基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法技术

本发明专利技术公开了基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，包括以下步骤：A、首先取适量血清，并冷藏处理；B、将冷藏后的血清进行补体热灭活处理；C、将补体热灭火处理后的血清加入杜氏磷酸盐缓冲液，混合均匀后，加入到细胞分离液中，得到单个核细胞；D、将分离后的单个核细胞接种在培养液中，进行培养血清间充质干细胞；E、最后对血清间充质干细胞的纯化及扩增，本发明专利技术采用的培养优化方法操作简单，能够降低培养成本，能够为干细胞提供稳定的生长环境，显著提高干细胞培养效率；本发明专利技术培养液中添加的添加剂能够刺激细胞生长和细胞分裂，降低培养成本，提高了干细胞的增殖能力。力。

【技术实现步骤摘要】
基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法


[0001]本专利技术涉及干细胞培养
，具体为基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法。

技术介绍

[0002]干细胞是指来自于胚胎、胎儿、成人的具有自我更新和不断繁殖以及分化为多种细胞能力的一类细胞，是机体及其他各种组织细胞的初始来源，这些细胞能够分化成为各种不同的组织细胞，是生物医学领域不佳而缺少的细胞来源，对于临床应用的意义非凡，因此近年来干细胞的研究是生物医学研究的热点。而由于干细胞在机体组织中含量甚微，因此体外培养、扩增干细胞，以使干细胞的数量满足干细胞相关作用及机制的需要，是干细胞研究领域中的关键技术。
[0003]间充质干细胞(Mesenchymal stem cell，MSC)可以从多种组织中获得，如骨髓、脐带等，它不仅具有多向分化潜能，还可以调节T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等的免疫学活性。目前血清培养基中一般添加bFGF、EGF、SCF等生长因子，因生长因子价格昂贵，大大增加了培养成本，培养效率低，因此，有必要进行改进。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，包括以下步骤：
[0006]A、首先取适量血清，并冷藏处理；
[0007]B、将冷藏后的血清进行补体热灭活处理；<br/>[0008]C、将补体热灭火处理后的血清加入缓冲液，混合均匀后，加入到细胞分离液中，得到单个核细胞；
[0009]D、将分离后的单个核细胞接种在培养液中，进行培养血清间充质干细胞；
[0010]E、最后对血清间充质干细胞的纯化及扩增。
[0011]优选的，本申请提供的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其中，所述步骤A中取血清400ml
‑
500ml，冷藏温度为2℃
‑
5℃。
[0012]优选的，本申请提供的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其中，所述步骤B中补体灭活温度为55℃
‑
60℃，灭活时间为30min
‑
40min。
[0013]优选的，本申请提供的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其中，所述步骤C中缓冲液采用杜氏磷酸盐缓冲液。
[0014]优选的，本申请提供的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其中，所述步骤D中培养液为低糖DMEM培养基或DMEM/F12(1∶1)培养基。
[0015]优选的，本申请提供的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方
法，其中，所述步骤D中培养液中加入添加剂，其中添加剂由20％重组转铁蛋白、20％重组白蛋白、20％重组细胞因子、10％游离脂肪酸、20％蛋白酶抑制剂、10％维生素组成。
[0016]优选的，本申请提供的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其中，所述步骤D中具体培养过程如下：在培养液中加入细胞悬浮液，使细胞密度达到1～10
×
105个/mL，混匀后加到培养板中，室温下放置至凝胶凝固后，再加入培养液，置细胞培养箱中培养。
[0017]优选的，本申请提供的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其中，所述步骤E中细胞培养3
‑
4天后更换培养液，再使用完全培养基扩增细胞得到血清间充质干细胞。
[0018]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用的培养优化方法操作简单，能够降低培养成本，能够为干细胞提供稳定的生长环境，显著提高干细胞培养效率；本专利技术培养液中添加的添加剂能够刺激细胞生长和细胞分裂，降低培养成本，提高了干细胞的增殖能力。
具体实施方式
[0019]下面对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]实施例一：
[0021]本专利技术提供如下技术方案：基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，包括以下步骤：
[0022]A、首先取适量血清，并冷藏处理；
[0023]B、将冷藏后的血清进行补体热灭活处理；
[0024]C、将补体热灭火处理后的血清加入缓冲液，混合均匀后，加入到细胞分离液中，得到单个核细胞；
[0025]D、将分离后的单个核细胞接种在培养液中，进行培养血清间充质干细胞；
[0026]E、最后对血清间充质干细胞的纯化及扩增。
[0027]本实施例中，所述步骤A中取血清400ml，冷藏温度为2℃。
[0028]本实施例中，所述步骤B中补体灭活温度为55℃，灭活时间为30min。
[0029]本实施例中，所述步骤C中缓冲液采用杜氏磷酸盐缓冲液。
[0030]本实施例中，所述步骤D中培养液为低糖DMEM培养基或DMEM/F12(1：1)培养基。
[0031]本实施例中，所述步骤D中培养液中加入添加剂，其中添加剂由20％重组转铁蛋白、20％重组白蛋白、20％重组细胞因子、10％游离脂肪酸、20％蛋白酶抑制剂、10％维生素组成。
[0032]本实施例中，所述步骤D中具体培养过程如下：在培养液中加入细胞悬浮液，使细胞密度达到2
×
105个/mL，混匀后加到培养板中，室温下放置至凝胶凝固后，再加入培养液，置细胞培养箱中培养。
[0033]本实施例中，所述步骤E中细胞培养3天后更换培养液，再使用完全培养基扩增细
胞得到血清间充质干细胞。
[0034]实施例二：
[0035]基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，包括以下步骤：
[0036]A、首先取适量血清，并冷藏处理；
[0037]B、将冷藏后的血清进行补体热灭活处理；
[0038]C、将补体热灭火处理后的血清加入缓冲液，混合均匀后，加入到细胞分离液中，得到单个核细胞；
[0039]D、将分离后的单个核细胞接种在培养液中，进行培养血清间充质干细胞；
[0040]E、最后对血清间充质干细胞的纯化及扩增。
[0041]本实施例中，所述步骤A中取血清500ml，冷藏温度为5℃。
[0042]本实施例中，所述步骤B中补体灭活温度为60℃，灭活时间为40min。
[0043]本实施例中，所述步骤C中缓冲液采用杜氏磷酸盐缓冲液。
[0044]本实施例中，所述步骤D中培养液为低糖DMEM培养基或DMEM/F12(1∶1)培养基。
[0045]本实施例中，所述步骤D中培养液中加入添加剂，其中添加剂由2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其特征在于：包括以下步骤：A、首先取适量血清，并冷藏处理；B、将冷藏后的血清进行补体热灭活处理；C、将补体热灭火处理后的血清加入缓冲液，混合均匀后，加入到细胞分离液中，得到单个核细胞；D、将分离后的单个核细胞接种在培养液中，进行培养血清间充质干细胞；E、最后对血清间充质干细胞的纯化及扩增。2.根据权利要求1所述的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其特征在于：所述步骤A中取血清400ml
‑
500ml，冷藏温度为2℃
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5℃。3.根据权利要求1所述的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其特征在于：所述步骤B中补体灭活温度为55℃
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60℃，灭活时间为30min
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40min。4.根据权利要求1所述的基于热灭活补体活性的血清的间充质干细胞培养优化方法，其特征在于：所述步骤C中缓冲液采用杜氏磷酸盐缓冲液。5.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：王博昊，
申请(专利权)人：江苏圣澄干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：