一种血清中二甲基甘氨酸的检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种血清中二甲基甘氨酸的检测方法及其应用，所述检测方法包括以下步骤：(1)将待测样品与内标溶液混合离心，得到上清液，之后过柱洗脱，得到洗脱后样本；(2)将洗脱后样本与衍生化试剂、反应活化剂混合进行衍生化反应，将产物进行HPLC检测，根据检测结果计算待测样品中二甲基甘氨酸的含量。本发明专利技术提供的检测方法能够高效准确检测血清中二甲基甘氨酸的含量，为先天性心脏病的检测提供了全新的方法。新的方法。新的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种血清中二甲基甘氨酸的检测方法及其应用


[0001]本专利技术属于血液检测领域，具体涉及一种血清中二甲基甘氨酸的检测方法及其应用，尤其涉及一种全新高效的血清中二甲基甘氨酸的检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]先天性心脏病是最常见的先天性畸形，胎儿的超声检查在先天性心脏病的产前诊断中起着至关重要的作用，但是由于操作者的经验、胎儿胎位等各种因素的影响，临床上常出现漏诊。人体的血液几乎包含了人体的所有代谢物，它能全面地反映人体的生理生化状态，被研究人员广泛用于疾病的研究。
[0003]胆碱是甜菜碱的重要营养素和前体。动物研究表明，胆碱代谢缺陷与胎儿死亡或严重的神经化缺陷有关。二甲基甘氨酸是一种化学复合物，出现在胆碱向甘氨酸代谢的通路上，在体内胆碱的代谢产物甜菜碱在甜菜碱同型半胱氨酸转甲基酶的作用下，转移一个甲基基团而产生二甲基甘氨酸。人体血清中成分复杂，直接检测二甲基甘氨酸的灵敏度不高，且易受到血清中其他杂质的干扰。
[0004]柱前衍生化法是液相色谱
‑
质谱联用技术衍生化中十分重要的一种样品处理方法，其首先在色谱柱分离前预先将样品衍生化成适当的衍生物，然后再进入色谱柱分离后进行检测，来提高分析的灵敏度。近年来化学衍生化法越来越多地应用于各种难检物质的检测，日益受到人们的关注，然而目前尚无文献报道血清中二甲基甘氨酸的衍生化方法，因此，如何提供一种快速衍生化检测血清中二甲基甘氨酸的方法，成为了亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种血清中二甲基甘氨酸的检测方法及其应用，尤其提供一种全新高效的血清中二甲基甘氨酸的检测方法及其应用。本专利技术提供的检测方法能够高效准确检测血清中二甲基甘氨酸的含量，为先天性心脏病的检测提供了全新的方法。
[0006]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]一方面，本专利技术提供了一种血清中二甲基甘氨酸(N,N
‑
二甲基甘氨酸)的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
[0008](1)将待测样品与内标溶液混合离心，得到上清液，之后过柱洗脱，得到洗脱后样本；
[0009](2)将洗脱后样本与衍生化试剂溶液、反应活化剂溶液混合进行衍生化反应，将产物进行HPLC检测，根据检测结果计算待测样品中二甲基甘氨酸的含量。
[0010]上述方法通过将待测样品中的二甲基甘氨酸提取出，之后进行衍生化并检测含量，能够有效消除待测样品中其他物质的干扰，同时能够对二甲基甘氨酸进行有效检测，检测结果准确。
[0011]优选地，步骤(1)所述内标为二甲基甘氨酸
‑
d4(NNDI
‑
D4)；
[0012]优选地，步骤(1)所述内标溶液的浓度为15
‑
25μg/mL；
[0013]优选地，步骤(1)所述待测样品与内标溶液的体积比为10:(2
‑
3)。
[0014]其中，内标溶液的浓度可以是15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL、20μg/mL、21μg/mL、22μg/mL、23μg/mL、24μg/mL或25μg/mL等，待测样品与内标溶液的体积比可以是10:2、10:2.2、10:2.4、10:2.6、10:2.8或10:3等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0015]优选地，步骤(1)所述过柱洗脱采用C18柱进行。
[0016]优选地，步骤(1)所述洗脱的洗脱液为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数为3
‑
7％，例如3％、4％、5％、6％或7％等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0017]优选地，步骤(2)所述衍生化试剂包括4
‑
溴
‑
N
‑
甲基苄氨、苯异硫氰酸酯或1
‑
[(4
‑
二甲基氨基苯基)羰基]哌嗪中任意一种，优选4
‑
溴
‑
N
‑
甲基苄氨。
[0018]上述特定衍生化试剂能够有效对二甲基甘氨酸进行衍生化，提高检测的准确度；同时优选范围内的衍生化试剂的效果进一步提高。
[0019]优选地，步骤(2)所述洗脱后样本与衍生化试剂溶液、反应活化剂溶液的体积比为30:(3
‑
4):(0.8
‑
1.2)。
[0020]优选地，步骤(2)所述衍生化试剂溶液的浓度为8
‑
12mmol/L。
[0021]优选地，步骤(2)所述反应活化剂溶液的浓度为0.4
‑
0.6M。
[0022]其中，洗脱后样本与衍生化试剂溶液、反应活化剂溶液的体积比可以是30:3:0.8、30:3.3:0.9、30:3.5:1、30:3.7:1.1或30:4:1.2等，衍生化试剂溶液的浓度可以是8mmol/L、9mmol/L、10mmol/L、11mmol/L或12mmol/L等，反应活化剂溶液的浓度可以是0.4M、0.45M、0.5M、0.55M或0.6M等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0023]优选地，步骤(2)所述反应活化剂包括1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)。
[0024]优选地，步骤(2)所述衍生化反应的温度为55
‑
65℃，时间为25
‑
35min。其中，温度可以是55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃或65℃等，时间可以是25min、26min、27min、28min、29min、30min、31min、32min、33min、34min或35min等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
[0025]优选地，步骤(2)所述HPLC检测采用C18反向色谱柱进行。
[0026]优选地，步骤(2)所述HPLC检测的流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A包括甲酸水溶液，所述流动相B包括乙腈。
[0027]优选地，所述甲酸水溶液的质量分数为0.008
‑
0.012％。
[0028]优选的，步骤(2)所述HPLC检测的流动相流速为0.25
‑
0.35mL/min。
[0029]优选地，步骤(2)所述HPLC检测的柱温为43
‑
47℃。
[0030]其中，甲酸水溶液的质量分数可以是0.008％、0.009％、0.01％、0.011％或0.012％等，流动相流速可以是0.25mL/min、0.26mL/min、0.27mL/min、0.28mL/min、0.29mL/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清中二甲基甘氨酸的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)将待测样品与内标溶液混合离心，得到上清液，之后过柱洗脱，得到洗脱后样本；(2)将洗脱后样本与衍生化试剂溶液、反应活化剂溶液混合进行衍生化反应，将产物进行HPLC检测，根据检测结果计算待测样品中二甲基甘氨酸的含量。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述内标为二甲基甘氨酸
‑
d4；优选地，步骤(1)所述内标溶液的浓度为15
‑
25μg/mL；优选地，步骤(1)所述待测样品与内标溶液的体积比为10:(2
‑
3)。3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述过柱洗脱采用C18柱进行；优选地，步骤(1)所述洗脱的洗脱液为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液中乙腈的体积分数为3
‑
7％。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述衍生化试剂包括4
‑
溴
‑
N
‑
甲基苄氨、苯异硫氰酸酯或1
‑
[(4
‑
二甲基氨基苯基)羰基]哌嗪中任意一种，优选4
‑
溴
‑
N
‑
甲基苄氨；优选地，步骤(2)所述洗脱后样本与衍生化试剂溶液、反应活化剂溶液的体积比为30:(3
‑
4):(0.8
‑
1.2)；优选地，步骤(2)所述衍生化试剂溶液的浓度为8
‑
12mmol/L；优选地，步骤(2)所述反应活化剂溶液的浓度为0.4
‑
0.6M；优选地，步骤(2)所述反应活化剂包括1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述衍生化反应的温度为55
‑
65℃，时间为25
‑
35min。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述HPLC检测采用C18反向色谱柱进...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢宝刚，刘晓丹，张先超，吴乐，魏远旺，徐金标，
申请(专利权)人：嘉兴学院，
类型：发明
国别省市：