一种利用PCR产物条带数量差异鉴定达氏鲟性别方法技术

本发明专利技术公开了一种利用PCR产物条带数量差异鉴定达氏鲟性别方法，公开了一段达氏鲟基因组序列，利用该序列可以进行达氏鲟的雌雄鉴定。本发明专利技术还公开了在达氏鲟雌雄基因组DNA均可扩增出的阳性参考DNA片段。引物为提供的序列设计而成，利用引物对待测达氏鲟DNA进行PCR扩增，当扩增结果的产物在琼脂糖凝胶上显示的结果为3个条带时，则待测达氏鲟为雌性，当扩增结果的产物在琼脂糖凝胶上显示的结果为2个条带时，则待测达氏鲟为雄性。或者当扩增结果片段出现1402bp条带时，则待测达氏鲟为雌性，不出现1402bp条带时为雄性达氏鲟。本发明专利技术提供的达氏鲟序列片段可以快速有效鉴定达氏鲟雌雄，有效提高达氏鲟养殖效率和养殖合理性，人为调节养殖达氏鲟雌雄比例。节养殖达氏鲟雌雄比例。节养殖达氏鲟雌雄比例。

【技术实现步骤摘要】
一种利用PCR产物条带数量差异鉴定达氏鲟性别方法


[0001]本专利技术涉及一种利用PCR产物条带数量差异鉴定达氏鲟性别方法，属于动物分子遗传学领域。

技术介绍

[0002]长江鲟又称达氏鲟是我国长江上游特有品种，在研究地球气候变化和鱼类演化等方面具有重要的科学价值。近年来，由于过度捕捞、环境污染等原因，长江鲟的资源急剧减少，已成为极危级(CR)物种，濒临灭绝。因此，如何保护长江鲟资源显得十分迫切和必要。
[0003]大多数脊椎动物为雌雄异体，且在形态和生理上体现出明显的性别二态性。性别是决定两性生殖繁殖的关键环节。随着分子生物学的发展，多种类型的性别标记被开发出来，包括微卫星标记、单核苷酸多态性、随机扩增多态性DNA和限制性片段长度多态性。性别特异分子标记的开发应用和性别决定基因的鉴定一方面可以提高与性别相关的经济性状，为实现性控育种提供必要的工具；另一方面也为阐明鱼类性别决定的分子机理奠定基础。性别分子标记是开发性别控制技术的重要工具。
[0004]目前所有鱼类被开发的性别标记只能和雄性个体连锁或者只能和雌性个体连锁。只和单个性别连锁的性别标记都有一个共同的缺点。举个例子，某种鱼的性别连锁标记是和该品种鱼的雌性个体连锁，在雄性个体中扩不出目的片段，假如在实验操作过程中出现实验失误，比如DNA没有提取成功、药品遗漏或者加错导致的实验结果没有扩出目的片段，就会误以为该检测样本为雄性，实际上该实验不成功。为了避免该现象的出现，开发出一种特殊的性别标记非常必要，该性别标记在雌雄个体上面都能扩增出相应的DNA片段，但是在雌雄个体上面扩增的结果不完全相同，比如出现扩增的DNA片段大小不同或者扩增的DNA片段数量不同。本专利即提出了一种上述的达氏鲟特殊的性别标记。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种利用PCR产物条带数量差异鉴定达氏鲟性别方法。
[0006]一种雌性达氏鲟基因组特异性序列片段，雌性达氏鲟基因组特异性序列片段为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。
[0007]一种雌雄达氏鲟均可扩增出的阳性参考DNA片段，所述雌雄达氏鲟均可扩增出的阳性参考DNA片段为SEQ ID NO:2为所示核苷酸序列。
[0008]SEQ ID NO:1所示核苷酸序列和SEQ ID NO:2所示核苷酸序列应用于鉴定达氏鲟的性别。
[0009]所述的特异分子标记表现为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。所述的在雌雄达氏鲟基因组DNA均可扩增出的阳性参考DNA片段序列为SEQ ID NO:2所示核苷酸序列。
[0010]所述的序列SEQ ID NO:1所示核苷酸序列，为雌性达氏鲟基因组特异性片段，该片段引物为R6R2。具体片段为：
[0011]AGGGAGATTGTTGACTAGGATTCATTCGCTCTCTGTCACAGTCCCGCATATGTGATCAAGGTTCGTAGA
ACAGCTTTTACTTCTGCCCCTTTGTGCTGAATAATTTGGTGGACATTGATGTAGTGAGTCCATTTCCTGGGAATGAATAGCAAACCCAGTGTGTTATTGGCCCTTGTCCCAATAGTGTGATCCATCAATATACACTGATGTGGCAGTGACATCGGGTGTGGTTGTAAAGGGAGACGGCAGATGTGTTTGTGGGGGGGGTGCAGTCATGTGGGGTACCGGTGTATAGCAGGGCTGTGGGAAGCATGGCAACTGGTATGTGTTTACATGACAGGTTTCGTTCTGATAAAGACAGGGTCCACCCGGCCAATCGAGCGTTGGATATGCCCTTAACGCTGCCATTGAGCAAAAGTTGGATAGGAGTGTGTTCTGTTTGCACTGTAATGTGTTGAAAACCTGTAATAAATTTGAAATATAGAACAGCCCAATATACAGATAGCAGGTGACGAGTACACTGATCAAAAGCTTGCTCAACGGCTTTGAGTAGCCTTGAAGCGTAGGCGACGGGATGTAGCTTGGTATTTACTTCCTGTAACAAAACTGCAGAGAGAAGTTTTGGTAGCTGCAGTCTGCAAAATAAGGGGTTCATTAGAAGCCAGATTTCGGAGGGCATGTGCTTCTAGCAGGGAGGCTTTGAGAGATTCAAAAGCAGTCTAATGTTTGCTTTCCCATACCAACACATCCTTGCCTTTCCTGGAACCTTTCAACAGATCATAAAGTGGTTTAGCCTTGGATGAAAAGTCCTCAAACTCACAACAAAAATTGACCAGACCTAGAAAGGAACGTAAAGCAGTTTTCAGAGGTTGGCACAGGCAGCCACTGTACAGTTTCCACTTTGTGTTTGTCTGGGGACCGTCCTCCTTCCTCAATGAGTACCCCTAGAAAAGTAACAGAAGGTTGCATTAGTTGTGCTTTTTTGGGTTCAGATTGAGTCCTGCATTCTCTGTTGTTGTCAACAGCTCATCCAGCAGTGAGAGATGCTCCTCCTTTGAGTGTCTGTCAGTAAGTCATCGACATAATGTATTAAACATTGGGGTTTAGAGAAGCAGGACAAAATTTCAGAAAGTATTTGGTGAAAGAGCGTGGGAGAGTTGTGGAACCCTTGCGGAATTTTATTCCAGGTATACTGTGTATCGCCAAAAGTGAAACCAAATTTATAGCGTGATTCTGGTTTCACTGGCAGAGACCAGAAACCATTAAAAATGTCAAGAGCGGTGTAATAGCAGGCAGAAGGGGTTAACTCAGAAAGCACATTTGGGGTAGATGCGTCTACAGGTGCGCATATAGGTGTGTGTTTAAGTTCCATGTAATCAATTGTAAGTCGCCAAGAACCGTC
[0012]所述的在雌雄达氏鲟基因组DNA均可扩增出的阳性参考DNA片段序列(SEQ ID NO:2)的引物为R4R3，该片段具体信息为：
[0013]TTGGAGAAGCCTACTGGGAAAGACGCAGAAATTTTAATTTCCCAAATGTTATAGTTAAAAATGATCTGTTCTACAGGGTGAGCAATTCTAATATGTGAGAGCTGGTAGAACAGTTAATGGCCCCAAGGAAGTATAAAACAACAGTTTTGAAACTAGCCCATGGTCATTTTTTAGAGGGACAATTGGGAGTTCAGAAAACAAGGGAACACATTTAAAAAAGGTTTTATTGGATAGGAATATATCAAGAAGTGGAACAGTTTTGTGGGGCATGTCCAGAATGCCAATTGGTGTTGGCACAGAAACTGAGTTGAGCA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种雌性达氏鲟基因组特异性序列片段，其特征在于，雌性达氏鲟基因组特异性序列片段为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列。2.一种雌雄达氏鲟均可扩增出的阳性参考DNA片段，其特征在于，所述雌雄达氏鲟均可扩增出的阳性参考DNA片段为SEQ ID NO:2为所示核苷酸序列。3.权利要求1中SEQ ID NO:1所示核苷酸序列和权利要求2中SEQ ID NO:2所示核苷酸序列应用于鉴定达氏鲟的性别。4.根据权利要求3所述的鉴定达氏鲟性别的方法，其特征在于，包括用于达氏鲟雌雄鉴定的两对引物：R6R2F：为SEQ ID NO:3所示核苷酸序列；R6R2R：为SEQ ID NO:4所示核苷酸序列；R4R3F：为SEQ ID NO:5所示核苷酸序列；R4R3R：为SEQ ID NO:6所示核苷酸序列；雌性达氏鲟基因组特异性引物R6R2 F、R6R2R为SEQ ID NO:1所示核苷酸序列引物；R4R3F、R4R3R序列为SEQ ID NO:2所示核苷酸序列引物，引物R4R3F、R4R3R配合引物R6R2 F、R6R2R使用。5.权利要求4所述的引物在达氏鲟性别鉴定中应用。6.一种利用PCR产物条带数量差异鉴定达氏鲟性别方法，其特征在于，对待测达氏鲟的基因组DNA进行P...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡亚成，杨元金，杜合军，朱欣，王彬忠，刘雪清，肖衎，张德志，吴川，黄安阳，
申请(专利权)人：中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所，
类型：发明
国别省市：