至第一硅烷接头(FSL)部分,其中所述FSL与所述表面的至少一个第一羟基基团共价缔合;以及所述至少一种自组装多肽对所述抗体具有特异性亲和力。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述样品来自可疑包含所述抗体的受试者。3.根据权利要求1或2所述的方法,其中所述血液制品是血浆。4.根据权利要求3所述的方法,其中所述血浆是富血小板血浆或贫血小板血浆。5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其用于诊断血小板减少症,其中所述复合物的检出指示所述受试者中存在血小板减少症。6.根据权利要求5所述的方法,其中所述多肽是存在于血小板表面上的多肽。7.根据权利要求6所述的方法,其中所述抗体是同种抗体。8.根据权利要求7所述的方法,其用于诊断同种免疫性血小板减少症,其中所述复合物的检出指示所述受试者中存在同种免疫性血小板减少症。9.根据权利要求7所述的方法,其用于诊断胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症(FNAIT),其中所述复合物的检出指示所述受试者和/或所述受试者的妊娠后代中存在FNAIT。10.根据权利要求7所述的方法,其用于诊断输血后紫癜(PTP),其中所述复合物的检出指示所述受试者中存在PTP。11.根据权利要求6所述的方法,其中所述抗体是自身抗体。12.根据权利要求11所述的方法,其用于诊断药物诱导的免疫性血小板减少症,其中所述复合物的检出指示存在药物诱导的免疫性血小板减少症。13.根据权利要求11所述的方法,其用于诊断自身免疫性血小板减少症,其中所述复合物的检出指示所述受试者中存在自身免疫性血小板减少症。14.根据权利要求1至4中任一项所述的方法,其中所述多肽是可溶性多肽。15.根据权利要求14所述的方法,其中所述可溶性多肽是ADAMTS13。16.根据权利要求15所述的方法,其用于诊断血栓性血小板减少性紫癜(TTP),其中所
述复合物的检出指示所述受试者中存在血栓性血小板减少性紫癜。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法,其进一步包括使固定在所述表面上的至少一种第二自组装多肽与所述样品接触,所述至少一种第二自组装多肽包含第二胞外结构域部分,及与所述至少一种第一自组装多肽形成多聚体;其中所述至少一种第二自组装多肽包含与所述第一嵌合多肽非共价缔合的第二嵌合多肽,所述第二嵌合多肽具有式(IIa)或(IIb):NH2–
SPM
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SAAL
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SAT
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COOH
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(IIa)NH2–
SAT
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SAAL
–
SPM
–
COOH
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(IIb)式中:SPM是衍生自所述血浆中存在的所述肽或其片段的第二多肽部分;SAAL是任选的第二氨基酸接头;SAT是具有至少一个酸性氨基酸残基的第二氨基酸尾部,所述酸性氨基酸残基各自具有包含羧基基团的R基团;且
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是胺键;其中所述第二嵌合多肽的羧基基团共价缔合至第二硅烷接头(SSL)部分,其中所述SSL与所述表面的至少一个第二羟基基团共价缔合;并且其中所述FAT与所述SAT非共价缔合。18.根据权利要求17所述的方法,其中所述FPM和所述SPM是相同的,并且所述至少一种第一自组装多肽与所述至少一种第二自组装多肽形成同源多聚体。19.根据权利要求18所述的方法,其中所述FPM和所述SPM是不同的,并且所述至少一种第一自组装多肽与所述至少一种第二自组装多肽形成异源多聚体。20.根据权利要求17至19中任一项所述的方法,其中所述表面具有所述FAAL和/或SAAL。21.根据权利要求17至20中任一项所述的方法,其中:所述FAT长度为至少1个且至多50个氨基酸残基,并且具有约10的pI;并且所述SAT长度为至少3个且至多50个氨基酸残基,并且具有约4的pI。22.根据权利要求21所述的方法,其中:所述FAT具有SEQ ID NO:4的氨基酸序列或者其功能变体或片段;并且所述SAT具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列或者其功能变体或片段。23.根据权利要求19或20所述的方法,其中:所述第一嵌合多肽包含αllb多肽,并且所述FPM具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列或者其功能变体或片段;并且所述第二嵌合多肽包含β3多肽,并且所述SPM具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列或者其功能变体或片段。24.根据权利要求1至16中任一项所述的方法,其中所述至少一种第一自组装多肽中的一种或多种是活化的受体蛋白。25.根据权利要求24所述的方法,其中所述至少一种第一自组装多肽包含GPIbα多肽,并且所述FPM具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列或者其功能变体或片段。26.根据权利要求1至16中任一项所述的方法,其中所述至少一种第一自组装多肽中的一种或多种是活化的表面蛋白。
27.根据权利要求26所述的方法,其中所述至少一种第一自组装多肽包含αllb多肽,并且所述FPM具有SEQ ID NO:2的氨基酸序列或者其功能变体或片段。28.根据权利要求26所述的方法,其中所述至少一种第一自组装多肽包含β3多肽,并且所述FPM具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列或者其功能变体或片段。29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法,其中所述FSL和/或SSL部分包含一个或多个与所述FAT和/或SAT的所述羧基基团共价缔合的胺基团或硫醇基团。30.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员:倪合宇,米格尔,
申请(专利权)人:西西欧艾杭州生物医药有限责任公司,
类型:发明
国别省市:
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