同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7的多重PCR标记引物组及其应用制造技术

本申请公开了一组可以同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7的多重PCR标记引物组，该引物组由核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7的多重PCR标记引物组及其应用


[0001]本申请涉及分子标记领域，特别是一种同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7的多重PCR标记引物组及应用。

技术介绍

[0002]小麦是最重要的粮食作物之一，其生产安全对社会经济稳定具有重要意义。小麦生产易受多种病害影响，由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引起的赤霉病与禾布氏白粉菌(Blumeria graminis f.sp.tritici)引起的白粉病严重影响小麦的产量及品质(Parry D W,Jenkinson P,Mcleod L.Fusarium Ear Blight(Scab)in Small Grain Cereals
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a Review.Plant Pathology,1995,44:207
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238；Zhao Z,Sun H,Song W,Lu M,Huang J,Wu L,Wang X,Li H.Genetic analysis and detection of the geneMlLX99on chromosome 2BL conferring resistance to powdery mildew in the wheat cultivar Liangxing 99.Theoretical&Applied Genetics,2013,126:3081
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3089.)。在我国，小麦赤霉病过去主要发生于长江中下游麦区、华南冬麦区和东北春麦区，近年来扩展至黄淮麦区、北方麦区、西南麦区和西北麦区。
[0003]Fhb1与Fhb7是目前仅有的2个被成功克隆的抗赤霉病基因(Li G,Zhou J,Jia H,Gao Z,Fan M,Luo Y,Zhao P,Xue S,Li N,Yuan Y,Ma S,Kong Z,Jia L,An X,Jiang G,Liu W,Cao W,Zhang R,Fan J,Xu X,Liu Y,Kong Q,Zheng S,Wang Y,Qin B,Cao S,Ding Y,Shi J,Yan H,Wang X,Ran C,Ma Z.Mutation of a Histidine
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Rich Calcium
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Binding
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Protein Gene in Wheat Confers Resistance to Fusarium Head Blight.Nature Genetics,2019,51:1106
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1112；Su Z,Bernardo A,Tian B,Chen H,Wang S,Ma H,Cai S,Liu D,Zhang D,Li T,Trick H,St.Amand P,Yu J,Zhang Z,Bai G.A Deletion Mutation in Tahrc Confers Fhb1 Resistance to Fusarium Head Blight in Wheat.Nature Genetics,2019,51:1099
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1105；WANG H W,SUN S L,GE W Y,ZHAO L F,HOU B Q,WANG K,LYU ZF,CHEN L Y,XU S S,GOU J,LI M,SU P S,LI X F,WANG G P,BO C Y,FANG X J,ZHUANG W W,CHENG X X,WU J W,DONG L H,CHEN W Y,LI W,XIAO G L,ZHAO J X,HAO Y C,XU Y,GAO Y,LIU W J,Liu,Y H,Yin,H Y,Li J Z,Li X,Zhao,Y,Wang X Q,Ni F,Ma X,Li A F,Xu,SS,Bai,GH,Nevo,E,Gao,CX,Ohm,H,Kong,LR.Horizontal gene transfer of Fhb7 from fungus underlies Fusarium head blight resistance in wheat.Science,2020,368:eaba5435)。其中，Fhb1位于3B染色体短臂，是目前在小麦抗赤霉病育种中应用最为广泛，也最为成功的抗病位点(Xie GQ,Zhang MC,Chakraborty S,Liu CJ.The effect of 3BS locus of Sumai 3 on Fusarium head blight resistance in Australian wheats.Animal Production Science.2007,47:603
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607)，其诊断标记已得到广泛应用(朱展望,徐登安,程顺和,高春保,夏先春,郝元峰,何中虎.中国小麦品种抗赤霉病基因Fhb1的鉴定与溯源.作物学报,2018,44:473
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482)，对抗赤霉病育种工作具有重要推动作用。Fhb7
来源于小麦近缘种长穗偃麦草(Thinopyrum ponticum)7EL染色体，研究人员通过不断回交，成功创制出携带该位点的小麦
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长穗偃麦草的小片段代换系，目前已成功应用于小麦育种工作，携带Fhb7的首个小麦品种于2021年获得审定。小麦赤霉病抗性是由多基因调控的数量性状，通过聚合不同抗性基因可促进产生持久稳定抗性，对小麦抗赤霉病育种具有重要意义。
[0004]多重PCR能在同一反应体系中鉴定多个基因位点，大大节约时间和试剂，具有高效、经济的特点(许立奎,潘彬荣,岳高红,梅喜雪,刘永安,张宗宸,周志辉.抗白粉病糯性小麦的多重PCR分子鉴定技术[J].核农学报,2014,28:1203
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1207)。但目前在小麦中成功应用的多重PCR引物较少，这是因为多重PCR的引物不是单个PCR引物的简单混合，引物组合的设计时需要考虑：(1)避免引物间形成二聚体，影响目的片段扩增与检测；(2)各引物与其他扩增片段和模板不存在较大的互补性，扩增片段间同源性不能太高；(3)引物的退火温度尽可能接近，长度差异不能太大；(4)扩增片段大小存在一定差异，以便电泳检测等问题，而同时满足这些要求的多重PCR引物较难获得,进而影响了多重PCR引物的应用。目前对Fhb1与Fhb7两个基因均是单独进行PCR鉴定，尚未见同时鉴定两个基因的多重PCR标记报道。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本申请提供一种可以同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7的多重PCR标记引物组，以实现对小麦抗赤霉病基因的一次性检测，提高小麦育种选择效率。
[0006]具体而言，本申请是通过如下技术方案实现的：
[0007]首先，本申请提供了一组可以同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7的多重PCR标记引物组，该引物组包括核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7的多重PCR标记引物组，其特征在于，所述多重PCR标记引物组由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的引物F1、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的引物F2、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的引物R1、核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的引物R2组成。2.如权利要求1所述多重PCR标记引物组在同时检测小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤如下：以小麦基因组DNA为模板，以所述多重PCR标记引物组为引物进行PCR扩增后电泳；若电泳产物出现大小为226bp的条带，则判定该小麦携带小麦抗赤霉病基因Fhb1；若出现大小为449bp 的条带，则判定该小麦携带抗白粉病基因Fhb7；同时若出现大小为226bp和449bp 两个条带，则判定该小麦同时携带小麦抗赤霉病基因Fhb1与Fhb7。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增是指：PCR扩增体系：2
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Rapi...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜朋，张旭，吴磊，何漪，李畅，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：