一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽及其应用。所述抗原表位肽的氨基酸序列包括DTV、DMK和WRI中的一个或多个。利用本发明专利技术中提供的抗原表位肽，能够获得更多的针对VacA种不同抗原表位的特异性抗体，从而提高免疫学方法检测粪便中VacA降解物的准确性，有助于大大节约幽门螺杆菌感染的检测时间，且采样时不会对人体产生创伤。产生创伤。产生创伤。

【技术实现步骤摘要】
一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽及其应用


[0001]本专利技术涉及体外诊断
，尤其涉及一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽及其应用。

技术介绍

[0002]幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，HP)是一种螺旋形、微需氧、对生长条件要求十分苛刻的革兰氏阴性细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜活检组织中分离成功，是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类。世界上超过50％的人口受到过幽门螺杆菌的感染，而在有些国家几乎90％的人都感染过这种细菌。研究表明这种细菌感染会引起慢性胃炎、胃溃疡、胃萎缩等，并且与胃粘膜相关性淋巴组织淋巴瘤、胃癌的发生密切相关。世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中，幽门螺杆菌(感染)属于一类致癌物。
[0003]现在HP的检测方法主要有侵入性和非侵入性两大类，其中侵入性的检测方法主要依赖胃镜取材，对人体创伤性较大，价格也较昂贵；非入侵性的检测方法有PCR检测、血清抗体检测、呼气试验等，但也有一定的局限性，例如PCR法检测对检测人员的专业知识和操作技能要求较高，使用的检测仪器和耗材比较昂贵；血清抗体检测只能证明患者曾经感染过或正在感染中，无法准确判断治疗后患者是否已根除HP；呼气试验目前主要使用13C和14C同位素示踪，但服用过抗生素或拉唑类胃药会影响结果的准确性。
[0004]随着人类对HP毒力的深入研究发现，它已确定的致病因子包括鞭毛蛋白、尿素酶、热休克蛋白、空泡毒素(VacA)和细胞毒素相关因子(CagA)。其中VacA是HP的重要致病基因，其编码产生的分泌性蛋白能使真核细胞产生空泡样变性，进而引发细胞凋亡、细胞骨架重排等形态学改变。有研究显示，VacA在胃癌患者中检出率为63％。因此，检测粪便中VacA蛋白含量对预防和控制胃癌有重大意义，并且能够克服PCR检测、血清抗体检测和呼气试验检测HP感染的局限性。
[0005]VacA的编码基因存在于所有的HP菌株中，全长为3846bp，经过翻译和修饰后形成一个相对分子质量为95kDa的成熟毒素(包括37kDa的激活亚单位和58kDa的结合亚单位)。完整的VacA分子呈花瓣状或雪花状，由6～7个沿半径对称的单体组合成寡聚复合物，在酸性条件下解聚为单体。到达粪便排出时的VacA已经经过一系列的分解，变成了多肽，全长VacA中存在的部分抗原表位会被随机分解，造成针对这些表位的抗体无法检测出粪便中的VacA降解物，由于VacA在到达粪便前的降解位点存在随机性，被分解的抗原表位是不固定的，因此，挖掘VacA中更多的抗原表位，有助于开发针对VacA不同表位的特异性抗体，进而提高粪便中VacA降解物检测的准确性。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽及其应用。利用本专利技术中提供的抗原表位肽，能够促进针对VacA不同抗原表位的特异
性抗体的开发，从而提高免疫学方法检测粪便中VacA降解物的准确性，在幽门螺杆菌的检测中具有广泛的应用前景和实用价值。
[0007]本专利技术的具体技术方案为：第一方面，本专利技术提供了一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽，所述抗原表位肽的氨基酸序列包括DTV、DMK和WRI中的一个或多个。
[0008]专利技术人在人粪便中的空泡毒素(VacA)降解物(多肽)中，发现了三个抗原表位，均由三个串联氨基酸构成，分别是DTV、DMK和WRI，当肽段中存在三个抗原表位中的任意一个时，就能与VacA特异性抗体结合。
[0009]这些抗原表位的发现，有利于开发出更多针对VacA中不同抗原表位的特异性抗体，从而提高免疫学方法检测粪便中VacA降解物的准确性，有助于大大节约幽门螺杆菌感染的检测时间，且采样时不会对人体产生创伤。此外，在设计和合成空泡毒素抗原时，与传统重组表达的蛋白相比，针对这些特定抗原表位设计合成的抗原具有成本低、操作简便、易保存、稳定性高等特点，用其制备的特异性抗体检测粪便中降解物的阳性率更高。
[0010]第二方面，本专利技术提供了一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素抗原，所述抗原的抗原表位包括DTV、DMK和WRI中的一个或多个。
[0011]DTV、DMK和WRI作为粪便中VacA降解物的抗原表位，可直接设计合成人工VacA抗原多肽，有利于生产针对粪便中VacA降解物的特异性抗体。
[0012]作为优选，所述抗原的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的序列、如SEQ ID NO:2所示的序列和如SEQ ID NO:3所示的序列中的一个或多个。
[0013]进一步地，所述抗原为半抗原与载体蛋白的偶联物；所述半抗原的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的序列、如SEQ ID NO:2所示的序列和如SEQ ID NO:3所示的序列。
[0014]作为优选，所述抗原的氨基酸序列是空泡毒素中从N端开始的第34～420位氨基酸。该抗原可通过重组表达获得。
[0015]第三方面，本专利技术提供了所述抗原表位肽或所述抗原在制备针对粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的特异性抗体中的应用。
[0016]包含DTV、DMK或WRI肽段的抗原能够引发动物的免疫反应，产生针对粪便中VacA降解物的特异性抗体。
[0017]第四方面，本专利技术提供了一种针对所述抗原表位肽或所述抗原的特异性抗体。
[0018]第五方面，本专利技术提供了所述抗原表位肽或所述抗原或所述特异性抗体在制备诊断试剂中的应用，所述诊断试剂用于诊断幽门螺杆菌感染。
[0019]作为优选，所述诊断试剂的检测对象为粪便。
[0020]作为优选，所述诊断试剂为Elisa检测试剂盒或胶体金试剂条。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术提供了空泡毒素的三个抗原表位，利用这些抗原表位，能够获得更多的针对VacA不同抗原表位的特异性抗体，从而提高免疫学方法检测粪便中VacA降解物的准确性，有助于实现幽门螺杆菌的无创伤快速检测。
附图说明
[0022]图1为VacA蛋白第34～420位氨基酸片段的PCR产物。
[0023]图2为VacA全长蛋白的纯化产物。
[0024]图3为VacA蛋白第34～420位氨基酸片段的纯化产物。
[0025]图4为胶体金试剂条的示意图和检测结果分析图。其中，图4(A)为胶体金试剂条的示意图，图4(B)为检测结果分析图。
具体实施方式
[0026]下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。
[0027]总实施例一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽，所述抗原表位肽的氨基酸序列包括DTV、DMK和WRI中的一个或多个。
[0028]一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素抗原，所述抗原的抗原表位包括DTV、DMK和WRI中的一个或多个。
[0029]作为一种具体实施方式，所述抗原的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的序列、如SEQ ID NO:2所示的序列和如SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素的抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽的氨基酸序列包括DTV、DMK和WRI中的一个或多个。2.一种粪便中幽门螺杆菌空泡毒素抗原，其特征在于，所述抗原的抗原表位包括DTV、DMK和WRI中的一个或多个。3.如权利要求2所述的抗原，其特征在于，所述抗原的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的序列、如SEQ ID NO:2所示的序列和如SEQ ID NO:3所示的序列中的一个或多个。4.如权利要求3所述的抗原，其特征在于，所述抗原为半抗原与载体蛋白的偶联物；所述半抗原的氨基酸序列包括如SEQ ID NO:1所示的序列、如SEQ ID NO:2所示的序列和如SEQ ID NO:3所示的序列中的一个或多个。...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱悦，林洁，王轶雄，
申请(专利权)人：杭州博谱医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：