一种新冠抗原检测试剂条及其制备方法技术

本发明专利技术涉及新冠检测技术领域，具体而言，涉及一种新冠抗原检测试剂条及其制备方法，试剂条包括样品垫、硝酸纤维素膜、金标垫，样品垫包括样品垫处理液，样品垫处理液包括终浓度为1.0%

【技术实现步骤摘要】
一种新冠抗原检测试剂条及其制备方法


[0001]本专利技术涉及新冠检测
，具体而言，涉及一种新冠抗原检测试剂条及其制备方法。

技术介绍

[0002]在生物检测例如新冠病毒检测中，现有的检测技术以核酸检测为主，核酸检测具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点，是确诊新冠的“临床参考标准”，使用最为广泛的是实时荧光定量RT
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PCR技术，但是核酸检测由于采样不当、标本保存不当以及标本类型不同易造成假阴性结果，而且操作复杂、对实验室级别和实验操作人员要求高，检测时间久。
[0003]胶体金试剂条的实验原理类似于双抗夹心法，首先待测抗原与金标垫上的抗体结合成抗原抗体复合物，抗原抗体复合物移动至检测线时，会与包被在硝酸纤维素膜的抗体结合，形成两个抗体结合一个抗原（双抗体夹心）的金标复合物，故检测线呈红色。现有的胶体金试剂条，对于不同样本类型（口咽拭子、鼻咽拭子、鼻前庭拭子、唾液），存在非目标蛋白干扰的现象，导致病毒抗原检测结果不准确。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种新冠抗原检测试剂条及其制备方法，以解决非目标蛋白干扰以及实验室级别和实验操作人员要求高，检测时间久的技术问题。
[0005]本专利技术通过以下技术方案实现：一种新冠抗原检测试剂条，包括样品垫、硝酸纤维素膜、金标垫，样品垫包括样品垫处理液，样品垫处理液包括终浓度为1.0%
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3.0%的Tris、终浓度为0.5%
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1.5%的NaCl、体积比均为0.05%r/>‑
0.3%的Triton x
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100和S9，以及质量体积比为0.1mg/ml的清洁抗体C4。
[0006]通过以上技术方案，优化了样品垫处理液配方，并处理样品垫组成胶体金免疫层析试剂条从而大幅度提高敏感度和特异性，经过不同地点的大量临床验证，敏感度高达97.6%~100%，特异性高达98%~99.2%，解决了由于现有技术检测结果准确性问题，且胶体金免疫层析试剂条的使用无需专门的判读仪器，反应时间短，仅需15～20分钟即可完成检测，检测结果直观读取，检测人员无需掌握复杂的专业知识。
[0007]为了更好的实现本专利技术，进一步的，Tris终浓度为2.0%，NaCl终浓度为1%，Triton x
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100和S9的体积比均为0.1%。
[0008]为了更好的实现本专利技术，进一步的，硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。
[0009]为了更好的实现本专利技术，进一步的，金标垫包括含有胶体金溶液标记的T线和胶体金溶液标记的C线的金标垫处理液，胶体金溶液包括氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶液。
[0010]一种新冠抗原检测试剂条的制备方法，包括样品垫的制备、硝酸纤维素膜的包被、金标垫的制备和试剂条的组装。
[0011]为了更好的实现本专利技术，进一步的，样品垫的制备包括：S1：样品垫处理液的配制：称取Tris和NaCl溶于超纯水中得到Tris
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NaCl缓冲液，
Tris终浓度为1.0%
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3.0%，NaCl终浓度为0.5%
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1.5%，再加入Triton x
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100和S9混匀，Triton x
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100和S9的体积占比均为0.05%
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0.3%，最后加入清洁抗体C4，清洁抗体C4的质量体积比为0.1mg/ml，调pH值为7.2得到样品垫处理液；S2：将样品垫处理液按照30
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50μL/cm2均匀涂抹至玻璃纤维素膜Ⅰ，然后置于37
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55℃温度条件下烘干3
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8h。
[0012]为了更好的实现本专利技术，进一步的，硝酸纤维素膜的包被包括：S1：称取Na2HPO4.12H2O 2.0g、NaH2PO4.2H2O 0.4g、NaCl 8.0g、蔗糖 2.0g、海藻糖 0.5g溶于1000 mL超纯水，再加入Proclin300 1mL混匀后调pH值为7.2，得到包被缓冲液;S2：通过包被缓冲液将新冠N蛋白包被抗体2#和定性羊抗兔IgG稀释至终浓度为0.5mg/mL，采用喷金划线仪匀速划到硝酸纤维素膜上的检测线位置和质控线位置，置于37℃温度条件下的电热鼓风干燥箱烘干，烘干时长为3h。
[0013]为了更好的实现本专利技术，进一步的，金标垫的制备包括:S1：制备胶体金溶液，质量体积比为10%的氯金酸溶液和质量体积比为3%的柠檬酸三钠溶液混合加热，沸腾后开始计时6min，得到胶体金溶液；S2：制备金标垫处理液，胶体金溶液、碳酸钾溶液、新冠N蛋白标记抗体1#或兔IgG按照体积质量比为1mL：5μL：10μg，室温偶联1.5h，再添加BSA至终浓度为1%进行室温封闭1.0h，最后4℃，8000rpm/min离心10min，S3：通过胶体金复溶液复溶得到T线或C线标记溶液；胶体金复溶液为：Tris、BSA、蔗糖、Tween
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20、Proclin300、超纯水的质量体积比为6.0g：5.0g：10.0g：3mL：1000mL，pH值为8.0，再将T线标记溶液和C线标记溶液按照体积比为1:9混合，得到金标垫处理液；S4：将金标垫处理液按照30μL/cm2均匀涂抹至玻璃纤维素膜Ⅱ，37℃温度条件下烘干3h得到金标垫。
[0014]为了更好的实现本专利技术，进一步的，其特征在于，试剂条的组装包括：先将金标垫盖住硝酸纤维素膜下部1
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2mm，再将样品垫沿PVC胶板下缘粘贴，盖住金标垫1
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3mm，最后将吸水纸沿PVC胶板上缘粘贴，组装成试剂板，采用宽型切条机裁切为试剂条。
[0015]本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术通过优化样品垫处理液配方，并处理样品垫组成胶体金免疫层析试剂条从而大幅度提高敏感度和特异性，经过不同地点的大量临床验证，敏感度高达97.6%~100%，特异性高达98%~99.2%，解决了由于现有技术检测结果准确性问题，且胶体金免疫层析试剂条的使用无需专门的判读仪器，反应时间短，仅需15～20分钟即可完成检测，检测结果直观读取，检测人员无需掌握复杂的专业知识。
[0016]（2）通过优化样品垫处理液的配方及处理工艺，可有效去除非目标蛋白的干扰，也可满足不同样本类型的兼容性，提高敏感度和特异性。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对本专利技术中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0018]图1是本专利技术实施例的试剂条的构成示意图；图2是本专利技术样品垫处理液含不同比例的triton x
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100和S9时不同样本类型的约登指数结果；图3是本专利技术样品垫处理液配方优化后检测口咽拭子的结果；图4是本专利技术样品垫处理液配方优化后检测鼻本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠抗原检测试剂条，其特征在于，包括样品垫、硝酸纤维素膜、金标垫，样品垫包括样品垫处理液，样品垫处理液包括终浓度为1.0%
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3.0%的Tris、终浓度为0.5%
‑
1.5%的NaCl、体积比均为0.05%
‑
0.3%的Triton x
‑
100和S9，以及质量体积比为0.1mg/ml的清洁抗体C4。2.根据权利要求1所述的一种新冠抗原检测试剂条，其特征在于，Tris终浓度为2.0%，NaCl终浓度为1%，Triton x
‑
100和S9的体积比均为0.1%。3.根据权利要求1所述的一种新冠抗原检测试剂条，其特征在于，硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线。4.根据权利要求1所述的一种新冠抗原检测试剂条，其特征在于，金标垫包括含有胶体金溶液标记的T线和胶体金溶液标记的C线的金标垫处理液，胶体金溶液包括氯金酸溶液和柠檬酸三钠溶液。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的一种新冠抗原检测试剂条的制备方法，其特征在于，包括样品垫的制备、硝酸纤维素膜的包被、金标垫的制备和试剂条的组装。6.根据权利要求5所述的一种新冠抗原检测试剂条的制备方法，其特征在于，样品垫的制备包括：S1：样品垫处理液的配制：称取Tris和NaCl溶于超纯水中得到Tris
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NaCl缓冲液，Tris终浓度为1.0%
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3.0%，NaCl终浓度为0.5%
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1.5%，再加入Triton x
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100和S9混匀，Triton x
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100和S9的体积占比均为0.05%
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0.3%，最后加入清洁抗体C4，清洁抗体C4的质量体积比为0.1mg/ml，调pH值为7.2得到样品垫处理液；S2：将样品垫处理液按照30
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50μL/cm2均匀涂抹至玻璃纤维素膜Ⅰ，然后置于37
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55℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘萍，栾大伟，刘朝阳，段飞虎，杨俊红，李雅慧，臧子扬，
申请(专利权)人：博奥赛斯重庆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：