一株高效杀蚜虫生防真菌及其应用制造技术

本发明专利技术筛选得到一株高效杀蚜虫生防真菌HK

【技术实现步骤摘要】
araneicola HK
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1接种至马铃薯葡糖糖培养基中，摇床28℃，160r/min培养7d后放置于暗处28℃静置培养20d，然后去除菌丝得发酵液，将发酵液采用乙酸乙酯萃取，得发酵液的乙酸乙酯提取物减压蒸馏后(无乙酸乙酯)用于防治蚜虫。
[0013]本专利技术的目的之三是提供一种杀虫剂，所述杀虫剂的有效成分包括所述的高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1的发酵产物。
[0014]优选的，所述发酵产物为：将所述高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1进行发酵培养，得发酵液，将发酵液采用乙酸乙酯萃取，即得发酵产物。
[0015]优选的，所述发酵产物为：将所述高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1接种至培养基，摇床28℃，160r/min培养7d后放置于暗处28℃静置培养20d床培养，然后去除菌丝得发酵液；发酵液采用乙酸乙酯萃取，减压蒸馏后即得发酵产物。
[0016]优选的，所述虫为蚜虫。
[0017]本专利技术所取得的效果：
[0018]本专利技术提供一株高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1，将该菌株摇床培养7d后放置于暗处28℃静置培养20d，所得发酵液再进行乙酸乙酯，所得乙酸乙酯提取物的24h杀虫LC
50
为32.14mg/mL。该菌株发酵产物杀虫效率高，杀虫效果好且环境友好，可广泛应用于蚜虫的防治。
[0019]本专利技术所提供的杀虫剂的制备方法操作简便，易推广，且无需使用大量有机溶剂(仅需按体积比1:1使用乙酸乙酯提取12h)，成本低，绿色安全，在蚜虫防治方面具有很好的应用前景。
附图说明
[0020]图1为高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1的菌落图(正面)。
[0021]图2为高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1的菌落图(背面)。
具体实施方式
[0022]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0023]实施例1蜡蚧菌HK
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1的筛选及鉴定
[0024]1.菌落形体观察
[0025]菌株HK
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1在PDA培养基上28℃培养12天的菌落形态呈现白色、圆形，绒毛状的表面，菌落中央微微隆起，背部呈奶油黄色，日平均生长速率为4.07mm/d。菌丝直径约1.2μm，孢子长
×
宽大小范围约(3.5～6.0)μm
×
(1.1～3.3)μm，平均5.6μm
×
2.1μm，平均长宽比2.7，孢子形态成椭圆状或水滴状，分生孢子梗由分支到末端逐渐变细。
[0026]2.菌株HK
‑
1系统发育分析
[0027]以ITS1：5
’‑
TCCGTAGGTGAACCTGCGG
‑3’
，ITS4:5'
‑
TCCTCCGCTTATTGATATGC
‑
3'为引物，PCR反应体系为25μL:2
×
Taq PCR MasterMix 12.5μL，ddH2O 9.5μL，正反引物各1μL，DNA模板1μL。PCR反应条件：94℃4min，94℃30s，59℃45s，72℃1min，32个循环，72℃10min，送上海生物工程公司得到一段565bp保守基因。在GenBank中进行Blast比对，菌株HK
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1的ITS序列与GenBank中Lecanicillium sp.strain 1262(登录号MZ400603)相似度为99.11％，与Lecanicillium araneicola(登录号NR121208)相似度为95.61％。选择GenBank
中蜡蚧菌属相似度最高的7个种建立系统发育树。最终鉴定该菌种属于蜡蚧菌Lecanicillium araneicola。
[0028]实施例2菌株HK
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1杀虫物质提取
[0029]马铃薯葡糖液体培养基(PDA液体培养基)：土豆200g，葡萄糖20g，定容至1000mL，自然pH。
[0030]马铃薯葡糖固体培养基(PDA固体培养基)：土豆200g，葡萄糖20g，16g琼脂，定容至1000mL，自然pH。
[0031]将在PDA固体培养基上培养15d的菌株HK
‑
1接种于PDA液体培养基，接种量为5％(v/v)，在28℃、180rpm条件下摇床培养7d后转到暗处静置20d，再用四层纱布过滤菌丝获得菌液(即发酵液)，按体积比1:1，在菌液中加入乙酸乙酯进行萃取，得乙酸乙酯相，把乙酸乙酯相进行减压浓缩，获得乙酸乙酯粗提物(即发酵液的提取物)，其色黄，味似焦糖。
[0032]实施例3菌株HK
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1粗提物毒力测定
[0033]采用浸茎饲养法进行杀蚜生物测定。使用丙酮将实施例2的乙酸乙酯粗提物调成浓度梯度为0、7.5、15、30、60、120mg/mL，把截取保留了顶端的豇豆茎分别浸入到不同浓度梯度的溶液中，15s后取出，待丙酮挥干后，用湿润的棉花包裹茎靠近根部的一端，置于湿润的培养皿上，试虫选择最后一次蜕皮完成两日内的成虫，每皿20只，每组重复3次，24h记录死亡数，并统计死亡率。以丙酮处理作为对照。结果表明24h杀虫LC
50
为32.14mg/mL。
[0034]以上所述仅为本专利技术的较佳实施例而已，并不用限制本专利技术，凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1，其特征在于，所述高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1于2022年3月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO:2022252。2.权利要求1所述的高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1在防治蚜虫方面的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：将所述高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1进行发酵培养，得发酵产物，将发酵产物用于防治蚜虫。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵产物为发酵液。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵产物为发酵液的乙酸乙酯提取物。6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：将所述高效杀蚜虫生防真菌Lecanicillium araneicola HK
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1接种至马铃薯葡...

【专利技术属性】
技术研发人员：靳鹏飞，刘盛科，缪卫国，刘文波，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：