一种三螺旋胶原蛋白真皮水凝胶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种三螺旋胶原蛋白真皮水凝胶及其制备方法和应用，涉及美容领域。所述的制备方法包括（1）猪皮的前处理；（2）猪皮的去免疫原性处理；（3）助滤吸附；（4）分离纯化；（5）水凝胶制备和（6）除菌过滤步骤，本申请采用猪皮作为胶原来源通过特定处理，使得到的活性胶原具有与人体皮肤胶原一致的完整三螺旋结构，并通过多糖改性得到胶原蛋白水凝胶，可用于补充皮肤细胞外基质胶原蛋白，达到抗衰效果。达到抗衰效果。达到抗衰效果。

【技术实现步骤摘要】
一种三螺旋胶原蛋白真皮水凝胶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及美容领域，具体地，本专利技术涉及一种三螺旋胶原蛋白真皮水凝胶及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]皮肤是人体最大的器官，是人体的外屏障，皮肤的完整性对于人类有着重要的作用。随着年龄的增长，衰老的皮肤细胞逐渐积累，并可通过旁分泌方式将衰老表型传递到邻近细胞，这些衰老细胞可以诱导或加速皮肤临近细胞的衰老相关功能障碍。导致皮肤厚度、再生能力和屏障效应降低，其特征是皮肤变薄、产生细纹。
[0003]胶原蛋白是皮肤真皮层结缔组织最主要的成分，具有良好的生物学性质与功能，主要表现在：1、低抗原性；2、生物降解性：在体内蛋白酶的作用下，胶原的肽链发生水解而逐渐被打断，造成三螺旋结构的破坏，致使胶原被水解，而胶原降解产物80%作为氨基酸可循环利用，20%形成尿素被代谢；3、良好的生物相容性：胶原蛋白与宿主细胞及组织之间具有良好的相互作用，表现出相互影响的协调性，具有良好的诱导自体胶原再生的能力。
[0004]但由于天然胶原蛋白分子量大，且为蛋白类物质，后期加工受到一定的限制，特别是应用在化妆品上面，除了良好的成膜保湿性能，在可溶性的改进以及自组装发挥抗衰效果上需要有更好的技术专利技术和应用，现阶段国内外对胶原蛋白的获取有两种方式，一种是动物皮或跟腱的提取，另一种是用基因工程制备，基因工程重组胶原蛋白在氨基酸种类和序列上和自然胶原还有不小的差距，目前只适用于局部领域。而动物提取在已公开的专利里，对脂质的处理很难做到充分的去除，获得的胶原溶液多呈现乳浊状，另外，现有专利获得的胶原水溶性差、分子量大，在护肤品领域的应用受到极大限制。
[0005]胶原现有技术更多关注于胶原的提取和纯化，在美容领域多用于植入剂的形式，此类型胶原技术侧重于三螺旋结构的完整，而胶原结构越完整，分子量越大，水溶性越差，甚至完全不溶于水，在实际应用方面影响推注的顺畅和弥散的均匀，在涂抹型护肤品上只能做到成膜保湿，而完全无法渗透抗衰。
[0006]如中国专利申请202111067335.1中公开了一种高纯度胶原蛋白的提取工艺，所述的提取工艺包括跟腱预处理步骤和胶原蛋白提取纯化步骤，在实施过程中通过合理控制预处理过程中的试剂，以及各种试剂的浓度，混合方式以及加入顺序，明显提高了预处理过程中跟腱脂肪的去除效率，提高了胶原蛋白的纯度和活性，并且得到的胶原蛋白具有完整的三螺旋结构，安全性更好，可满足化妆品，医疗器械、组织工程等需求，但是该申请制备的胶原蛋白并没有关注其水溶性和分子量大小。
[0007]再如，中国专利申请202111067165.7中公开了一种胶原蛋白植入剂及其制备方法，该专利技术还提供了胶原蛋白纤维的制备方法，即包括：（1）动物跟腱的前处理；（2）酶解消化；（3）助滤吸附；（4）分离纯化；（5）除菌过滤以及（6）胶原蛋白纤维的制备，该专利技术提供的方法得到的胶原分子自聚集后有形状分明的纤维结构，每条纤维暴露完全并相互交错形成纤维网，同时能清晰观测到胶原纤维的周期性横纹D带，能形成较好的纤维形态具有更高的
分子规整度；胶原纤维粗细均匀，具有更好的弹性强度，但是该申请制备的胶原蛋白同样没有关注其水溶性和分子量大小。
[0008]因此，需要提供一种安全无毒，有去免疫原性，具有与人体皮肤胶原一致的完整三螺旋结构的活性胶原，并通过改性得到胶原蛋白水凝胶，用于补充皮肤细胞外基质胶原蛋白，达到抗衰效果。

技术实现思路

[0009]为了达到上述目的，本申请提供了一种三螺旋胶原蛋白真皮水凝胶及其制备方法和应用。本申请采用猪皮作为胶原来源通过特定处理，使得到的活性胶原具有与人体皮肤胶原一致的完整三螺旋结构，并通过多糖改性得到胶原蛋白水凝胶，可用于补充皮肤细胞外基质胶原蛋白，达到抗衰效果。
[0010]为达到本专利技术的技术效果，本专利技术是通过以下技术方案来实现：一方面，本申请提供了一种三螺旋胶原蛋白真皮水凝胶的制备方法，包括如下步骤：(1)猪皮的前处理：取动物猪皮加入含有EDTA的胰蛋白酶溶液中浸泡，冲洗；然后用除垢剂溶液浸泡并震荡，冲洗，得到前处理后的猪皮；(2)猪皮的去免疫原性处理：将步骤(1)中前处理后的猪皮加入中性蛋白酶溶液中浸泡，冲洗；然后用除垢剂溶液浸泡并震荡，冲洗；重复步骤(1)和步骤(2)1
‑
3遍后，得到去免疫原性猪皮；(3)猪皮的α
‑
1 ,3
‑
半乳糖抗原处理：将步骤(2)得到的去免疫原性猪皮用α
‑
1 ,3
‑
半乳糖苷酶溶液浸泡，冲洗后即得沉淀物A；(4)助滤吸附：将步骤(3)得到的沉淀物A中加入助滤剂溶液搅拌后过滤，收集上清液，备用；(5)分离纯化：将步骤(4)中收集的上清液进行浓缩后，通过阳离子交换介质吸附胶原蛋白后再洗脱分离，最后得到洗脱液；(6)水凝胶制备：向步骤(5)的洗脱液中加入浓度为10
‑
40mg/mL的改性多糖，所述的洗脱液与改性多糖的质量比为5:1
‑
1:3，进行改性，得到水凝胶；(7)除菌过滤：将步骤(6)获得的水凝胶，用0.22um的过滤膜除菌过滤，得到无菌可溶性胶原水凝胶溶液。
[0011]上述步骤（1）中所述的含有EDTA的胰蛋白酶溶液中所述EDTA的浓度为0.01wt％
‑
0.04wt％；所述胰蛋白酶的浓度为0.25wt％
‑
0.35wt％；优选地，上述步骤（1）中所述的含有EDTA的胰蛋白酶溶液中所述EDTA的浓度为0.025wt％；所述胰蛋白酶的浓度为0.3wt％。
[0012]上述步骤（1）和步骤（2）中所述的除垢剂溶液为含有0.05
‑
0.15wt％离子除垢剂的
磷酸盐缓冲液，所述的离子除垢剂为十二烷基硫酸钠和TritonX
‑
200的混合物，所述的十二烷基硫酸钠和TritonX
‑
200的质量比为4：6。
[0013]其中，所述的磷酸盐缓冲液为pH 6.0
‑
8.0磷酸钠缓冲液，优选为pH7.2磷酸钠缓冲液。
[0014]上述步骤（1）中所述的用含有EDTA的胰蛋白酶溶液浸泡的温度为30
‑
37℃，优选为37℃；时间为12
‑
24h，优选为24h。
[0015]上述步骤（1）中所述的用除垢剂溶液浸泡的温度为24
‑
32℃，优选为30℃；时间为12
‑
24h，优选为20h。
[0016]上述步骤（2）中所述的中性蛋白酶溶液的浓度为500
‑
700U/L；优选为700U/L。
[0017]上述步骤（3）中所述的α
‑
1 ,3
‑
半乳糖苷酶溶液的浓度为10
‑
20μg/mL；优选为20μg/mL。
[0018]上述步骤（2）中所述的用中性蛋白酶溶液浸泡的温度为28
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三螺旋胶原蛋白真皮水凝胶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)猪皮的前处理：取动物猪皮加入含有EDTA的胰蛋白酶溶液中浸泡，冲洗；然后用除垢剂溶液浸泡并震荡，冲洗，得到前处理后的猪皮；(2)猪皮的去免疫原性处理：将步骤(1)中前处理后的猪皮加入中性蛋白酶溶液中浸泡，冲洗；然后用除垢剂溶液浸泡并震荡，冲洗；重复步骤(1)和步骤(2)1
‑
3遍后，得到去免疫原性猪皮；(3)猪皮的α
‑
1 ,3
‑
半乳糖抗原处理：将步骤(2)得到的去免疫原性猪皮用α
‑
1 ,3
‑
半乳糖苷酶溶液浸泡，冲洗后即得沉淀物A；(4)助滤吸附：将步骤(3)得到的沉淀物A中加入助滤剂溶液搅拌后过滤，收集上清液，备用；(5)分离纯化：将步骤(4)中收集的上清液进行浓缩后，通过阳离子交换介质吸附胶原蛋白后再洗脱分离，最后得到洗脱液；(6)水凝胶制备：向步骤(5)的洗脱液中加入浓度为10
‑
40mg/mL的改性多糖，所述的洗脱液与改性多糖的质量比为5:1
‑
1:3，进行改性，得到水凝胶；所述的改性多糖为甲基丙烯酸酐改性透明质酸、燕麦β
‑
葡聚糖、醛基改性透明质酸和N
‑
羟基硫代琥珀酰亚胺中的一种或几种；(7)除菌过滤：将步骤(6)获得的水凝胶，用0.22um的过滤膜除菌过滤，得到无菌可溶性胶原水凝胶溶液。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的含有EDTA的胰蛋白酶溶液中所述EDTA的浓度为0.01wt％
‑
0.04wt％；所述胰蛋白酶的浓度为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚灿辉，葛美娟，马恒山，王一丽，
申请(专利权)人：广州贝塔健康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：