一种用于检测新型冠状病毒、甲型流感和乙型流感病毒核酸的试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测新型冠状病毒、甲型流感和乙型流感病毒核酸的试剂及其应用，所述试剂包括用于检测甲型流感病毒的第一引物组合、用于检测乙型流感病毒的第二引物组合、用于检测新型冠状病毒的第三引物组合。本发明专利技术的用于检测新型冠状病毒、甲型流感和乙型流感病毒核酸的试剂，灵敏度高、特异性强、检测时间短，与多种其他常见呼吸道病原体无交叉反应，对于普通流感和新型冠状病毒的辅助诊断及指导临床用药具有较高的参考价值。同时本发明专利技术还通过采用荧光检测结合冻干技术，克服了核酸检测试剂盒需要冷藏或冷冻运输储存的缺点，可以进行常温运输，节约成本，保存时间长。保存时间长。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测新型冠状病毒、甲型流感和乙型流感病毒核酸的试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及病毒检测
，具体涉及一种用于检测新型冠状病毒、甲型流感和乙型流感病毒核酸的试剂及其应用。

技术介绍

[0002]目前，实时荧光定量PCR技术是应用最广泛的分子检测技术，该技术不仅实现了对核酸模板的定量，而且具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高等特点。
[0003]专利202010205841.1公布了一种检测引起呼吸道感染的病毒并分型的组合物、试剂盒、方法及其用途其中含有的成分组合物结合荧光探针法能够在一管同时检测三种引起呼吸道感染的病毒并进行分型，其操作步骤中首先需要使用磁珠法提取病毒的核酸，然后加入配制的扩增反应液，再进行PCR反应，操作过程相对繁琐，所需时间较长。
[0004]因此，亟需一种灵敏度高、特异性强、覆盖面广、操作简便的新型冠状病毒、甲型流感病毒和乙型流感病毒检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种用于检测新型冠状病毒、甲型流感和/或乙型流感病毒核酸的试剂。
[0006]本专利技术还提出一种具有上述试剂的试剂盒。
[0007]本专利技术还提出一种上述试剂或试剂盒的应用。
[0008]根据本专利技术的一个方面，提出了一种用于检测新型冠状病毒、甲型流感和/或乙型流感病毒核酸的试剂，所述试剂包括用于检测甲型流感病毒的第一引物组合、用于检测乙型流感病毒的第二引物组合、用于检测新型冠状病毒的第三引物组合；
[0009]其中，所述第一引物组合包括序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物组、序列如SEQ IDNO.13、SEQ ID NO.14所示的引物组或序列如SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示的引物组；
[0010]所述第二引物组合包括序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示的引物组或序列如SEQ IDNO.19、SEQ ID NO.20所示的引物组；
[0011]所述第三引物组合包括序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示的引物组或序列如SEQ IDNO.22、SEQ ID NO.23所示的引物组。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示的引物组用于检测新型冠状病毒N基因。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，序列如SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23所示的引物组用于检测新型冠状病毒ORF1ab基因。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述甲型流感病毒包括甲型流感病毒季节性H1N1型，甲型H1N1型、季节性H3N2型、H7N9、新甲型H1N1和H5N1。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，所述乙型流感病毒包括乙型流感病毒Yamagata型或Victoria型。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂还包括探针序列。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述探针选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:24中的一种或多种。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述探针选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9中的一种或多种。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述SEQ ID NO:3所示的探针序列为与SEQ ID NO:1、SEQ IDNO.2所示的引物组相匹配的荧光序列；所述SEQ ID NO:6所示的探针序列为与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO.5所示的核酸分子相匹配的序列；所述SEQ ID NO:9所示的探针序列为与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO.8所示的核酸分子相匹配的序列；所述SEQ ID NO:15所示的探针序列为与SEQ ID NO:13、SEQ ID NO.14所示的核酸分子相匹配的序列；所述SEQ ID NO:21所示的探针序列为与SEQ IDNO:19、SEQ ID NO.20所示的核酸分子相匹配的荧光序列；所述SEQ ID NO:24所示的探针序列为与SEQ ID NO:22、SEQ ID NO.23所示的核酸分子相匹配的荧光序列。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述探针的5
’
端包含有荧光报告基团，包括FAM、Texas Red、HEX、NED、ROX、TET、JOE、TAMRA、CY3、CY5和VIC中的任意一种。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述第一引物组
‑
第三引物组合中探针的5
’
端包含有不同的荧光报告基团。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述探针的3
’
端包含有荧光淬灭基团，包括MGB、BHQ
‑
1、BHQ
‑
2、BHQ
‑
3中的任意一种。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂还包括内参基因的检测试剂。
[0024]在本专利技术的一些实施方式中，所述的内参基因为β
‑
Globin或GAPDH。
[0025]在本专利技术的一些实施方式中，所述的内参基因的检测试剂含有针对内参基因的引物和探针。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述的内参基因的检测试剂含有如核苷酸序列SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23所示的引物对，如核苷酸序列SEQ ID NO：24所示的探针。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂的检测样本选自唾液、痰液、鼻咽抽吸物、鼻拭子、口咽拭子和鼻咽拭子中的至少一种。
[0028]在本专利技术的第二方面，提出了一种试剂盒，所述试剂盒含有上述检测试剂。
[0029]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括阳性对照和阴性对照。
[0030]在本专利技术的一些实施方式中，所述阳性对照包括2019
‑
nCoV、IAV和IBV的假病毒颗粒。
[0031]在本专利技术的一些实施方式中，所述阴性对照为含内标靶标片段的假病毒颗粒。
[0032]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括石蜡油、缓冲液、dNTPs和酶。
[0033]在本专利技术的一些实施方式中，所述缓冲液为PCR反应缓冲液。
[0034]在本专利技术的一些实施方式中，所述PCR反应缓冲液包括40
‑
60mM Tris溶液、70
‑
80mM K
+
和2
‑
3mMMg
2+
。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，所述酶包括HotStart Taq DNA聚合酶和M
‑
MLV反转
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测新型冠状病毒、甲型流感和/或乙型流感病毒核酸的试剂，其特征在于，所述试剂包括用于检测甲型流感病毒的第一引物组合、用于检测乙型流感病毒的第二引物组合、用于检测新型冠状病毒的第三引物组合；其中，所述第一引物组合包括序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示的引物组、序列如SEQ IDNO.13、SEQ ID NO.14所示的引物组或序列如SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示的引物组；所述第二引物组合包括序列如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示的引物组或序列如SEQ IDNO.19、SEQ ID NO.20所示的引物组；所述第三引物组合包括序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示的引物组或序列如SEQ IDNO.22、SEQ ID NO.23所示的引物组。2.根据权利要求1的所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括探针序列；优选地，所述探针序列选自SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:24中的一种或多种。3.根据权利要求2的所述的试剂，其特征在于，所述探针的5
’
端包含有荧光报告基团和荧光淬灭基团；优选地，所述荧光报告基团包括FAM、Texas Red、HEX、NED、ROX、TET、JOE、TAMRA、CY3、CY5和VIC中的任意一种，所述荧光淬灭基团包括MGB、BHQ

【专利技术属性】
技术研发人员：李小锋，李晨阳，刘小翠，
申请(专利权)人：广州国家实验室，
类型：发明
国别省市：