高产多糖灵芝新菌株HMGIM-S140529及其分子标记和人工栽培方法技术

本发明专利技术公开了高产多糖灵芝新菌株HMGIM

【技术实现步骤摘要】
高产多糖灵芝新菌株HMGIM
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S140529及其分子标记和人工栽培方法


[0001]本专利技术属于生物技术应用领域，具体涉及一种高产多糖灵芝新菌株HMGIM
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S140529及其分子标记、特异性引物对和人工栽培方法。

技术介绍

[0002]灵芝[Ganoderma lucidum(Curtis)P.Karst.]是伞菌纲[Agaricomycetes]、多孔菌科[Polyporaceae]、灵芝属[Ganoderma P.Karst.]真菌。灵芝自古被奉为“上上药”，是唯一“一味成方”的法定中药。据《神农本草经》记载，灵芝具有“安精魂，增智慧，益心气，坚筋骨、好颜色，久食轻身不老，延年神仙”等功效。先后收录于《美国草药药典和治疗纲要》、《中华人民共和国药典》等中外官方药典，灵芝的药用价值得到广泛的认可。目前已经确定灵芝子实体中含有9类300余种化合物，具有生理活性的成分有灵芝多糖、三萜类化合物、蛋白质、多肽、核苷类、呋喃类、甾醇、生物碱和氨基酸等。灵芝多糖是灵芝重要的活性物质，具有抗肿瘤、降血糖血脂、免疫调节、抗氧化、抗疲劳、消炎、调节肠道菌群、神经保护、保肝和抗抑郁等广泛的药理活性。因此，选育高产多糖的灵芝菌株可为灵芝加工业的发展提供高质量的原材料。
[0003]《中华人民共和国药典》中明确要求合格的灵芝子实体多糖含量须大于等于0.9％。中国市场的灵芝子实体多糖含量一般为0.9
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1.5％，含量较低难以满足人们药用和保健食品的需求。根据本研究团队前期调研发现，国内灵芝主产区(浙江、陕西、安徽、山东、福建、吉林)主要使用韩芝系列引进种，虽然本土选育的沪农、龙芝等品种有一定的推广，但普及度远不如引进种，究其原因是已有品种在产量、稳定性、有效成分含量等重要农艺性状方面表现并不突出。我国拥有丰富的野生资源，与市场种亲缘关系较远，具有丰富的遗传多样性，对野生资源进行调研、采集、驯化、筛选，可为高品质灵芝品种选育提供种质资源。
[0004]品种选育是系统且需要长期坚持的工作，而灵芝可通过无性繁殖的方式复制生产用种，这在很大程度上打击了育种家的积极性，影响整个产业的发展，且造成菌种同物异名、同名异物的混乱现象。传统的食用菌菌种鉴定主要依赖菌丝体拮抗、子实体形态等方式。菌丝体拮抗现象的判断受人为因素影响较大，且亲缘关系较近的菌株之间拮抗线不明显，无法有效区分。子实体外观形态受环境因素(温度、湿度、光照、氧气)影响较大，且获得子实体耗时数月，不利于快速有效鉴别菌种。随着分子生物学技术的发展，DNA分子标记技术以其简单、快速、不受发育时期和环境因素限制的优点广泛应用于遗传育种和物种亲缘关系鉴别等方面。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于提供一株高产多糖、生长速度快、耐高温的灵芝HMGIM
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S140529及其分子标记和人工栽培方法。
[0006]灵芝(Ganoderma lucidum)HMGIM
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S140529于2022年1月13日保藏于广东省微生物
菌种保藏中心(GDMCC)，地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为GDMCC No：62208。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供上述灵芝HMGIM
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S140529的栽培方法，其包括步骤：菌丝培养、出芝管理和采收。
[0008]优选，具体步骤为：
[0009]一、培养基配方
[0010]母种培养基：按质量分数计，包括马铃薯20％+葡萄糖2％+蛋白胨1％+琼脂2％+磷酸二氢钾0.3％+硫酸镁0.15％+维生素B10.001％，溶剂为水；
[0011]生产种培养基：按质量分数计，包括98
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99％高粱+1
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2％碳酸钙，pH自然；
[0012]栽培料：按质量分数计，包括50％杂木屑，38％棉籽壳，10％麦麸，2％碳酸钙；含水量60
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65％，pH自然；
[0013]二、栽培流程
[0014]菌丝培养：在无菌操作条件下取灵芝HMGIM
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S140529菌块接种于母种培养基，湿度50％
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60％，黑暗培养至菌丝体长满斜面；将母种菌丝体转接至生产种培养基进行扩大培养，黑暗培养至菌丝体长满袋，随后将生产种菌丝体接种于栽培料，黑暗培养，湿度50％
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60％，定时换气以保持二氧化碳浓度4000ppm以下，培养菌丝长满袋后，继续培养7
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10天进行后熟期培养。
[0015]出芝管理：菌丝后熟期满后进行催蕾，打开栽培袋盖子，把栽培袋竖排放置，26～28℃，空气相对湿度保持在90％～95％条件下，散射光光照，出芝管理后在栽培料开口位置开始形成原基，调整湿度为80～90％，待菌盖开始分化时，每天换新风，子实体边缘生长点消失，开始喷粉前调节空气湿度至80％；
[0016]采收：菌盖背面大量弹射孢子时采收子实体。平均袋产量为51.2
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64.4g，菌盖长为11.7
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14.7cm,菌柄高度为1.1
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2.1cm，菌盖厚度为9.6
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12.8mm。
[0017]进一步优选，所述的栽培流程为：
[0018]菌丝培养：在无菌操作条件下取灵芝HMGIM
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S140529菌块接种于母种培养基，湿度50％
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60％，25℃恒温黑暗培养8
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12天至菌丝体长满斜面；将母种菌丝体转接至生产种培养基进行扩大培养，25℃恒温黑暗培养至菌丝体长满袋，随后将生产种菌丝体接种于栽培料，25℃恒温黑暗培养，湿度50％
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60％，定时换气以保持二氧化碳浓度4000ppm以下，培养18
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20天至菌丝长满袋后，同条件培养7
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10天进行后熟期培养；
[0019]出芝管理：菌丝后熟期满后进行催蕾，打开栽培袋盖子，把栽培袋竖排放置，26～28℃，空气相对湿度保持在90％～95％条件下，散射光光照8h/d，出芝管理8天左右在栽培料开口位置开始形成原基，调整湿度为80～90％，待菌盖开始分化时，每天换新风2次，每次1h，子实体边缘生长点消失，开始喷粉前调节空气湿度至80％；
[0020]采收：菌盖背面大量弹射孢子时采收子实体。
[0021]本专利技术采用全基因组重测序技术获得了多个菌株的基因组序列信息，通过生信分析获得InDel变异位点集，有针对性地设计了特异性引物，通过PCR扩增获得了野生灵芝HMGIM
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S140529的特异DNA片段，即为灵芝菌株HMGIM
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S140529的分子标记。
[0022]所述的灵芝菌株HMGIM
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S140529的分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1、S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.灵芝(Ganoderma lucidum)HMGIM
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S140529，保藏编号为GDMCC No：62208。2.一种权利要求1所述的灵芝HMGIM
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S140529的栽培方法，其特征在于，包括步骤：灵芝HMGIM
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S140529菌丝培养、出芝管理和采收。3.根据权利要求2所述的栽培方法，其特征在于，具体步骤为：一、培养基配方母种培养基：按质量分数计，包括马铃薯20％+葡萄糖2％+蛋白胨1％+琼脂2％+磷酸二氢钾0.3％+硫酸镁0.15％+维生素B10.001％，溶剂为水；生产种培养基：按质量分数计，包括98
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99％高粱+1
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2％碳酸钙，pH自然；栽培料：按质量分数计，包括50％杂木屑，38％棉籽壳，10％麦麸，2％碳酸钙；含水量60
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65％，pH自然；二、栽培流程菌丝培养：在无菌操作条件下取灵芝HMGIM
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S140529菌块接种于母种培养基，湿度50％
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60％，黑暗培养至菌丝体长满斜面；将母种菌丝体转接至生产种培养基进行扩大培养，黑暗培养至菌丝体长满袋，随后将生产种菌丝体接种于栽培料，黑暗培养，湿度50％
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60％，定时换气以保持二氧化碳浓度4000ppm以下，培养菌丝长满袋后，继续培养7
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10天进行后熟期培养；出芝管理：菌丝后熟期满后进行催蕾，打开栽培袋盖子，把栽培袋竖排放置，26～28℃，空气相对湿度保持在90％～95％条件下，散射光光照，出芝管理后在栽培料开口位置开始形成原基，调整湿度为80～90％，待菌盖开始分化时，每天换新风，子实体边缘生长点消失，开始喷粉前调节空气湿度至80％；采收：菌盖背面大量弹射孢子时采收子实体。4.根据权利要求3所述的栽培方法，其特征在于，所述的栽培流程为：菌丝培养：在无菌操作条件下取灵芝HMGIM
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S140529菌块接种于母种培养基，湿度50％
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60％，25℃恒温黑暗培养8
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12天至菌丝体长满斜面；将母种菌丝体转接至生产种培养基进行扩大培养，25℃恒温黑暗培养至菌丝体长满袋，随后将生产种菌丝体接种于栽培料，25℃恒温黑暗培养，湿度50％
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60％，定时换气以保持二氧化碳浓度4000ppm以下，培养18
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20天至菌丝长满袋后，同条件培养7
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10天进行后熟期培养；出芝管理：菌丝后熟期满后进行催蕾，打开栽培袋盖子，把栽培袋竖排放置，26～28℃，空气相对湿度保持在90％～95％条件下，散射光光照8h/d，出芝管理8天左...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡曼君，胡惠萍，梁晓薇，吴晓贤，刘远超，卓丽君，王傲，李向敏，谢意珍，吴清平，黄龙花，肖春，雍天乔，陈少丹，高雄，
申请(专利权)人：广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：