一种多花黄精组织培养方法技术

本发明专利技术涉及药用植物组织培养领域，具体公开了一种多花黄精组织培养方法，为以多花黄精未成熟种子经冷藏和机械损伤处理后得到的种子作为外植体进行组织培养。本发明专利技术的方法使用未成熟种子为材料，冷藏打破休眠，机械损伤处理促进种胚萌发得到外植体，后续针对外植体构建了一套快速、大量繁殖出多花黄精小苗的组培体系，可实现多花黄精的工厂化育苗，加快分子育种时代的推进。育种时代的推进。育种时代的推进。

【技术实现步骤摘要】
一种多花黄精组织培养方法


[0001]本专利技术涉及药用植物组织培养领域，尤其涉及一种多花黄精组织培养方法。

技术介绍

[0002]多花黄精(Polygonatum cyrtonema)为百合科多年生单子叶草本植物，具有极高的药用价值，传统中医认为其具有补脾，补精气，壮筋骨，益精髓，润肺生津的作用。现代医学研究表明黄精具有抗衰老，抗肿瘤，降血脂，降血脂等功效。随着黄精药用价值和经济价值的不断开发，野生黄精被掠夺性采挖，导致野生黄精资源日益稀少，严重制约了多花黄精的开发利用。单靠采挖野生资源这一种方式，已远不能满足国内外市场的需求，加之多花黄精自身的生长特点，野生资源恢复困难，在很大程度上对生物多样性造成破坏。
[0003]目前，多花黄精的繁殖方法主要有无性繁殖和有性繁殖两种，即根状茎繁殖和种子繁殖。种子繁殖存在着采集难度大、发芽率低、育苗周期长(一般三年育苗移栽)等问题。所以在当前的人工栽培中，繁殖主要依靠根茎的无性繁殖，但该方法也存在着很多缺点，例如：繁殖系数低、根茎用量大和多次繁殖容易积累病毒等，而组织培养既能实现快速大量繁殖，又能较好地保持优良性状，可实现多花黄精的工厂化育苗，加快分子育种时代的推进。
[0004]现如今已有多例关于多花黄精组织培养的研究的报道，但仅有少数几例有构建完整的组织培养体系，且他们的研究多以多花黄精成熟种子或根状茎作为启动材料，用来培养无菌苗。以成熟种子进行组织培养的技术缺陷主要集中在发芽时间长、愈伤组织诱导困难、特定植物激素不能经过高压蒸汽灭菌、不定芽生长势弱、后代性状分化严重等。而以多花黄精根状茎进行组织培养的技术缺陷则主要集中在消毒困难、实验难以重复、随继代次数的增加生长势降低等问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对多花黄精组培中存在的问题，通过利用未成熟的多花黄精果实中的未成熟种子作为外植体，对其进行机械损伤处理后进行组培生根成苗，提供了一种优质、高效的多花黄精组培方法。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种多花黄精组织培养方法，所述方法包括以多花黄精未成熟种子经冷藏和机械损伤处理后得到的种子作为外植体进行组织培养。
[0007]上述方法中，所述未成熟种子从花凋谢后50
‑
70天采摘的多花黄精未成熟果实中收集，此时多花黄精未成熟果实的果皮绿色，果实直径8
‑
9毫米。
[0008]上述方法中，所述机械损伤处理为切除种脐周围部分组织。
[0009]上述方法中，所述机械损伤处理具体为在种脐往上1mm处切除切包含种脐在内的部分组织。
[0010]上述方法中，所述冷藏为4℃冷藏5天，目的是打破休眠。
[0011]上述方法中，所述方法还包括如下步骤：将外植体接种到初代培养基上培养得到带芽小球茎；将所述带芽小球茎接种到继代培养基上培养至获得大量带不定芽的愈伤组
织；将所述带不定芽先后接种到不定芽增殖培养基和/或壮苗培养基上增殖获得多花黄精无根苗；
[0012]所述初代培养基为向MS基本培养基中添加6
‑
BA、2,4
‑
D、蔗糖和凝固剂得到的固体培养基，所述初代培养基中6
‑
BA的含量为2.0
‑
3.0mg/L、2,4
‑
D的含量为1.0
‑
1.5mg/L；
[0013]所述继代培养基为向MS基本培养基中添加6
‑
BA、NAA、蔗糖和凝固剂得到的固体培养基，所述继代培养基中6
‑
BA的含量为2.0mg/L、NAA的含量为0.1mg/L；
[0014]所述不定芽增殖培养基为向MS基本培养基中添加6
‑
BA、TDZ、NAA、2,4
‑
D、蔗糖和凝固剂得到的固体培养基，所述不定芽增殖培养基中6
‑
BA的含量为1.5mg/L、TDZ的含量为0.5mg/L、NAA的含量为0.5mg/L、2,4
‑
D的含量为0.5mg/L；
[0015]所述壮苗培养基为向MS基本培养基中添加6
‑
BA、2,4
‑
D、蔗糖和凝固剂得到的固体培养基，所述壮苗培养基中6
‑
BA的含量为3.0mg/L、2,4
‑
D的含量为0.15mg/L。
[0016]上述方法中，所述初代培养基具体可为初代培养基1或初代培养基2；所述初代培养基1中6
‑
BA的含量为2.0mg/L、2,4
‑
D的含量为1.0mg/L；所述初代培养基2中6
‑
BA的含量为3.0mg/L、2,4
‑
D的含量为1.5mg/L。
[0017]上述方法中，所述方法还包括将多花黄精无根苗接种到生根培养基上进行生根培养得到多花黄精生根苗的步骤，所述生根培养基为向1/2MS基本培养基中添加IBA、蔗糖和凝固剂得到的固体培养基，所述生根培养基中IBA的含量为1.0mg/L。
[0018]所述初代培养基、所述继代培养基、所述不定芽增殖培养基、所述壮苗培养基的pH值均为6.1
±
0.1，所述生根培养基的pH值为6.1
±
0.1。
[0019]所述凝固剂为琼脂，所述初代培养基、所述继代培养基、所述不定芽增殖培养基、所述壮苗培养基中，琼脂的含量为7
‑
9g/L；所述生根培养基中，琼脂的含量为7
‑
9g/L。
[0020]获取所述外植体包括消毒的步骤。
[0021]所述得到带芽小球茎，需暗培养5天后再于光照时长14h/d条件下培养25
‑
35天，可为30天。
[0022]所述得到不定芽，需培养25
‑
35天，可为30天。
[0023]所述获得多花黄精无根苗，需先后在不定芽增殖培养基和壮苗培养基上各培养25
‑
35天，可为30天。
[0024]所述得到多花黄精生根苗，需培养25
‑
35天，可为30天。
[0025]本专利技术的多花黄精组织培养方法，还包括将多花黄精生根苗炼苗后移栽定植。
[0026]本专利技术以7月中旬未成熟种子作为启动材料，具有实验操作简单不繁琐(所用植物激素均能高压蒸汽灭菌)、打破休眠和消毒方式简单、种子萌发速度快、培养过程中生长势强等优点。在初代培养时带芽小球茎诱导率高、诱导速度快，在继代培养时实现愈伤组织的大量增殖和数量可观的不定芽生出，在不定芽的增殖与壮苗培养过程中均能实现百分之百增殖壮苗效果，整根无菌体系在不考虑增殖的情况下三到四个月即可建立完整的组织快繁体系，在考虑增殖生长的情况下六个月就能获得大量无菌苗，因此本专利技术可以为多花黄精的工厂化育苗提供理论与技术支持。
附图说明
[0027]图1为本专利技术实施例1中机械损伤处理示意图。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多花黄精组织培养方法，其特征在于，所述方法为以多花黄精未成熟种子经冷藏和机械损伤处理后得到的种子作为外植体进行组织培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述未成熟种子从花凋谢后50
‑
70天采摘的多花黄精未成熟果实中收集。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述机械损伤处理为切除种脐周围部分组织。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述机械损伤处理具体为在种脐往上1mm处切除切包含种脐在内的部分组织。5.根据权利要求1
‑
4任一所述的方法，其特征在于，所述冷藏为4℃冷藏5天。6.根据权利要求1
‑
5任一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：将外植体接种到初代培养基上培养得到带芽小球茎；将所述带芽小球茎接种到继代培养基上培养至获得大量带不定芽的愈伤组织；将所述带不定芽先后接种到不定芽增殖培养基和/或壮苗培养基上增殖获得多花黄精无根苗；所述初代培养基为向MS基本培养基中添加6
‑
BA、2,4
‑
D、蔗糖和凝固剂得到的固体培养基，所述初代培养基中6
‑
BA的含量为2.0
‑
3.0mg/L、2,4
‑
D的含量为1.0
‑
1.5mg/L；所述继代培养基为向MS基本培养基中添加6
‑
BA、NAA、蔗糖和凝固剂得到的固体培养基，所述继代培养基中6
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BA的含量为2.0mg/L、NAA的含量为0.1mg/L；所述不定芽增殖培养基为向MS基本培养基中添加6
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【专利技术属性】
技术研发人员：李宁，杨国群，汤阳灿，黄黎君，禹佩瑶，陈嘉丽，林增，蒋东，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：