一株植物乳植杆菌及其在预防和治疗呼吸道疾病中的应用制造技术

本发明专利技术属于益生菌筛选与应用技术领域，具体涉及一株植物乳植杆菌及其在预防和治疗呼吸道疾病中的应用。所述植物乳植杆菌分离自健康成年人粪便样品，已于2022年4月1日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2022360。该菌株的活菌和发酵上清液都具有抑制呼吸道主要致病菌肺炎链球菌的生长、杀灭呼吸道致病微生物的用途，对于预防和治疗由细菌感染导致的呼吸道疾病具有非常重要的应用价值。具有非常重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一株植物乳植杆菌及其在预防和治疗呼吸道疾病中的应用


[0001]本专利技术属于益生菌筛选与应用
，具体涉及一株植物乳植杆菌及其在预防和治疗呼吸道疾病中的应用。

技术介绍

[0002]人的呼吸道，长期流通着含微生物的空气，分布在呼吸道内表面的黏膜不停过滤着空气中的微生物。因此，呼吸道不可避免地存在种类繁多的微生物。呼吸道的微生物，按照对宿主健康的影响分为致病菌，条件致病菌和益生菌三大类。引起呼吸道感染常见的革兰阳性致病菌有肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、白喉棒杆菌菌等，致病革兰阴性细菌有卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、其他肠杆菌科细菌等。而定植于呼吸道黏膜的益生菌，能不断抑制致病菌、约束条件致病菌、平衡宿主呼吸道黏膜免疫，对维持呼吸道健康起着不可或缺的作用。现有研究表明，呼吸道益生菌以乳酸菌为主，当呼吸道中益生菌水平因为环境空气污染、抗生素和消毒剂暴露等原因降低时，上述作用就会减弱，从而导致各种各样的呼吸道疾病。
[0003]目前，治疗呼吸道细菌性感染的主要方法是服用消炎药物，也就是抗生素，但长时间服用抗生素会导致肝功能损害、菌群失调、抗生素相关性腹泻等，且对于部分抗生素过敏者也不适用。因此，开发一种安全有效的呼吸道疾病预防和治疗方法迫在眉睫。

技术实现思路

[0004]本专利技术为解决现有技术问题，提供了一株新的植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）及其应用。该菌株分离自健康成年人粪便样品，其活菌和发酵上清液都具有抑制呼吸道主要致病菌肺炎链球菌的生长、杀灭呼吸道致病微生物的用途，对于预防和治疗由细菌感染导致的呼吸道疾病具有非常重要的应用价值。
[0005]本专利技术所提供的植物乳植杆菌，命名为植物乳植杆菌VHProbi P32（Lactiplantibacillus plantarum VHProbi P32），已于2022年4月1日保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2022360。
[0006]所述植物乳植杆菌VHProbi P32株，其16s rDNA序列SEQ ID NO：1。
[0007]本专利技术所提供的植物乳植杆菌VHProbi P32株，其MALDI
‑
TOF核糖体蛋白分子量图谱如图3所示；Riboprinter指纹图谱如图4所示；RAPD指纹图谱如图5所示；rep
‑
PCR指纹图谱如图6所示。
[0008]本专利技术所提供的植物乳植杆菌VHProbi P32株在制备益生菌制剂中的应用。
[0009]所述益生菌制剂中包含植物乳植杆菌VHProbi P32株的活菌菌体、死菌菌体、代谢产物或胞内提取物中的至少一种。
[0010]本专利技术所提供的植物乳植杆菌VHProbi P32株在制备具有预防或治疗呼吸道疾病功能的制品中的应用。
[0011]所述制品为功能性食品、保健品或药品。
[0012]所述的呼吸道疾病为鼻窦炎。
[0013]本专利技术所提供的植物乳植杆菌VHProbi P32株，能显著抑制呼吸道主要致病菌肺炎链球菌的生长，抑菌圈直径达到18.05
±
0.09mm。与对照组相比，添加植物乳植杆菌VHProbi P32无细胞发酵上清液能显著抑制致病菌肺炎链球菌的生长，且随着添加量的增大，抑制作用越强；当培养基中植物乳植杆菌VHProbi P32无细胞发酵上清液的添加量达到20%（v/v）时，肺炎链球菌几乎不生长。
[0014]所述植物乳植杆菌VHProbi P32株，对鼻腔上皮细胞有较强的粘附作用，粘附量达到27.46
±
0.15 CFU/cell，为其在鼻腔中粘附和定植提供了有利条件；并且能够显著抑制鼻窦炎主要致病微生物肺炎链球菌的粘附，粘附抑制率高达83.72%。
[0015]所述植物乳植杆菌VHProbi P32株，其菌体具有较强的凝集能力，为其在鼻腔环境中与其他微生物，尤其是致病微生物共凝集提供了必要的条件。该菌株5h时自聚合率达到28%，与肺炎链球菌的共聚合率达到37%，凝集效果显著。
[0016]所述植物乳植杆菌VHProbi P32株，对β溶血性链球菌、化脓性链球菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌等常见呼吸道致病菌的生长也具有明显的抑制作用，抑菌圈直径达到12.88
‑
19.85mm。
[0017]本专利技术提供的植物乳植杆菌VHProbi P32株，对机体无毒害作用，安全性好，可以添加在功能性食品、保健品或药品中，用于预防呼吸道疾病或改善由细菌感染导致的呼吸道症状，具有广阔的应用前景。
[0018]附图说明
[0019]图1为P32菌株的菌落图及革兰氏染色图；其中A为菌落图，B为革兰氏染色图；图2为P32菌株的API试验结果图；图3为P32菌株的MALDI
‑
TOF核糖体蛋白指纹图谱；图4为P32菌株的Riboprinter指纹图谱；图5为P32菌株的RAPD指纹图谱；图6为P32菌株的rep
‑
PCR指纹图谱；图7为P32菌株对肺炎链球菌的抑菌圈图；图8为P32菌株与肺炎链球菌共凝集的宏观图片；图9为P32菌株与肺炎链球菌共凝集的显微图片（油镜，100
×
放大）；图10为菌株P32的自凝聚率和与肺炎链球菌的交互凝聚率图；图11为P32菌株对鼻咽癌细胞5
‑
8F的细胞毒性图；图12为P32菌株对鼻咽癌细胞5
‑
8F的粘附图；图13为P32菌株对肺炎链球菌对鼻咽癌细胞的粘附抑制图；图14为P32菌株发酵上清液对肺炎链球菌的生长抑制作用图；图15为P32菌株对其他鼻窦炎致病菌的抑制作用图。
具体实施方式
[0020]本专利技术所述筛选方法并不局限于实施例所述，已知的能够达到筛选目的的方法均
可以，实施例的筛选说明只是对本专利技术的说明，并不是对本专利技术保护范围的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。
[0021]下面结合具体实施例对本专利技术做详细的描述。
[0022]实施例 1菌株的分离筛选1.1初筛配制MRS琼脂培养基，调pH 6.2
‑
6.5，121℃高压灭菌15 min。
[0023]取 1g 新鲜发酵樱菜样品，经无菌生理盐水稀释后放入无菌样品袋中，用匀浆仪拍打混匀；取100μL混匀液梯度稀释，涂布于MRS琼脂培养基后于37℃厌氧培养48h，待平板长出单菌落镜检。根据镜检结果，申请人共筛选出39株潜在乳酸杆菌，分别命名为P01、P02、
……
、P32、P33、P34、......、P38、P39。
[0024]2.2复筛配制1L的MRS液体培养基，121℃高压灭菌15min，待培养基冷却后，加入3.2g猪粘膜胃蛋白酶，摇匀溶解，置37℃水浴摇床中水浴1h制成耐酸性培养基。将筛选得到的39株乳酸杆菌按6本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物乳植杆菌，其特征在于，所述的植物乳植杆菌为植物乳植杆菌VHProbi P32（Lactiplantibacillus plantarum VHProbi P32），已于2022年4月1日保藏于中国武汉 武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏号为CCTCC NO：M2022360。2.如权利要求1所述的植物乳植杆菌，其特征在于，所述植物乳植杆菌的16s rDNA序列SEQ ID NO：1。3.如权利要求1所述的植物乳植杆菌，其特征在于，所述植物乳植杆菌的MALDI
‑
TOF核糖体蛋白分子量图谱如图3所示；Ribopri...

【专利技术属性】
技术研发人员：段治，郭超群，崔洪昌，吴松洁，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：