一种糖化血红蛋白-C肽联合检测试剂盒制造技术

本申请涉及医学检验的技术领域，具体公开了一种糖化血红蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种糖化血红蛋白
‑
C肽联合检测试剂盒


[0001]本申请涉及医学检验的
，更具体地说，涉及一种糖化血红蛋白
‑
C肽联合检测试剂盒。

技术介绍

[0002]糖化血红蛋白是红细胞中的血红蛋白与血清中的糖类通过非酶反应相结合的产物。形成糖化血红蛋白的非酶反应具有持续、缓慢、不可逆的特点，因此，糖化血红蛋白的含量不受即时血糖浓度的影响，能够准确反映糖尿病患者糖代谢状况以及近3个月内的平均血糖水平，是评估糖尿病患者长期血糖控制水平的重要指标。
[0003]C肽是含31个氨基酸的多肽，由胰岛素原裂解产生。胰岛素原存在于胰岛β细胞中，一分子胰岛素原裂解产生一分子C肽和一分子的A链、B链，而A链、B链用于合成胰岛素，故C肽与胰岛素共同从β细胞分泌，且摩尔量相等。同时，C肽主要由肾脏分解，且C肽的含量不受体内、体外胰岛素等影响，也不被肝脏灭活或者代谢，因此，C肽的含量能较准确的反映胰岛β细胞的功能。
[0004]同时参考糖化血红蛋白与C肽两项重要指标的检测结果，能更准确地了解患者糖代谢状况和胰岛素分泌情况。因此，有必要开发一种适于在临床中推广的糖化血红蛋白
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C肽联合检测手段。
[0005]荧光定量免疫层析技术具有操作简便、检测快速、便携性强等优点，能同时适用于糖化血红蛋白检测和C肽检测。但是，血液样本中糖化血红蛋白浓度远超免疫层析试纸条抗体的定量范围，现有的糖化血红蛋白检测试剂盒在使用时需要对样本进行稀释，通常为100倍以上；而C肽在血液中的浓度低，现有的C肽检测试剂盒在使用时尽量避免对样本进行稀释，如果按照糖化血红蛋白检测的操作对样本进行稀释，C肽浓度会低于定量限，显著影响结果的准确性。在检测前，无论对样本稀释与否，都无法使上样量同时处于糖化血红蛋白和C肽的定量范围内，因此，现有基于荧光定量免疫层析原理开发的试剂盒，只能单独对其中一个指标进行检测。

技术实现思路

[0006]为了实现糖化血红蛋白和C肽的联合检测，本申请提供一种糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒。
[0007]本申请提供的糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒，采用如下技术方案：一种糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒，所述试剂盒包括检测卡和稀释液，所述检测卡的C肽检测线上包被的抗体为C肽单克隆抗体，所述C肽单克隆抗体；所述糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒在使用时，样本稀释15
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30倍。
[0008]本申请的糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒基于荧光定量免疫层析技术，采用双抗体夹心法对糖化血红蛋白和C肽分别定量检测。检测卡由底板和沿样本层析方向顺次搭接粘贴于底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫组成。检测卡的结合垫和检测垫上分别
具有能与待测物质特异性结合的抗体。在层析过程中，含有待测物质的液体自样品垫流向结合垫，结合垫上带有荧光微球标记的抗体能与待测物质结合，并随待测物质继续流向检测垫，使待测物质也带上荧光标记；检测垫上的抗体通过包被的方式固定在特定位置，形成检测线，当待测物质流经检测线时，会与检测线上的抗体结合，被固定在检测线上。层析结束后，当光源照射到检测卡上时，检测线激发出荧光信号，被光电转换器接收后转化为电信号，电信号的强弱反映出待测物质的浓度。
[0009]在本申请中，同时对糖化血红蛋白和C肽两种物质进行检测，所以检测卡的结合垫上具有分别能与糖化血红蛋白和C肽特异性结合的两种荧光微球标记的抗体；检测垫上通过在不同的位置包被糖化血红蛋白单克隆抗体和C肽单克隆抗体分别形成糖化血红蛋白检测线和C肽检测线。
[0010]本申请中，C肽检测线上包被的C肽单克隆抗体，与现有试剂盒使用的C肽抗体相比，具有更高的灵敏度，有效降低了C肽定量限，即使在样本进行了一定倍数的稀释，上样时C肽浓度较低的情况下，仍然能实现准确定量。
[0011]对C肽检测线上的抗体进行优化后，能够满足对C肽进行准确定量的样本稀释倍数最高可达30倍。但是，目前采用荧光定量免疫层析法对糖化血红蛋白进行检测时样本稀释倍数在100倍以上，而本申请选择的最大稀释倍数为30倍。当采用稀释倍数为30倍的情况下，对于糖化血红蛋白检测来说，仍然存在上样量超出定量范围的可能性。
[0012]本申请检测卡的结合垫上荧光微球标记的血红蛋白抗体(血红蛋白分为糖化血红蛋白和非糖化血红蛋白；此荧光微球标记的血红蛋白抗体既能结合糖化血红蛋白又能结合非糖化血红蛋白)的喷涂量低于血红蛋白上样量，使样本中的糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白在层析过程中与结合垫上的血红蛋白抗体饱和反应且成比例结合。
[0013]糖化血红蛋白检测线上，糖化血红蛋白单克隆抗体的包被量高于糖化血红蛋白上样量，使得样本中所有的糖化血红蛋白均能与检测线上的抗体结合，与标记荧光抗体结合的糖化血红蛋白在糖化血红蛋白检测线上发出的荧光信号强度与样本中糖化血红蛋白占总血红蛋白的比例成正比。
[0014]本方式无需测定样本中糖化血红蛋白和总血红蛋白的绝对含量，采用糖化血红蛋白占总血红蛋白的比例(％)来表示糖化血红蛋白浓度，与临床及实验室的表示方式一致，即使在样品过量的情况下依然能够实现糖化血红蛋白浓度的准确定量。从而解决了样本稀释倍数低导致上样量超出糖化血红蛋白定量范围的问题。
[0015]血红蛋白位于红细胞内，对糖化血红蛋白进行检测需要裂解红细胞，因此，稀释液在检测中的除了起到稀释样本，还起到裂解细胞的重要作用。若稀释液对细胞裂解不充分，不仅不能充分释放血红蛋白，影响糖化血红蛋白检测结果的准确性；未能被裂解的细胞还会作为有形成分，干扰免疫层析过程，进一步影响各项结果的准确性。
[0016]因此，样本稀释倍数的确定除了要考虑糖化血红蛋白和C肽的定量范围，稀释液的裂解细胞效果也是重要的考虑因素。
[0017]本申请提供的糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒，在样本检测前，将样本稀释15
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30倍。当将样本稀释30倍时，稀释后的样本中C肽的浓度高于C肽定量限，可以实现C肽定量检测；当将样本稀释15倍时，使用0.25％ Triton 100的磷酸盐缓冲液能够裂解样本中的细胞，检测结果的准确性符合临床分析要求。
[0018]本申请通过在C肽检测线上采用灵敏度更高的C肽单克隆抗体，使得样本稀释后仍能对C肽进行准确定量。本申请还采用只检测糖化血红蛋白占总血红蛋白的比例的策略，使得样本稀释倍数低，血红蛋白上样量超出定量范围的情况下，仍能够对糖化血红蛋白进行定量检测。本申请还对样本检测前的稀释倍数进行限定，能够保证使稀释液充分裂解样本中的细胞，使样本稀释后糖化血红蛋白和C肽的浓度均处于定量范围，实现了糖化血红蛋白和C肽的联合检测和精确定量。
[0019]进一步地，所述糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒在使用时，样本稀释18
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25倍。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测卡和稀释液，所述检测卡的C肽检测线上包被的抗体为C肽单克隆抗体，所述C肽单克隆抗体；所述糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒在使用时，将样本稀释15
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30倍。2.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒，其特征在于，所述糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒在使用时，将样本稀释18
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25倍。3.根据权利要求1所述的糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒，其特征在于，所述稀释液包含以下组分：烷基硫酸盐、鱼精蛋白和小分子酰胺类化合物。4.根据权利要求3所述的糖化血红蛋白
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C肽联合检测试剂盒，其特征在于，所述稀释液中各组分的重量份如下：每1000份所述稀释液中，包含所述烷基硫酸盐2.5
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5份、所述鱼精蛋白4
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8份、所述小分子酰胺类化合物10
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【专利技术属性】
技术研发人员：李超辉，周志伟，伍波，尹美移，沈晨光，蒋宇珊，王秋阳，陈卓，吴智广，董晓宁，
申请(专利权)人：北京鸿宇泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：