一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法技术

本发明专利技术属于生物医药领域，提供了一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法，包括：使用TGuide S96磁珠法土壤/粪便基因组DNA提取试剂盒完成核酸的提取；对核酸进行浓度检测，再进行扩增检测，扩增后PCR产物采用电泳对完整性进行检测，并测定DNA浓度和纯度；采用两步建库法，第一步以DNA为模板，设计带接头的引物进行PCR，第二步以第一步的PCR产物为模板进行PCR，在第二步建库时加上barcode/index；基于测序数据，对比健康人员与吸毒人员的口腔菌群，筛选出了差异明显的多种关键菌群选取其中的top5和top2建立随机森林模型，并用健康人员与吸毒人员的口腔菌群对随机森林模型进行了验证，证明了从口腔菌群角度进行吸毒鉴定的可行性。行性。行性。

【技术实现步骤摘要】
一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，特别涉及一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]吸毒行为严重危害社会治安，急需有效的吸毒鉴定方法来打击毒品犯罪。
[0004]在目前现有的毒品鉴定方法中，取哪种体液标本通常取决于获得样品的难易程度以及结果的分析和测试意义，例如收集尿液、血液。而血液和尿液样本仅能鉴定短时间内人员是否有毒品行为，不能鉴定人员长时间的吸毒情况。此外，血液和尿液样本是在警察局收集，不能在路边收集，导致样本收集的流程繁琐复杂，鉴定设备的费用昂贵，给毒品鉴定工作带来了不便。
[0005]专利CN202011322178.X公开了一种唾液微生物标记物及其在毒品检测中的应用，但专利技术人研究发现：该方法难以对吸毒年限长达10年的吸毒人员进行有效鉴定，其准确性和灵敏度也有待提高。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术从口腔菌群检测角度出发探索，提供了一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]本专利技术的第一个方面，提供了一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法，包括：
[0009]使用TGuide S96磁珠法土壤/粪便基因组DNA提取试剂盒完成核酸的提取；
[0010]对核酸进行浓度检测，再进行扩增检测，扩增后PCR产物采用电泳对完整性进行检测，并测定DNA 浓度和纯度；
[0011]采用两步建库法，第一步以DNA为模板，设计带接头的引物进行PCR，第二步以第一步的PCR产物为模板进行PCR，在第二步建库时加上barcode/index；
[0012]基于测序数据，对比健康人员与吸毒人员的口腔菌群，筛选出了差异明显的多种关键菌群，选取其中的top5和top2建立随机森林模型，并用健康人员与吸毒人员的口腔菌群对随机森林模型进行了验证，即得。
[0013]本专利技术的第二个方面，提供了一种用于吸毒鉴定的口腔菌群微生物，所述微生物包括特征菌属，用于鉴定吸毒情况，其中，所述特征菌属包括：unclassified_Leptotrichiaceae；Peptostreptococcus；
[0014]Abiotrophia；Parvimonas；Gemella；Granulicatella；Bergeyella；Filifactor；Fusobacterium；Alloprevotella；unclassified_Clostridiales_bacterium_oral_taxon_075；Dialister；Coryn ebacterium；Lautropia；Megasphaera；Aggregatibacter；
Campylobacter。
[0015]本专利技术的第三个方面，提供了上述的口腔菌群微生物在吸毒鉴定中的应用。
[0016]本专利技术的第四个方面，提供了一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定工具，采用上述的方法进行鉴定。
[0017]本专利技术的有益效果
[0018](1)本专利技术专利的突出优势在于本专利技术能对吸毒年限长达10年的吸毒人员进行检测，并且本专利技术对吸毒人群唾液宏基因组数据检测出的关键细菌进一步分析筛选，最终选出2
‑
5种更关键的口腔微生物标志物，因此本专利技术在吸毒鉴定的准确性和灵敏度上都更为可靠。
[0019](2)在本专利技术中，通过对比74名健康人员与194名吸毒人员的口腔菌群，筛选出了差异明显的17种关键菌群(unclassified_Leptotrichiaceae；
[0020]Peptostreptococcus；
[0021]Abiotrophia；Parvimonas；Gemella；Granulicatella；Bergeyella；Filifactor；Fusobacterium；Alloprevotella；unclassified_Clostridiales_bacterium_oral_taxon_075；Dialister；Coryn ebacterium；Lautropia；Megasphaera；Aggregatibacter；Campylobacter)，选取其中的top5(Aggregatibacter；Campylobacter；Gemella；Peptostreptococcus；unclassified_Lepto trichiaceae)和top2(Campylobacter；Peptostreptococcus)建立随机森林模型，并用31名健康人员与84名吸毒人员的口腔菌群对随机森林模型进行了验证(图1，图2)，结果证明了从口腔菌群角度进行吸毒鉴定的可行性。
[0022](3)与现有方法相比，本专利技术筛选出来的关键微生物标志物对于鉴定长期吸毒患者更加准确，特别是对于吸毒人员的吸毒年限为2年
‑
10年之久，并且他们的戒毒时间也在2年
‑
10年之久的具有较高的特异性和敏感性。
[0023](4)本专利技术制备方法简单、实用性强，易于推广。
附图说明
[0024]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示例性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0025]图1为本专利技术的设计思路图；
[0026]图2为随机森林模型，(A)top5菌群联合建模图；(B)top5各菌群分别建模图；(C)top2菌群联合建模图；(D)top2各菌群分别建模图。
具体实施方式
[0027]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本专利技术使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0028]一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法，包括：
[0029]使用TGuide S96磁珠法土壤/粪便基因组DNA提取试剂盒完成核酸的提取；
[0030]对核酸进行浓度检测，再进行扩增检测，扩增后PCR产物采用电泳对完整性进行检
测，并测定DNA浓度和纯度；
[0031]采用两步建库法，第一步以DNA为模板，设计带接头的引物进行PCR，第二步以第一步的PCR产物为模板进行PCR，在第二步建库时加上barcode/index；
[0032]基于测序数据，对比健康人员与吸毒人员的口腔菌群，筛选出了差异明显的多种关键菌群选取其中的top5和top2建立随机森林模型，并用健康人员与吸毒人员的口腔菌群对随机森林模型进行了验证，即得。
[0033]在一些实施例中，所述关键菌群包括：
[0034]unclassified_Lepto本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法，其特征在于，包括：使用TGuide S96磁珠法土壤/粪便基因组DNA提取试剂盒完成核酸的提取；对核酸进行浓度检测，再进行扩增检测，扩增后PCR产物采用电泳对完整性进行检测，并测定DNA 浓度和纯度；采用两步建库法，第一步以DNA为模板，设计带接头的引物进行PCR，第二步以第一步的PCR产物为模板进行PCR，在第二步建库时加上barcode/index；基于测序数据，对比健康人员与吸毒人员的口腔菌群，筛选出了差异明显的多种关键菌群选取其中的top5和top2建立随机森林模型，并用健康人员与吸毒人员的口腔菌群对随机森林模型进行了验证，即得。2.如权利要求1所述的基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法，其特征在于，所述关键菌群包括：unclassified_Leptotrichiaceae；Peptostreptococcus；Abiotrophia；Parvimonas；Gemella；Granulicatella；Bergeyella；Filifactor；Fusobacteriu m；Alloprevotella；unclassified_Clostridiales_bacterium_oral_taxon_075；Dialister；Coryn ebacterium；Lautropia；Megasphaera；Aggregatibacter；Campylobacter。3.如权利要求1所述的基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法，其特征在于，所述top5包括：Aggregatibacter；Campylobacter；Gemella；Peptostreptococcus；unclassified_Lept otrichiaceae。4.如权利要求1所述的基于口腔菌群检测的吸毒鉴定方法，其特征在于，所述top2包括：Campylobacter；Peptostreptococcus。5.如权利要求1所述的基于口腔菌群检测的吸毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙允东，王大伟，冯语，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属省立医院山东省立医院，
类型：发明
国别省市：