本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂，包括嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液和助剂。其制备方法包括S1、挑取NBTA鉴别培养基上的单菌落；S2、挑取NA培养基上的单菌落；S3、LB液体培养基培养；S4、摇瓶发酵培养；S5、离心，得上清液；S6、将上清液与助剂混合均匀，得昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂。本发明专利技术还提供了一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂在防治韭菜灰霉病和番茄灰霉病中的应用。本发明专利技术的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂对韭菜灰霉病和番茄灰霉病具有显著的防治效果。有显著的防治效果。有显著的防治效果。
【技术实现步骤摘要】
昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂、制备方法及应用
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂、制备方法及其应用。
技术介绍
[0002]韭菜灰霉病是由葱鳞葡萄孢[Botrytis squamosal]、葱腐葡萄孢[Botrytis allii]和中国葱葡萄孢引起的病害，它在韭菜的生长、软化栽培、贮藏与运输期都能发生危害。而番茄灰霉病是由灰葡萄孢菌[Botrytis cinerea]引起的病害，从生长到开花、结果，均能感染。它们一般导致韭菜、番茄减产20％～30％，严重时高达50％，甚至绝产。随着人们对食品安全的认知和需求不断提高，寻求新的安全、有效和可持续控制害虫的方法—生物防治，已经成为研究的热点和重点领域。
[0003]昆虫病原线虫共生菌以其杀虫迅速、对人畜安全、寄主范围广、抗逆性强等优点，引起国内外高度重视。随着对昆虫病原线虫共生菌研究的不断深入，共生细菌的多种生物学功能陆续被发现，其次生代谢产物具有杀虫、抑菌、抗肿瘤和杀线虫等多种生物活性，是一类新型的具有开发潜力和应用前景的生物资源，在农业上有较好的商业潜力。
技术实现思路
[0004]本专利技术要解决的技术问题是提供一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂，用以防治韭菜灰霉病和番茄灰霉病。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：
[0006]一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂，其特征在于，包括嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液和助剂。
[0007]在本专利技术提供的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂中，优选地，按重量百分比计，包括嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液80～93％和助剂7～20％。
[0008]在本专利技术提供的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂中，再优选地，按重量百分比计，包括嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液90.8％和助剂9.2％。
[0009]在本专利技术提供的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂中，进一步优选地，所述助剂包括乳化剂OP
‑
10、山梨酸钾和乙二醇，其重量比为20:1:25。
[0010]在本专利技术中，所述助剂包括表面活性剂、防腐剂和防冻剂。所述表面活性剂可以为NP
‑
10、乳化剂OP
‑
10或乳化剂OP
‑
15；防腐剂可以为山梨酸钾、苯甲酸或苯甲酸钠；防冻剂可以为甘油或乙二醇。
[0011]另一方面，本专利技术还提供了一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂的制备方法，用以提高其抑菌活性，其包括如下步骤：
[0012]S1、取低温甘油管中保藏的嗜线虫肠杆菌LY2W菌悬液，在NBTA鉴别培养基上划线，于28℃下培养24～36h，挑取鉴别培养基的初生型单菌落；
[0013]S2、把步骤S1挑取的单菌落在NA培养基平板培养基上划线，于28℃下培养24～
36h，挑取单菌落；
[0014]S3、把步骤S2挑取的单菌落接种入LB液体培养基中，在28℃、180r/min的条件下培养12～14h,得到种子菌液；
[0015]S4、将步骤S3培养的种子菌液按体积比6％的接种量接种于摇瓶发酵培养基中，于28℃震荡培养24～28h得到发酵液；
[0016]S5、将步骤S4获得的发酵液进行离心，得到发酵上清液，并用无菌滤器过滤除菌，得嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液；
[0017]S6、按重量百分比计，将步骤S5所得嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液80～93％和助剂7～20％混合均匀，得昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂。
[0018]在本专利技术提供的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂中，优选地，按重量百分比计，所述摇瓶发酵培养基为：蛋白胨1.5～2.9％、葡萄糖0.4～1.5％、三七三醇皂苷0.008～0.02％、MgSO
4 0.1～0.3％、Na2SO
4 0.08～0.4％、(NH4)2SO
4 0.1～0.5％、KH2PO
4 0.06～0.08％、K2HPO
4 0.04～0.065％，余量为水，pH调至7.2～7.4。
[0019]在本专利技术提供的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂中，再优选地，按重量百分比计，所述摇瓶发酵培养基为：蛋白胨1.8～2.2％、葡萄糖0.85～1.1％、三七三醇皂苷0.008～0.015％、MgSO
4 0.1～0.2％、Na2SO
4 0.1～0.25％、(NH4)2SO
4 0.18～0.3％、KH2PO
4 0.07～0.08％、K2HPO
4 0.05～0.06％，余量为水，pH调至7.2～7.4。
[0020]在本专利技术提供的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂中，更优选地，按重量百分比计，所述摇瓶发酵培养基为：蛋白胨2.1％、葡萄糖0.91％、三七三醇皂苷0.012％、MgSO
4 0.13％、Na2SO
4 0.15％、(NH4)2SO
4 0.24％、KH2PO
4 0.072％、K2HPO
4 0.05％，余量为水，pH调至7.2～7.4。
[0021]按重量百分比计，所述NBTA平板培养基的组成为：蛋白胨0.5％、琼脂粉1.6％、牛肉膏0.3％、溴麝香百里酚蓝0.0025％、氯化三苯基四氮唑0.004％，余量为水，pH调至7.2～7.4。
[0022]按重量百分比计，NA液体培养基的组成为：蛋白胨0.5％、琼脂粉1.6％、牛肉膏0.3％，余量为水，调pH至7.2～7.4。
[0023]按重量百分比计，LB液体培养基的组成为：酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化钠1％，余量为水，pH调至7.2～7.4。
[0024]本专利技术还提供了一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂在防治韭菜灰霉病和番茄灰霉病中的应用。
[0025]在本专利技术提供的一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂在防治韭菜灰霉病和番茄灰霉病中的应用中，优选地，所述制剂应用于韭菜灰霉病时，针对的是葱鳞葡萄孢菌；所述制剂应用于番茄灰霉病时，针对的是灰葡萄孢菌。
[0026]本专利技术中的嗜线虫肠杆菌LY2W菌株为从平顶山采集的异小杆[Heterorhabditis sp.]昆虫病原线虫肠道内分离得到。
[0027]采用上述技术方案，由于嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液和助剂组合，使得本专利技术的发酵上清液制剂对韭菜灰霉病和番茄灰霉病具有显著的防治效果。在摇瓶发酵培养基内加入了0.008～0.02％(重量百分比)的三七三醇皂苷，促进了嗜线虫肠杆菌LY2W具有杀灭和抑制葱鳞葡萄孢菌和灰葡萄孢菌的代谢产物生成，从而提高了发酵上清液制剂对韭菜灰
霉病和番茄灰霉病的防治。本专利技术提供的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂对韭菜灰霉病和番茄灰霉病的预防效果优于治疗效果。
附图说明
[0028]图1为昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂对葱鳞葡萄孢的抑制效果的抑菌圈图(平行试验1的图)；...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂，其特征在于，包括嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液和助剂。2.根据权利要求1所述的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂，其特征在于，按重量百分比计，包括嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液80～93％和助剂7～20％。3.根据权利要求1所述的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂，其特征在于，按重量百分比计，包括嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液90.8％和助剂9.2％。4.根据权利要求2或3所述的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂，其特征在于，所述助剂包括乳化剂OP
‑
10、山梨酸钾和乙二醇，其重量比为20:1:25。5.一种昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、取低温甘油管中保藏的嗜线虫肠杆菌LY2W菌悬液，在NBTA鉴别培养基上划线，于28℃下培养24～36h，挑取鉴别培养基的初生型单菌落；S2、把步骤S1挑取的单菌落在NA培养基平板培养基上划线，于28℃下培养24～36h，挑取单菌落；S3、把步骤S2挑取的单菌落接种入LB液体培养基中，在28℃、180r/min的条件下培养12～14h,得到种子菌液；S4、将步骤S3培养的种子菌液按体积比6％的接种量接种于摇瓶发酵培养基中，于28℃震荡培养24～28h得到发酵液；S5、将步骤S4获得的发酵液进行离心，得到发酵上清液，并用无菌滤器过滤除菌，得嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液；S6、按重量百分比计，将步骤S5所得嗜线虫肠杆菌LY2W发酵上清液80～93％和助剂7～20％混合均匀，得昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂。6.根据权利要求5所述的昆虫病原线虫共生菌发酵上清液制剂的制备方法，其特征在于，按重量百分比计，所述摇瓶发酵培养基为：蛋白胨1.5～2.9％、葡萄糖0.4～1.5％、三七三...
【专利技术属性】
技术研发人员：廖春丽，李冰冰，王莲哲，姬晓娜，付桃桃，尹守恒，马栋豪，马金海，李纪军，王艳斌，马伟皓，赵一锴，
申请(专利权)人：河南城建学院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。