一种用于肉鸡免疫调节的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于肉鸡免疫调节的多肽及其应用，所提供的多肽具有抗菌和调节肉鸡免疫力的效果，而且不会对养殖肉鸡的肝脏造成损伤，可用做饲料添加剂来使用。所提供的多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明专利技术提供的从肉鸡的肝脏组织中分离获得的多肽，该多肽具有广谱的抑菌效果。而且，高浓度使用时并不会使肉鸡产生明显的应激反应，可以用作肉鸡的饲料添加剂来使用。加剂来使用。加剂来使用。

【技术实现步骤摘要】
一种用于肉鸡免疫调节的多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物制品制备应用
，具体涉及一种用于肉鸡免疫调节的多肽及其应用。

技术介绍

[0002]肉鸡是农业养殖生产中较为普遍的养殖项目，具有地域分布广、规模大、数量多等特点，是我国肉类供应的重要途径。在肉鸡养殖中，我国积累了丰富的实践经验，一定程度上保障了肉类制品的供应。但是，由于肉鸡养殖环境较为复杂、病害种类多、发生风险高，一定程度上影响了肉鸡养殖的经济效益和肉制品供应。我国肉鸡商用品种主要包括白羽肉鸡、黄羽肉鸡和小型白羽肉鸡等养殖品种，但上述商品肉鸡普遍存在抗病力差的缺点，导致养殖疾病经常影响肉鸡养殖的经济效益和肉制品供应。因此，为了有效预防和控制肉鸡疾病，除了需要认真研究肉鸡养殖各阶段的常见疾病类型和症状表现，掌握肉鸡各阶段疾病防控知识和技能外，还要在养殖饲料或添加剂上进行研究，提供能够有效提高肉鸡抗逆性，且不会对肉鸡造成严重应激反应的添加剂。
[0003]抗菌肽是从生物体内组织和细胞中分离的，具有免疫作用的多肽，其可以与病毒或细菌表面带电荷的成分相结合，进而破坏细胞膜结构或胞内大分子而扰乱细胞的正常功能并导致细菌死亡，从而达到抗菌效果。但外源的抗菌肽会使动物本身产生应激反应，不利于动物的生长，因此，筛选动物自身来源的抗菌肽更有利于健康养殖的要求。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种用于肉鸡免疫调节的多肽及其应用，所提供的多肽具有抗菌和调节肉鸡免疫力的效果，而且不会对养殖肉鸡的肝脏造成损伤，可用做饲料添加剂来使用。
[0005]本专利技术一个方面提供一种用于肉鸡免疫调节的多肽Ggabp，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1(SVISESVAVGDASVS)，
[0006]本专利技术再一个方面还提供多肽Ggabp的衍生多肽，是在氨基酸序列为SEQ ID NO:1的多肽上取代、缺失、添加一个或几个氨基，且具有相同或近似活性的多肽；
[0007]本专利技术再一个方面还保护一种偶联多肽，是在上述的多肽Ggabp或其衍生多肽的5
′
端或3
′
端连接有用于增强其效果的分子，例如类泛素蛋白修饰分子SUMO(small ubiquitin
‑
like modifier，SUMO)；
[0008]本专利技术再一个方面提供一种重组表达上述多肽Ggabp的方法，是将所述的多肽与SUMO进行偶联后，在芽孢杆菌或酵母菌中进行表达。
[0009]本专利技术还提供上述的多肽Ggabp的一种用途，是在作为肉鸡饲料添加剂的用途。
[0010]本专利技术再一个方面还提供一种肉鸡饲料，其中添加有上述的多肽，或用于重组表达上述多肽的菌株。
[0011]本专利技术提供一种从肉鸡的肝脏组织中分离获得的多肽，该多肽具有广谱的抑菌效
果。而且，高浓度使用时并不会使肉鸡产生明显的应激反应，可以用作肉鸡的饲料添加剂来使用。
附图说明
[0012]图1：p3组多肽的色谱图；
[0013]图2：p3组多肽进一步纯化后的色谱图；
[0014]图3：对巴氏杆菌pmAUQ抑菌圈实验结果图，其中多肽浓度为2μg/ml，A：多肽Ggabp；B：抗菌肽LLv；C：阴性对照PBS。
具体实施方式
[0015]下面结合实施例和附图对本专利技术进行详细的描述。
[0016]实施例1：多肽的分离和纯化
[0017]1、肉鸡肝脏组织蛋白多肽的分离
[0018]对沙门氏杆菌感染后存活的7～9周龄鸡的肝脏组织用生理盐水进行匀浆，然后在4℃条件下12000g离心30min。将上清液分别用截留分子量为5kDa、2kDa和1k Da、500Da的滤膜进行超滤，分别获得截留液和过滤液。将分子量大于5kDa(p1)、5kDa
‑
2kDa(p2)、2kDa
‑
1k Da(p3)、1k Da
‑
500 Da(p4)和小于500Da(p5)的蛋白溶液进行抗菌性检测，确定抗菌效果最佳的蛋白溶液组，具体步骤如下：
[0019]1)制备试验菌液
[0020]选用大肠杆菌作为试验菌株，将在固体LB培养基中划线培养的大肠杆菌进行培养，挑单菌落于含有30ml液体LB培养基的培养瓶中，在37℃培养8
‑
12h。将培养后的菌液测OD600吸光度值，然后将菌液稀释成浓度为5
×
106CFU/mL，分别取98μl加入到95孔板的各个培养孔中。
[0021]2)不同分子量的蛋白溶液的抗菌效果检测
[0022]将蛋白溶液进行定量(Bradford Protein Content Assay Kit，AKPR015，BOXBIO)后，用LB溶液分别稀释浓度为20μg/ml。分别取不同分子量的蛋白液各5μl加入到培养孔中，使每个孔的溶液体积为100μl。然后在37℃振荡培养24h后，用酶标仪在600nm处测量菌液浓度。结果表明分子量为1k Da
‑
2k Da的p3组就有最高的抑菌效果。
[0023]2、p3组多肽溶液的纯化
[0024]将抗菌效果最好的分子量为1k Da
‑
2k Da的p3组多肽加入到GEHitrap SP HP阳离子交换色谱柱中，用乙酸钠缓冲液平衡柱子，然后用Tris
‑
HCl(pH值为7.2)以0.5mL/min的流速洗脱，收集洗脱组分并在214nm处监测。结果显示p3组多肽中存在六个主要的多肽峰(图1)。
[0025]对六个多肽峰再次进行抗菌效果检测，结果显示第二个峰的抗菌效果最好，命名为Ggabp多肽。
[0026]将Ggabp多肽的洗脱液在填充有Sephadex G
‑
15的凝胶过滤色谱柱(25mm
×
500mm)上进一步纯化；用蒸馏水以1.0mL/min的流速进行洗脱纯化(图2)。
[0027]将收集的产物运用反相高效液相色谱(RP
‑
HPLC)进一步纯化后，纯化产物进行冻干；再使用LC/MSD Trap XCT系统(Agilent Technologies)对RP
‑
HPLC纯化后多肽进行LC
‑
MS/MS分析。光谱以正离子反射器模式记录，质量/电荷(m/z)范围200
‑
1000。通过BioTools(version3.0，Bruker Daltonics lnc.，Karlsdorf
‑
Neuthard，Germany)处理MS/MS光谱，确定2号峰的多肽的氨基酸序列为SVISESVAVGDASVS。利用固相合成法，按照氨基酸序列进行合成，得到了合成多肽Ggabp。
[0028]实施例2：Ggabp多肽的最小抑菌浓度及对肉鸡来源的巴氏杆菌pmAUQ株的抑菌效果
[0029]检测Ggabp多肽对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、猪副伤寒沙门氏菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于肉鸡免疫调节的多肽，其特征在于，所述的多肽包含有：1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的多肽，2)在氨基酸序列为SEQ ID NO:1的多肽上取代、缺失、添加一个或几个氨基，由1)所衍生的多肽。2.一种偶联多肽，其特征在于，所述的偶联多肽是在权利要求1所述的多肽的5
′
端或3
′
端连接有用于增强其效果的分子。3.如权利要求2所述的偶联多肽，其特征在于，所述的分子为类泛素蛋白修饰分子SUMO。4.一种重组表达权利要求1所述的多肽的方法，其特征在于，所述的方法是...

【专利技术属性】
技术研发人员：初欢欢，段坤，韩梦，王述柏，李建军，李和朋，姜晓洁，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：