一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法技术

本发明专利技术涉及一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法，具体公开了一种通过抑制抗凋亡蛋白Bcl

【技术实现步骤摘要】
一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法


[0001]本专利技术涉及一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法，特别涉及一种基于铁死亡途径的提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法。

技术介绍

[0002]长期以来，人们普遍认为凋亡是治疗恶性肿瘤的关键靶点。在临床应用研究中，也是基于caspase依赖的凋亡途径去寻找抗肿瘤的新方法。作为凋亡的核心调控因子，Bcl
‑
2家族中抗凋亡蛋白(Bcl
‑
2、Bcl
‑
xL、Bcl
‑
w、Mcl
‑
1等)和促凋亡蛋白(Bak、Bax、Bok、Puma等)之间的相互作用决定了细胞最终是否走向凋亡，因此Bcl
‑
2家族分子常被作为肿瘤治疗的靶标，靶向Bcl
‑
2设计合成的抗肿瘤药物Venetoclax已被美国药物管理局批准使用。但是肿瘤细胞异常的凋亡途径使得药物的临床使用效果并不理想。众多研究证实铁死亡作为一种新的程序性细胞死亡形式，其不同于凋亡的调控机制能够克服肿瘤细胞的耐药性，因此被认为是肿瘤治疗的新靶点。
[0003]铁死亡是2012年被定义的一种新型程序性细胞死亡方式，由细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4失活、脂质过氧化物累积而诱发。作为一种可调控的细胞死亡方式，铁死亡与肿瘤的发生发展密切相关，不断有研究发现铁死亡能够调控肿瘤细胞的放/化疗敏感性和耐药性。例如，诱发铁死亡能够增加肺癌细胞对顺铂的敏感性，并且能克服卵巢癌细胞对多西他赛的耐药性；此外，体内外实验均证实铁死亡能够增加肿瘤细胞及异种移植瘤的辐射敏感性。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法。
[0005]为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供的技术方案是：一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法，通过促进肿瘤细胞铁死亡实现，具体包括通过基因敲除、基因敲低或小干扰RNA技术抑制细胞中Bcl
‑
xL的蛋白表达水平。
[0006]优选的技术方案为：抑制细胞中Bcl
‑
xL的蛋白表达水平包括使用Bcl
‑
xL抑制剂实现。
[0007]优选的技术方案为：所述Bcl
‑
xL抑制剂为APG
‑
1252。
[0008]优选的技术方案为：小干扰RNA序列包括：NC：正向序列：5
’‑
UUCUCCGAACGUGUCACGUTT
‑3’
；
[0009]反向序列：5
’‑
ACGUGACACGUUCGGAGAATT
‑3’
；
[0010]si
‑
Bcl
‑
xL
‑
1：正向序列：5
’‑
GGAACUCUAUGGGAACAAUTT
‑3’
；
[0011]反向序列：5
’‑
AUUGUUCCCAUAGAGUUCCAC
‑3’
；
[0012]si
‑
Bcl
‑
xL
‑
2：正向序列：5
’‑
CAGGGACAGCAUAUCAGAGTT
‑3’
；
[0013]反向序列：5
’‑
CUCUGAUAUGCUGUCCCUGTT
‑3’
。
[0014]由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有的优点是：
[0015]本专利技术的Bcl
‑
xL促进了ACSL4、LPCAT3和PEBP1的表达，增加了细胞中脂质过氧化物的积累；与此同时，Bcl
‑
xL蛋白的缺失增加了GPX4与Hsp90和LAMP2A的相互作用，从而促进GPX4的溶酶体降解过程，使细胞中脂质过氧化物无法及时清除，最终诱发铁死亡。
附图说明
[0016]附图1为各缺陷型细胞系中相应蛋白表达情况。
[0017]附图2为Bcl
‑
2家族蛋白对erastin诱导的铁死亡的响应情况(erastin(2μM)处理24h后，各组细胞存活情况的明场图)。
[0018]附图3为敲除Bcl
‑
xL促进erastin诱导的铁死亡。
[0019]附图4为敲除Bcl
‑
xL促进辐射诱导的铁死亡。
[0020]附图5为Bcl
‑
xL通过铁死亡途径增加肿瘤细胞辐射敏感性。
[0021]附图6为靶向Bcl
‑
xL促进erastin和辐射诱导的ROS产生。
[0022]附图7为靶向Bcl
‑
xL敲除促进细胞脂质过氧化水平。
[0023]附图8为Bcl
‑
xL对脂质代谢的影响。
[0024]附图9为靶向PEBP1抑制铁死亡信号。
[0025]附图10靶向Bcl
‑
xL通过抑制GPX4蛋白表达影响其酶活性。
[0026]附图11靶向Bcl
‑
xL促进GPX4的溶酶体降解过程。
[0027]附图12为靶向Bcl
‑
xL促进GPX4与Hsp90和LAMP2A的结合。
[0028]附图13为Bcl
‑
xL调控铁死亡的示意图。
具体实施方式
[0029]以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本实施例所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效。
[0030]请参阅图1
‑
13。须知，本说明书所附图式所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本专利技术可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整。提供以下实施例以便更好地理解本专利技术，而非限制本专利技术。以下实施例中的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料如无特殊说明，均为常规生化试剂商店购买所得。
[0031]实施例1：一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法
[0032]一、实验材料
[0033]1、细胞系：
[0034](1)野生型细胞系
[0035][0036][0037](2)缺陷型细胞系
[0038]细胞系Cellline细胞系CelllineMcl
‑
1敲除Mcl
‑1‑
KOBcl
‑
xL敲除Bcl
‑
xL
‑
KOBak和Bax敲除Bak/Bax
‑
DKOBcl
‑
xL敲低siBcl
‑
xLBax敲除Bax
‑
KOPEBP1敲低siPEBP1Bak敲除Bak
‑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法，其特征在于：通过促进肿瘤细胞铁死亡实现，具体包括通过基因敲除、基因敲低或小干扰RNA技术抑制细胞中Bcl
‑
xL的蛋白表达水平。2.根据权利要求1所述的提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法，其特征在于：抑制细胞中Bcl
‑
xL的蛋白表达水平包括使用Bcl
‑
xL抑制剂实现。3.根据权利要求2所述的提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法，其特征在于：所述Bcl
‑
xL抑制剂为APG
‑
1252。4.根据权利要求1所述的提高肿瘤细胞放疗敏感性的方法，其特征在于：小干扰RNA序列包括：NC：正向序列：5
，
‑
UUCUCCGAACGUGUCACGUTT
‑3，
；反向序列：5
，
‑
ACGUG...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵国平，韩靖，陈斌，王鹏，许安，吴李君，
申请(专利权)人：中国科学院合肥物质科学研究院，
类型：发明
国别省市：