一种人质膜膜泡关联蛋白PV-1融合蛋白及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种人质膜膜泡关联蛋白PV

【技术实现步骤摘要】
一种人质膜膜泡关联蛋白PV
‑
1融合蛋白及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉一种人质膜膜泡关联蛋白PV
‑
1融合蛋白及其制备方法。

技术介绍

[0002]血管内皮细胞位于心血管系统的内表面，它既是感应细胞又是效应细胞，不仅能感知血液中的炎性信号、激素水平、切应力、压力等信息，而且能通过分泌多种血管活性物质对这些信息做出反应，在维持内环境渗透压平衡，血管壁完整性和阻止血栓形成中发挥重要的作用。血管内皮细胞的空隙(Trans endothelial channels，TEC)或带有隔膜的微孔(Fenestrae)或凹洞(Caveolae)是重要的亚细胞结构，在血管
‑
组织间物质交换中发挥重要的作用。
[0003]人质膜膜泡关联蛋白(Plasmalemma vesicle associated protein，即PLVAP，简称PV
‑
1)分子量约55
‑
60kD，II型跨膜糖蛋白，是目前已知唯一的内皮血管微孔隔膜或质膜凹洞隔膜蛋白。早期研究证明，PV
‑
1在内环境渗透性，白细胞迁移和血管新生中具有重要作用，近期研究表明PV
‑
1与癌症、创伤性脊髓损伤，缺血性脑疾病或眼病密切相关。生物系统的血管
‑
脑组织屏障和血管
‑
视网膜屏障等内皮血管管壁上无质膜微孔或凹洞，也无PV
‑
1蛋白表达，但病理状态下，如缺血性脑中风、脑部原发性或转移性肿瘤、糖尿病视网膜病变等情况下，血管
‑
组织屏障结构遭到破坏，内皮血管管壁出现有微孔并伴有PV
‑
1抗原表达。
[0004]综上所述，PV
‑
1蛋白有望成为治疗年龄相关性黄斑变性(Age
‑
related Macular Degeneration，AMD)、糖尿病黄斑水肿(Diabetic Macular Edema，DME)和成年患者视网膜静脉阻塞引起的黄斑水肿等疾病的新靶点。但是，目前关于PV
‑
1靶点表达相关的文献报道较少。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种可提高人质膜膜泡关联蛋白分泌效率的信号肽和/或人质膜膜泡关联蛋白融合蛋白及其制备方法。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术首先提供了多肽，所述多肽的氨基酸序列可为SEQ ID No.1。
[0007]所述多肽可为信号肽，名称为SP1。
[0008]所述信号肽SP1为人工改造的用于促进人质膜膜泡关联蛋白在哺乳动物细胞中分泌表达的信号肽。
[0009]本专利技术还提供了融合蛋白，所述融合蛋白可为包括人质膜膜泡关联蛋白和所述信号肽SP1的蛋白质。
[0010]所述人质膜膜泡关联蛋白(Plasmalemma vesicle associated protein，PLVAP，PV
‑
1)的氨基酸序列为SEQ ID No.3，PV
‑
1编码序列(CDS)的核苷酸序列为SEQ ID No.4。
[0011]进一步地，所述信号肽SP1(SEQ ID No.1)可连接(融合)至所述人质膜膜泡关联蛋白(SEQ ID No.3)的N端。
[0012]进一步地，所述融合蛋白还可包括组氨酸标签蛋白。
[0013]所述组氨酸标签蛋白的氨基酸序列可为HHHHHH。
[0014]进一步地，所述组氨酸标签蛋白(HHHHHH)可直接或者通过接头(linker)连接(融合)至所述人质膜膜泡关联蛋白(SEQ ID No.3)的C端。
[0015]所述接头用于连接所述组氨酸标签蛋白和所述人质膜膜泡关联蛋白，所述接头可为柔性肽接头，包括(GGGGS)n，A(EAAAK)nA，(GGQGG)n和IEGRMD，但不限于此。
[0016]进一步地，所述接头(linker)的氨基酸序列可为GGGGS。
[0017]进一步地，所述融合蛋白的氨基酸序列可为SEQ ID No.5或SEQ ID No.5的第1
‑
409位。
[0018]SEQ ID No.5的第1
‑
409位所示的融合蛋白(名称为SP1
‑
PV1)从N端到C端依次为：信号肽SP1(SEQ ID No.1)、人质膜膜泡关联蛋白(SEQ ID No.3)。
[0019]SEQ ID No.5所示的融合蛋白(名称为SP1
‑
PV1
‑
His)从N端到C端依次为：信号肽SP1(SEQ ID No.1)、人质膜膜泡关联蛋白(SEQ ID No.3)、接头(GGGGS)、组氨酸标签蛋白(HHHHHH)。
[0020]本专利技术还提供了核酸分子，所述核酸分子可为下述任一种：
[0021]A1)编码所述信号肽SP1的核酸分子；
[0022]A2)编码所述融合蛋白的核酸分子；
[0023]A3)编码序列是SEQ ID No.2、SEQ ID No.6的第16
‑
1278位或SEQ ID No.6的第16
‑
1242位所示的DNA分子；
[0024]A4)核苷酸序列是SEQ ID No.2、SEQ ID No.6的第16
‑
1278位或SEQ ID No.6的第16
‑
1242位所示的DNA分子。
[0025]SEQ ID No.2所示的DNA分子编码氨基酸序列是SEQ ID No.1的信号肽SP1。
[0026]SEQ ID No.6的第16
‑
1278位所示的DNA分子编码氨基酸序列是SEQ ID No.5的融合蛋白(SP1
‑
PV1
‑
His)。
[0027]SEQ ID No.6的第16
‑
1242位所示的DNA分子编码氨基酸序列是SEQ ID No.5的第1
‑
409位所示的融合蛋白(SP1
‑
PV1)。
[0028]其中，SEQ ID No.6的第1
‑
6位为HindIII识别位点，第7
‑
15位为Kozak序列，第16
‑
72位为信号肽SP1的编码序列，第73
‑
1242位为PV
‑
1蛋白的编码序列，第1243
‑
1257位为连接肽(接头)的编码序列，第1258
‑
1275位为组氨酸标签蛋白的编码序列，第1276
‑
1278位为终止密码子，第1279
‑
1286位为PacI识别位点。本领域普通本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列为SEQ ID No.1。2.融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为包括人质膜膜泡关联蛋白和权利要求1所述多肽的蛋白质。3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白还包括组氨酸标签蛋白。4.根据权利要求2或3所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列为SEQ ID No.5或SEQ ID No.5的第1
‑
409位。5.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子为下述任一种：A1)编码权利要求1所述信号肽的核酸分子；A2)编码权利要求2
‑
4中任一所述融合蛋白的核酸分子；A3)编码序列是SEQ ID No.2、SEQ ID No.6的第16
‑
1278位或SEQ ID No.6的第16
‑
1242位所示的DNA分子；A4)核苷酸序列是SEQ ID No.2、SEQ ID No.6的第16
‑
1278位或SEQ ID No.6的第16
‑
1242位所示的DNA分子。6.生物材料，其特征在于，所述生物材料为下述任一种：C1)含有权利要求5所述核酸分子的表达盒；C2)含有权利要求5所述核酸分子的重组载体、或含有C1)所述表达盒的重组载体；C3)含有权利要求5所述核酸分子的重组微生物、或含有C1)所述表达盒的重组微生物、或含有C2)所述重...

【专利技术属性】
技术研发人员：张静静，安文琪，邢体坤，宋路萍，王斌，
申请(专利权)人：华兰基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：