一种多肽变体、融合蛋白及其与MSCs细胞的联合应用制造技术

本发明专利技术涉及一种多肽变体、融合蛋白及其与MSCs细胞的联合应用，根据FGF21蛋白结构，进行定点突变，获得多个突变体，可提高促细胞增殖活性；将所述FGF21变体与Fc片段构建融合蛋白，可提高体内半衰期；FGF21变体

【技术实现步骤摘要】
一种多肽变体、融合蛋白及其与MSCs细胞的联合应用

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[0001]本专利技术属于生物
，具体提供了一种多肽变体、融合蛋白及其与MSCs细胞的联合应用。

技术介绍
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[0002]肝病是全世界疾病和死亡的主要原因，仅在中国，包括病毒性肝炎(主要是乙型肝炎病毒)、非酒精性脂肪肝和酒精性肝病在内的肝脏疾病影响了大约3亿人。在肝脏疾病中，肝硬化是最为常见的表现形式之一，目前我国肝硬化的发病率呈逐年上升趋势，死亡率随之也大幅度增加。肝硬化患者出现多种并发症，最常见的临床表现是腹水和胃食管静脉曲张破裂出血，晚期并发症包括黄疸、凝血功能障碍、肝性脑病、急性肾损伤和肝肾综合征(HRS)，并发症在首次出现后复发且频率增加，大多数患者在大约2年的中位时间内死亡，目前最为有效的治疗手段是肝移植，但其临床应用受到供体稀缺和免疫排斥反应的限制。因此，迫切需要有效的治疗策略来逆转肝硬化。
[0003]导致肝硬化的病因很多，目前已知的包括但不限于病毒性肝炎、酒精相关性肝病、非酒精性脂肪性肝炎等等。其中病毒性肝炎以丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)最为常见，目前对于HCV的抗病毒治疗较为成功，使得其导致肝硬化的可能性降低；然而针对HBV的治疗药物或方法仍多处于研究就得，例如免疫调节剂、病毒进入抑制剂、核心蛋白调节剂、核酸聚合物、反义寡核苷酸、CRISPR
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Cas9、核酸酶和干扰RNA等等。
[0004]与病毒性肝炎主要依赖于药物治疗不同，酒精相关性肝病(ALD)最有效的治疗方法是戒酒，同时心理治疗也被广泛推荐。目前临床上也存在一些与酒精相关性肝病相关的治疗药物，包括巴氯芬，在失代偿性肝硬化患者中可减少酒精伤害；纳曲酮，可改善肝脏中生物酶的含量和活性；加巴喷丁，对患有酒精戒断症状或有酒精戒断症状风险的患者较为有效。
[0005]非酒精性脂肪性肝炎的情形较多，但主要包括肥胖和药物副作用。对于肥胖患者，通过改变饮食和生活方式来减轻体重是最为有效的途径，当然还可以辅助使用减肥药物。肝脏是人体的主要代谢器官，因而长期或大剂量服用药物会对肝脏造成损伤，如服用抗癌化疗药物使得肝硬化风险加剧。
[0006]迄今为止，有多种药物被试图用于治疗肝硬化，如细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal
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regulating kinase 1，ASK1)的选择性抑制剂、抗赖氨酰氧化酶样2(lysyl oxidase
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like 2，LOXL2)的人源化单克隆抗体、半乳糖凝集素3的抑制剂、泛半胱天冬酶抑制剂等等(参见Elliot B.Tapper et al,Review article:current and emerging therapies for the management of cirrhosis and its complications,Aliment Pharmacol Ther.2022,55(9):1099
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1115)。其中，间充质基质细胞(mesenchymal stromal cells，MSC)和FGF21受到广泛关注。
[0007]MSC被认为是具有自我更新能力的多能基质细胞，可以很容易地从广泛的组织(例如羊水、脐带、脂肪、骨髓和月经血)中提取并在体外扩增，MSC不表达II类亚型的主要组织
相容性复合物(major histocompatibility complex，MHC)抗原，并且含有低水平的I类亚型MHC分子；MSC还缺乏免疫检测所必需的共刺激分子，包括CD40、CD80和CD86等等，因此MSC普遍具有较低的免疫原性，可以避免受体的免疫排斥，为其同种异体应用奠定了基础。MSCs的治疗优势包括自我更新、归巢到损伤部位、免疫调节、多向分化和分泌促进受损组织修复和再生的营养因子，并且使用MSC没有任何伦理问题。自1976年首次从小鼠骨髓中分离出MSCs以来，多项基础和临床研究试验表明，MSCs可以安全有效地增强肝功能和治疗肝硬化，其作用机制大致分为三类：(1)当被引入受损肝组织时，MSCs具有分化为肝细胞或与现有肝细胞融合的潜力，使它们成为肝组织再生和修复的有用资源；(2)MSCs能够产生广泛的细胞因子和生长因子，它们还可能具有发挥旁分泌作用的能力，这有助于刺激损伤组织中内源性细胞的再增殖；(3)MSCs对许多其他类型的细胞有抑制作用，例如自然杀伤细胞(NKs)、B淋巴细胞和T淋巴细胞，这使它们能够对肝脏疾病发挥免疫调节作用(参见Lichao Yao et al,Mesenchymal stromal cells:promising treatment for liver cirrhosis,Stem Cell Res Ther.2022；13:308.)。截至目前，共有60项涉及MSCs治疗肝病的注册临床研究，其中45项专门针对肝硬化，包括NCT04243681、NCT01591200、NCT01875081、NCT01342250等(数据来自ClinicalTrials.gov)
[0008]成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21，FGF21)是FGF19亚家族中的一员，其在啮齿动物和灵长类动物中的临床前表征已经确定了它在恢复肥胖或代谢稳态、减轻体重、调节肝脏和循环甘油三酯、空腹血浆胰岛素和葡萄糖以及增加能量消耗方面的作用，并且最近研究表明FGF21成为治疗肝纤维的新型细胞因子之一(参见Erik J Tillman,Tim Rolph，FGF21:An Emerging Therapeutic Target for Non
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Alcoholic Steatohepatitis and Related Metabolic Diseases，Front Endocrinol(Lausanne).2020，14；11:601290.)。FGF21进入体循环，它能够整合肝脏、脂肪组织、骨骼肌、胰腺和其他代谢器官的代谢，通过控制塑造细胞表型和组织代谢功能的转录程序的表达，最终在啮齿动物和灵长类动物中发挥作用，包括参与激素代谢，如介导肝胰高血糖素和甲状腺激素信号传导；抑制肝脏中的热量负担，减少脂肪生成，并增加肝脏中的脂肪氧化；介导脂肪酸氧化能力的增加和防止氧化应激损伤；通过诱导NRF2核转位抑制巨噬细胞促炎细胞因子TNFα、IL
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6、IL
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1β和IFN
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γ的表达，从而阻断NF
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κB激活；促进肝细胞增殖，抑制细胞凋亡，促进表观遗传重编程为更健康的代谢表型等等。
[0009]但是天然FGF21也存在一些缺点和不足，如热稳定性差，体内半衰期短等，对此研究人员也做出了一些改进，如糖基化的FGF21变体LY2405319保持内源性FGF21的分子大小，但通过在分子中设计一个额外的二硫键和少量点突变来提高其热稳定性并减少聚集(参见Kharitonenkov A et al.Rational本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种FGF21变体蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2
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6任一项所示。2.一种FGF21变体
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Fc融合蛋白，其特征在于，所述FGF21变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。3.根据权利要求2所述的FGF21变体
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Fc融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白中包括Fc片段，所述Fc片段氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。4.根据权利要求3所述的FGF21变体
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Fc融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。5.一种药物组合物，包括权利要求2
‑
3任一项所述的FGF21变体
‑
Fc融合蛋白和MSCs细胞。6.根据权利要求5所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈璟，周蕴意，
申请(专利权)人：成都金裕璟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：