【技术实现步骤摘要】
一种高密度3D培养干细胞的方法及应用
[0001]本专利技术涉及干细胞培养领域，具体涉及一种利用微玻璃珠载体高密度3D培养干细胞的方法及其应用。
技术介绍
[0002]大量研究表明干细胞尤其间充质干细胞在多种疾病的治疗、医疗美容、抗衰老、亚健康保健、药物筛选等众多领域广泛应用。然而干细胞培养已经成为制约整个干细胞行业发展的瓶颈。因此，干细胞大规模培养及应用就成为干细胞领域研究开发的热点及难点。目前主流用于产业化的干细胞培养方法仍通过2D培养，即平面培养方式。2D培养主要通过增大培养皿面积进行，批量换液、扩散法供气，这种方式最大的缺点是产量低、耗时耗力、占空间大、培养液和人力成本巨大，而且难以标准化生产。
[0003]虽然近年来发展起来的3D培养解决了部分空间、人力、产量等问题，但目前3D培养的主流是通常使用基于微载体生物反应器中的细胞贴壁培养。该方法的优势是大大增加了细胞的密度，进而提高细胞的数量。然而缺点也显而易见，其一，是设备和微载体的价格高，大大增加了产品的成本，限制了生产推广和应用；其二，微载体为了实现悬浮培养，往往为一些可降解的生物或化学材料，这些材料容易降解并掺入到细胞或培养液中；其三，微载体和细胞的培养液往往一次性，而且每次必须达到反应器的容量才能进行生产，成本巨大等。其四，目前有的3D培养存细胞生长及培养液的流动过程分布不均等问题。
技术实现思路
[0004]本专利技术提供一种填充微玻璃珠载体的细胞培养装置，其特征在于，包括
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培养基进口管；
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种填充微玻璃珠载体的细胞培养装置，其特征在于，包括
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培养基进口管；
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培养液分散圆盘；
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圆盘微孔；
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圆盘内部空间；
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中轴培养液输送管；
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圆盘内培养液输送管；
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管道封闭阀；培养液出口；圆盘开口开关；细胞培养微载体和管道圆盘连接环。2.如权利要求1所述的细胞培养装置，其特征在于，所述细胞培养微载体为微玻璃珠。3.如权利要求2所述的细胞培养装置，其特征在于，所述微玻璃珠直径为0.5
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1.0mm。4.如权利要求2所述的细胞培养装置，其特征在于，所述微玻璃珠载体通过高温烘烤灭菌，可再次使用。5.如权利要求1所述的细胞培养装置，其特征在于，所述细胞培养装置为密闭装置，体积为50mL至200mL，例如100mL。6.如权利要求1所述的细胞培养装置，其特征在于，所述细胞培养装置包括分层式的圆柱支架，体积不等，例如100mL例，内部填充大量强碱处理过的微玻璃珠，直径0.5
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1.0mm，由5个圆盘分隔开，这些圆盘底部均有大量
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圆盘微孔，这些微孔一方面让细胞均匀地分布在微载体上，另一方面培养液传输过程中也均匀地渗透到所有的微玻璃珠中，有效地避免了细胞在局部堆积及培养液流动不通畅的问题，最大限度地满足细胞的生长，其中最底部的圆盘只有靠近微玻璃珠一面有
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圆盘微孔，保证细胞或培养液不会在没有微玻璃珠的地方积聚，中间三个圆盘为上下两面均有
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圆盘微孔，而且这三个圆盘的直径比圆柱体内径略小，这样能让微玻璃珠能充分填满整个内部，同时也方便部分培养液的流通，这三个圆盘存在
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圆盘内部空间，培养液和接种的细胞均通过这个
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圆盘内部空间再经过
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圆盘微孔分散到微玻璃珠上，内部5个圆盘均由
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中轴培养液输送管串连在一起，而且
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中轴培养液输送管与圆盘之间由管道圆盘连接环连接在一起，这个管道圆盘连接环有多个出口，每个出口与
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圆盘内培养液输送管连接，这些
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圆盘内培养液输送管上存在多个小出孔，培养液和接种的细胞均可以通过这些小孔进到
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圆盘内部空间，最后再经过
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圆盘微孔分散到微玻璃珠上，5、最顶部的圆盘为单层，内部同样分布着多种微孔，除此之外，还有一个圆盘开口开关，这个开关可以活动，打开时即可以往往圆柱体内注入微玻璃珠，同时防止里面的微玻璃珠在细胞培养过程活动，在上部空间中存在一根培养液出口管道，其有两个培养液出口，这两个出口可以直接排出液体或其中一个作为出口，另一个也可以与其它培养装置的出口连接，实现串联。7.一种高密度3D培养干细胞的方法，含有如下步骤：(1)、微玻璃珠载体利用氢氧化钠浸泡，之后清洗，烘干，灭菌，冷却后装进如权利要求1
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6中任一项所述的培养装置中，(2)、注入微玻璃珠载体后在装置的
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培养基进口管上接通无菌小管，在蠕动泵的作用下，液体从
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培养基进口管进入装置中，经过
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中轴培养液输送管来到每个管道圆盘连接环再经过
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圆盘内培养液输送管进入
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圆盘内部空间，然后经过
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圆盘微孔均匀分散在各个部位，培养液最后从顶部的微孔中进入上部空间，然后从出口排出，首次将通入无菌生理盐水或PBS，清微玻璃珠载体表面的粉末同时进行防漏检测，确保无渗漏后，密封进出口，常温保存准备对微载体包被，(3)、根据培养细胞的不同使用不同的材料进行包被处理，如脐带间充质干细胞(MSC)，
一般使用MSC促贴壁试剂或者玻璃粘连蛋白(Vitronectin)，首先，使用无菌PBS溶液将MSC贴壁试剂稀释100倍(1:100)，加入适量的1
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MSC贴壁试剂；从培养液进口通入贴壁试剂，在包被期间，始终保持载体浸泡在液体中...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨展，赵红叶，
申请(专利权)人：河北因赛乐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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