一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及病原培养技术领域，尤其涉及一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基及其制备方法和应用。选择性培养基包括猪肺220

【技术实现步骤摘要】
一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及病原培养
，尤其涉及一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是巴氏杆菌科的一种革兰氏阴性菌，体积较小，不具有运动性，形态多样(从单球杆菌到丝状链)，在生长过程中需要V因子(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD)。感染副猪嗜血杆菌(HPS)可导致患病猪出现食欲减退、关节肿胀、呼吸困难、鼻腔有分泌物排出、流产以及共济失调等症状，严重可导致死亡；仔猪感染后可在短时间内发病，病死率高；急性发病康复后的仔猪，有可能出现慢性关节炎等症状，严重影响猪后期的生长速度，延长猪的育肥周期，降低词料转化率，影响企业的经济效益。
[0003]HPS对营养要求相对较高，成长需要依赖V因子，临床中分离该菌相对较为困难。副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道内的寄生菌，鼻腔和气管的病原菌检测并不能对该病菌进行诊断。可以从纤维素渗出物、发病猪的内脏器管实质和肺炎病猪的肺脏病变部位对副猪嗜血杆菌进行分离鉴定，从而对该病进行诊断。目前对于该致病菌的分离培养主要选用加有NAD因子和胎牛血清的TSA培养基进行分离，但是该培养基培养的HPS生长缓慢容易被杂菌竞争性抑制而造成分离失败的风险，因此在分离HPS过程中急需开发一种可以提高HPS生长速度同时可以抑制杂菌生长的选择性培养基。

技术实现思路

[0004]为克服上述现有技术的不足，本专利技术提供了一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基及其制备方法和应用。该选择性培养基可以很好的用于HPS菌株的分离，提高HPS生长速度同时可以抑制杂菌生长。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]本专利技术的第一目的是提供一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基，所述选择性培养基的配方如下：
[0007]猪肺220
‑
280g；
[0008]葡萄糖1
‑
3g；
[0009]琼脂粉13
‑
17g；
[0010]蛋白胨8
‑
12g；
[0011]氯化钠3
‑
7g；
[0012]壳聚糖8
‑
12g；
[0013]丙酸钙3
‑
7g；
[0014]青梅多糖13
‑
17g；
[0015]氢氧化钠调节pH值为7.8
±
0.1；
[0016]去离子水加至1L。
[0017]其中猪肺经处理后为副猪嗜血杆菌(HPS)提供生长所需要的营养物质，包括烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)；葡萄糖和蛋白胨可提供碳源、氮源和微量元素，NaCl可维持均衡渗透压；壳聚糖能够抑制革兰氏阳性菌的生长，同时不影响革兰氏阴性菌的生长；青梅多糖可以抑制培养基中葡萄球菌、大肠杆菌的生长，减少杂菌的生长；丙酸钙可抑制霉菌生长，保证了培养基不受霉菌污染；氢氧化钠可调节pH值。
[0018]进一步地，所述选择性培养基的配方如下：
[0019]猪肺250g；
[0020]葡萄糖2g；
[0021]琼脂粉15g；
[0022]蛋白胨10g；
[0023]氯化钠5g；
[0024]壳聚糖10g；
[0025]丙酸钙5g；
[0026]青梅多糖15g；
[0027]氢氧化钠调节pH值为7.8；
[0028]去离子水加至1L。
[0029]本专利技术的第二目的是提供一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0030]S1、配制基本营养液：将配方量的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨、氯化钠溶于700mL去离子水中，充分溶解后，用氢氧化钠调节pH值为7.8
±
0.1，然后用去离子水定容至800mL，高压灭菌后，得基本营养液；
[0031]S2、配制选择性培养基：取配方量的猪肺，加200mL去离子水后置于破壁机中进行破壁处理，然后于
‑
40～
‑
30℃反复冻融2
‑
3次，无菌过滤器过滤至S1所得冷却至55
‑
58℃的基本营养液中，加入配方量的壳聚糖、丙酸钙和青梅多糖，摇匀溶解，倒平板，得选择性培养基。
[0032]进一步地，S1中，所述高压灭菌为121℃高压灭菌20
‑
30min。
[0033]进一步地，S2中，所述无菌过滤器为0.22μm微孔滤膜。
[0034]本专利技术的第三目的是提供了上述副猪嗜血杆菌的选择性培养基在分离副猪嗜血杆菌中的应用。
[0035]与现有技术相比，本专利技术具有的有益效果是：
[0036]1.本专利技术以猪肺为选择培养基的主要成分，经破壁冻融及无菌过滤处理，为依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的副猪嗜血杆菌提供所需要的营养物质，同时也为副猪嗜血杆菌提供了最适宜其生长的环境，提高了副猪嗜血杆菌生长速度。本专利技术制备的选择性培养基在分离HPS时，经过6h就能分离到目的菌株，HPS菌株的生长时间缩短了4倍，同时对所分离得到的HPS菌株的生物学特性没有影响，能够用于HPS菌株的快速分离鉴定，可降低分离鉴定成本，并提高分离准确率。
[0037]2.本专利技术添加了壳聚糖抑制革兰氏阳性菌的生长，同时不影响革兰氏阴性菌的生长；青梅多糖可以抑制培养基中葡萄球菌、大肠杆菌的生长，减少杂菌的生长；丙酸钙可抑制霉菌生长，保证了培养基不受霉菌污染。通过在选择性培养基中添加壳聚糖、青梅多糖和
丙酸钙在抑制杂菌生长的同时，可以提高HPS菌株的分离率。
[0038]3.本专利技术提供的选择性培养基所培育的副猪嗜血杆菌分离率高(26.67％)，特异性和稳定性强，解决了猪场送检副猪嗜血杆菌分离率低的问题，为后期副猪嗜血杆菌药敏试验及疫苗的研究提供保障。
具体实施方式
[0039]下述实施例中的实验方法，除非另有指明均为常规方法，本专利技术所涉及原料、试剂、器械除非另有指明，均为普通市售品，皆可通过市场购买获得。
[0040]以下通过具体实施例详细说明本专利技术的技术及特点，但这些实施例并非用以限定本专利技术的保护范围。
[0041]下面根据具体实施方式对本专利技术技术方案做进一步详细的描述。
[0042]器械与试剂
[0043](1)器械：苏州净化SW
‑
CJ
‑
1FD超净工作台、CHP
‑
80S二氧化碳培养箱、STIK MJ
‑
54A高压灭菌锅
[0044](2)TSA+NAD培养基的制备：取15g胰酪胨、5g大豆木瓜蛋白酶水解物、5g氯化钠、15g琼脂溶于1000mL的去离子水中，充分溶解后于121℃高压灭菌15min，冷却至55℃后加入1.5mg NAD，最后过滤除菌备用。
[0045]实施例1：制备副猪嗜血杆菌的选择本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基，其特征在于，所述选择性培养基的配方如下：猪肺220
‑
280g；葡萄糖1
‑
3g；琼脂粉13
‑
17g；蛋白胨8
‑
12g；氯化钠3
‑
7g；壳聚糖8
‑
12g；丙酸钙3
‑
7g；青梅多糖13
‑
17g；氢氧化钠调节pH值为7.8
±
0.1；去离子水加至1L。2.根据权利要求1所述的选择性培养基，其特征在于，所述选择性培养基的配方如下：猪肺250g；葡萄糖2g；琼脂粉15g；蛋白胨10g；氯化钠5g；壳聚糖10g；丙酸钙5g；青梅多糖15g；氢氧化钠调节pH值为7.8；去离子水加至1L。3.权利要求1或2所述的一种副猪嗜血杆菌的选择性培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、配制基本营养液：将配方量的...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓红玉，覃智斌，张志榕，邓政，丁能水，万文峰，吴有林，
申请(专利权)人：福建傲芯种业科技集团有限公司漳州傲农现代农业开发有限公司福建傲农生物科技集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：