一种共培养表皮葡萄球菌发酵液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种共培养表皮葡萄球菌发酵液及其应用。本发明专利技术在添加了益生元成分的培养基中，接种表皮葡萄球菌CCSM0287和CCSM0285共同好氧培养，经过离心分离得到共培养发酵液；该发酵液能够促进角质形成细胞的增殖与迁移，在3D皮肤模型上能够促进β防御素的表达，具有改善皮肤生物屏障与生理屏障的作用，从而修复皮肤、增强皮肤防御力。修复皮肤、增强皮肤防御力。修复皮肤、增强皮肤防御力。

【技术实现步骤摘要】
一种共培养表皮葡萄球菌发酵液及其应用


[0001]本专利技术涉及一种共培养表皮葡萄球菌发酵液及其应用，属于微生物


技术介绍

[0002]皮肤微生态是皮肤最外层的生物屏障，平衡的皮肤微生态对保护皮肤发挥着非常重要的作用。皮肤表面的菌群对维持皮肤微生态平衡和皮肤屏障功能至关重要。根据不同微生物在皮肤表面定植的时间长短，可将其分为常驻菌群与暂驻菌群。皮肤常驻菌群能够通过占位作用形成生物屏障，使致病菌及外籍菌无法立足于皮肤表面并产生抑制病原菌的化合物；还能分解皮脂甘油三酯为脂肪酸，形成乳化皮脂膜，既对自身及表皮角质形成细胞具有营养作用，又可防止皮表水分蒸发，促进免疫器官发育，增强机体免疫。
[0003]皮肤菌群的标志性细菌成员主要来自棒状杆菌属、丙酸杆菌属、葡萄球菌属；标志性真菌成员主要是马拉色菌属。皮肤表面的不同菌属均发挥着不同的作用，特别是葡萄球菌属中的表皮葡萄球菌属，多项研究表明，该菌属对皮肤具有一定的有益作用。比如皮肤角质形成细胞可以感受到表皮葡萄球菌释放短链脂肪酸，调节自身生长速率和炎性反应，作用于伤口愈合；表皮葡萄菌属也参与适应性免疫的发展过程，帮助建立皮肤对包括表皮葡萄球菌在内的体表微生物耐受性。表皮葡萄球菌还可以产生丝氨酸蛋白酶ESP，抑制金黄色葡萄球菌生物膜的形成。
[0004]皮肤表面的菌群之间相互影响，这些影响包含不同菌属之间的生长代谢以及不同代谢情况下对皮肤的作用等，因此，具有一定的群体效应。将分离出来的皮肤菌，进行单一培养，可发现该皮肤菌的生长代谢情况，同时可以在体外评价单一皮肤菌代谢物质对皮肤的功效作用。申请人之前申报的专利技术专利2022107046246中，自健康皮肤上分离到表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)CCSM0287和CCSM0285，其保藏编号分别为CCTCC No.M2022779和CCTCC No.M 2022780。将上述两种表皮葡萄球菌分离鉴定后，进行单一培养并进行了其代谢产物对皮肤作用的评价，实验发现：表皮葡萄球菌CCSM0287和CCSM0285的发酵液上清对DPPH自由基具有良好清除活性，能降低维生素K3引起的人角质形成细胞ROS含量，CCSM0287的发酵液上清对透明质酸酶具有良好抑制作用，且能降低LPS刺激巨噬细胞产生的IL
‑
6水平。但在体外将两株表皮葡萄球菌进行共同培养，并进行代谢产物的研究还未有报道。
[0005]益生元，包括多元醇类、多糖类以及富含多糖类的植物提取物成分，对人类健康具有积极的作用，能够促进微生物的生长。不同种类的微生物对益生元的利用不同，针对性的选择益生元可以用来研究其对皮肤微生物的作用影响。
[0006]因此，申请人在单一表皮葡萄球菌培养基基础上，添加一定量的益生元成分，将两株表皮葡萄球菌进行共培养，获得表皮葡萄球菌共培养发酵液，经过评价该共培养发酵液，其能够促进角质形成细胞的增殖与迁移、同时促进β防御素的表达。

技术实现思路

[0007]针对上述问题，本专利技术提供了一种共培养表皮葡萄球菌发酵液及其应用。本专利技术在NB液体培养基中添加一定的益生元成分，接入两株表皮葡萄球菌CCSM0287和CCSM0285进行共培养，经过离心分离得到共培养发酵液；该发酵液能够促进角质形成细胞的增殖与迁移，在3D皮肤模型上能够促进β防御素的表达，具有改善皮肤生物屏障与生理屏障的作用，从而修复皮肤、增强皮肤防御力。
[0008]本专利技术的技术方案是：一种共培养表皮葡萄球菌发酵液，其特征是，在添加了益生元成分的NB培养基中，接种表皮葡萄球菌CCSM0287和CCSM0285共同好氧培养12
‑
20h后，将发酵液离心，滤膜过滤，得到表皮葡萄球菌共培养的发酵液。
[0009]上述益生元成分为多元醇、多糖类以及富含多糖的植物提取物成分。优选的，益生元成分为甘油、丁二醇、低聚果糖、燕麦β
‑
葡聚糖、鼠李糖、果寡糖、海藻糖、松茸多糖等中的一种或几种，更优选为甘油和燕麦β
‑
葡聚糖。
[0010]优选的，在NB培养基中添加的益生元成分的用量为0.2
‑
5.0％。
[0011]其制备方法具体包括以下步骤：
[0012]1)将活化后的表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)CCSM0287、CCSM0285菌株挑取单菌落分别接种于TSB液体培养基中，置于30～40℃摇床中，振荡培养12～20h，测定发酵液的OD
600
值，调整菌体OD
600
值为0.9～1.1，作为种子液；
[0013]2)分别以体积比0.3％～2.5％的接种量将两株菌的种子液共同接种于含有益生元的NB液体培养基中，30～40℃摇床中，振荡培养12～20h，得到表皮葡萄球菌的发酵液；将发酵液离心，滤膜过滤，得到表皮葡萄球菌共培养的发酵液。
[0014]上述表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)CCSM0287和CCSM0285，已于2022年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，其保藏编号分别为CCTCC No.M2022779和CCTCC No.M 2022780(见专利技术专利2022107046246)。
[0015]本专利技术还提供了上述的共培养表皮葡萄球菌发酵液在促进角质形成细胞的增殖与迁移，在3D皮肤模型上促进β防御素的表达，进而改善皮肤生物屏障与生理屏障，修复皮肤、增强皮肤防御力、抗衰老方面的应用。
[0016]本专利技术的技术效果是：
[0017]1.与现有的单一表皮葡萄球菌培养相比，本专利技术提供了一种两株表皮葡萄球菌共培养发酵液，且特别筛选了益生元成分添加到培养基中进行两株表皮葡萄球菌的培养。
[0018]2.本专利技术制备的共培养表皮葡萄球菌发酵液，具有较好的修复效果，能够促进角质形成细胞的增殖，在添加量1.0％的条件下，细胞增殖率达到118.43％，且共培养发酵液的细胞增殖率显著优于0287发酵液和0285发酵液；相比较于BC组，在作用24h、48h后1.0％的共培养发酵液显著促进角质形成细胞的迁移，且优于PC组；在3D皮肤模型上能够β防御素(HBD1、HBD2)的表达，与BC组相比，2％的发酵液使β防御素HBD1、HBD2蛋白含量显著上升，提升率分别为42％、38％。
[0019]3.制备该发酵液的两株菌株来源于健康皮肤，经过发酵富集能够获取表皮葡萄球菌的有益代谢产物，这些代谢产物对皮肤微生物屏障、生理屏障具有较好的修复作用。
[0020]与此同时，两株表皮葡萄球菌的共培养初步模拟了在皮肤上多种菌群存在的情况，以及在共培养情况下菌体代谢产物对皮肤的影响，为后续研究多种皮肤菌群共培养奠
定了基础，也为深入研究皮肤菌群对皮肤的影响提供研究方法。
附图说明
[0021]图1为不同样品在不同浓度下对角质形成细胞增殖率的影响；
[0022]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种共培养表皮葡萄球菌发酵液，其特征是，在添加了益生元成分的NB培养基中，接种表皮葡萄球菌CCSM0287和CCSM0285共同好氧培养，将发酵液离心分离得到表皮葡萄球菌共培养的发酵液。2.如权利要求1所述的一种共培养表皮葡萄球菌发酵液，其特征是，所述益生元成分为多元醇、多糖类以及富含多糖的植物提取物成分。3.如权利要求2所述的一种共培养表皮葡萄球菌发酵液，其特征是，所述益生元成分为甘油、丁二醇、低聚果糖、燕麦β
‑
葡聚糖、鼠李糖、果寡糖、海藻糖和松茸多糖中的一种或几种。4.如权利要求1所述的一种共培养表皮葡萄球菌发酵液，其特征是，在NB培养基中添加的益生元成分的用量为0.2
‑
5.0％。5.如权利要求1所述的一种共培养表皮葡萄球菌发酵液，其特征是，所述共同好氧培养时间为12
‑
20h。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李燕，袁春颖，杨素珍，韩婷婷，高春明，毛新宇，刘三岭，白天明，
申请(专利权)人：山东福瑞达生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：