本发明专利技术提供了一种金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物的制备方法，属于海洋生物功能产品加工领域，主要为将金枪鱼皮利用复合蛋白酶水解制得胶原活性肽，再将胶原活性肽与锌离子溶液螯合最终制得金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物；本发明专利技术提供的制备方法，工艺操作简单方便，成本低且安全性好；本发明专利技术制备的螯合物得率高达70％以上，螯合率达85％以上，并且螯合物的分子量分布有一定的规律性，分子量分布于3～5kDa的质量百分比达49％以上，本发明专利技术制备的螯合物，活性肽与锌离子螯合可发挥协同增效的作用，不但提升了原有多肽类成分的生物活性，而且可以大大减低直接补充锌离子所造成的毒副作用。大大减低直接补充锌离子所造成的毒副作用。
【技术实现步骤摘要】
一种金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物的制备方法
[0001]本专利技术涉及一种金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物的制备方法，属于海洋生物功能产品加工领域。
技术介绍
[0002]金枪鱼属硬骨鱼纲鲈形目鲭科，共61个种，广泛分布于世界各大流域。由于金枪鱼的新陈代谢旺盛，鱼肉脂肪含量少，蛋白含量高，富含DHA、EPA、蛋氨酸等营养素，所以具有较高的食用与经济价值。据统计金枪鱼年加工量可达到400万吨以上，占公海渔业总产量的60％。金枪鱼加工过程中产生的鱼鳞、鱼皮、鱼骨等下脚料约占总质量的50～70％，其中含有丰富的蛋白质，除少数用于鱼饵和饲料的加工外，绝大多数均未得到合理的开发利用，造成巨大的资源浪费。胶原蛋白因其具有独特的生理活性且应用广泛而成为广大学者研究的热点。但目前主要研究重心在于胶原蛋白性质的研究，如蛋白的结构及其稳定性、分子量大小、适用的行业领域，以及胶原蛋白的功能性质比如吸水性、保湿性、乳化稳定性等。作为胶原蛋白的水解物，胶原多肽因其良好的生物活性而备受关注。金枪鱼作为一种深水鱼类，其鱼皮皮厚且无药物残留，是一种很好的胶原蛋白资源。因此，以金枪鱼皮作为原料水解获得不同功能的活性肽，具有广阔的开发利用空间。
[0003]皮肤是人体最大的器官之一，由于受外界环境和内源基因共同作用，皮肤逐渐呈现松弛、色素沉积等衰老的状态。特别是由于紫外线对皮肤进行长期照射，皮肤结构变化，出现弹性、水分、柔软度降低等。老化的皮肤主要组织学特征是细胞外基质的成分发生改变，胶原蛋白合成减少以及降解增加，使其含量逐渐降低。研究表明胶原多肽可增强抗氧化酶的活性，清除体内过量的自由基，减少氧化应激。胶原多肽中的酪氨酸残基可以与酪氨酸酶的活性部位结合，使酪氨酸酶无法催化酪氨酸向黑色素的转化，从而改善光老化皮肤状态，对皮肤组织紊乱有较好的恢复作用。
[0004]微量元素在维持人体正常生命活动时发挥着重要的作用。近年来，多肽
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金属离子螯合物因其吸收利用率高、功效显著、副作用小,逐渐受到人们关注并成为研究热点。目前已有多种来源的多肽从生物机体分离出来并成功地与钙螯合。锌是人体必需的微量金属元素，在人体生长发育、生殖遗传、维持上皮细胞正常形态、蛋白质合成及代谢等方面有至关重要的作用。但是不同的多肽
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金属离子螯合物制备方法获得的产品特性不同，功能效果也存在显著差异。中国专利文献CN101225102A(申请号：200810046739.0)公开了罗非鱼鱼皮多肽螯合锌盐的制备方法，中国专利文献CN110684814A(申请号：201910744737.7)公开了一种金枪鱼皮胶原蛋白肽铁螯合物的制备方法，现有专利文献公开的鱼皮多肽制备方法与金属离子螯合技术与本专利技术有明显区别。
技术实现思路
[0005]针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物的制备方法。
[0006]本专利技术技术方案如下：
[0007]一种金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物的制备方法，包括如下步骤：
[0008](1)金枪鱼皮解冻后，按质量体积比g/mL为1：(5～15)加入Tris
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HCl浸润，随后进行超声处理，超声5～30min，得到超声处理的鱼皮；
[0009](2)取步骤(1)超声处理的鱼皮，加入复合蛋白酶水解15～90min，固液分离，将液体冷冻干燥即得胶原活性肽；
[0010](3)取步骤(2)制备的胶原活性肽加水溶解，按体积比1：(2～8)加入锌离子溶液，调节pH至6～8，进行螯合20～80min，得到反应液；
[0011](4)将步骤(3)得到的反应液，加入无水乙醇静置8～24h，固液分离，固体物上样丙烯葡聚糖凝胶柱，4～8倍体积NaCl溶液洗脱，收集中后段洗脱馏分，浓缩、冻干制得金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物。
[0012]根据本专利技术优选的，步骤(1)中，Tris
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HCl溶液的浓度为8～20mmol/L，超声频率为30～80KHz。
[0013]进一步优选的，步骤(1)中，Tris
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HCl溶液的浓度为6～15mmol/L，超声频率为40～60KHz。
[0014]更优选的，Tris
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HCl溶液的浓度为10mmol/L，超声频率为50KHz。
[0015]根据本专利技术优选的，步骤(2)中，固液分离方式为3000～6000rpm/min条件下离心10～30min，上清液冷冻干燥即得胶原活性肽。
[0016]根据本专利技术优选的，步骤(2)中，复合蛋白酶为中性蛋白酶和胰蛋白酶，每克鱼皮原料，中性蛋白酶的酶活用量为3000～5500U/g，胰蛋白酶的酶活用量为2500～4500U/g；酶解温度为30～50℃。
[0017]进一步优选的，每克鱼皮原料，中性蛋白酶的酶活用量为4000～5000U/g，胰蛋白酶的酶活用量为3000～4000U/g；酶解温度为35～45℃。
[0018]更优选的，每克鱼皮原料，中性蛋白酶的酶活用量为4500U/g，胰蛋白酶的酶活用量为3500U/g；酶解温度为40℃。
[0019]根据本专利技术优选的，步骤(3)中，活性肽加水溶解的浓度为3～6mg/mL；锌离子溶液可为葡萄糖酸锌、柠檬酸锌、醋酸锌，浓度为20～80mmol/L；螯合温度为40～70℃。
[0020]进一步优选的，步骤(3)中，活性肽加水溶解的浓度为4～5mg/mL；锌离子溶液为葡萄糖酸锌或柠檬酸锌，浓度为30～60mmol/L；螯合温度为45～60℃。
[0021]更优选的，活性肽加水溶解的浓度为4.5mg/mL；锌离子溶液为葡萄糖酸锌，浓度为50mmol/L；螯合温度为50℃。
[0022]根据本专利技术优选的，步骤(4)中，反应液与无水乙醇体积比为1：(4～8)；NaCl洗脱液的浓度为0.15～0.6mol/L。
[0023]进一步优选的，步骤(4)中，反应液与无水乙醇体积比为1：(5～7)；NaCl洗脱液的浓度为0.3～0.5mol/L。
[0024]更优选的，反应液与无水乙醇体积比为1：6；NaCl洗脱液的浓度为0.4mol/L。
[0025]根据本专利技术优选的，步骤(4)中固液分离的方式为在3000～6000rpm/min条件下离心10～30min，沉淀物上样丙烯葡聚糖凝胶柱。
[0026]根据本专利技术优选的，步骤(4)中，收集中后段洗脱馏分，具体为以流速2BV/h NaCl
溶液洗脱4～8倍柱体积，收集30
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60min后的洗脱馏分。
[0027]根据本专利技术优选的，上述方法制备的金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物，螯合物得率达70％以上，螯合率达85％以上，分子量分布于3～5kDa的质量百分比达49％以上。
[0028]上述方法制备的金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物作为有效成分在制备功能食品、保健食品或日化用品中的应用。
[0029]上述方法制备的金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物作为有效成分本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)金枪鱼皮解冻后，按质量体积比g/mL为1：(5～15)加入Tris
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HCl浸润，随后进行超声处理，超声5～30min，得到超声处理的鱼皮；(2)取步骤(1)超声处理的鱼皮，加入复合蛋白酶水解15～90min，固液分离，将液体冷冻干燥即得胶原活性肽；(3)取步骤(2)制备的胶原活性肽加水溶解，按体积比1：(2～8)加入锌离子溶液，调节pH至6～8，进行螯合20～80min，得到反应液；(4)将步骤(3)得到的反应液，加入无水乙醇静置8～24h，固液分离，固体物上样丙烯葡聚糖凝胶柱，4～8倍体积NaCl溶液洗脱，收集中后段洗脱馏分，浓缩、冻干制得金枪鱼皮胶原肽锌离子螯合物。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，Tris
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HCl溶液的浓度为8～20mmol/L，超声频率为30～80KHz；优选的，步骤(1)中，Tris
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HCl溶液的浓度为6～15mmol/L，超声频率为40～60KHz；优选的，Tris
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HCl溶液的浓度为10mmol/L，超声频率为50KHz。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，固液分离方式为3000～6000rpm/min条件下离心10～30min，上清液冷冻干燥即得胶原活性肽。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，复合蛋白酶为中性蛋白酶和胰蛋白酶，每克鱼皮原料，中性蛋白酶的酶活用量为3000～5500U/g，胰蛋白酶的酶活用量为2500～4500U/g；酶解温度为30～50℃；优选的，每克鱼皮原料，中性蛋白酶的酶活用量为4000～5000U/g，胰蛋白酶的酶活用量为3000～4000U/g；酶解温度为35～45℃；优选的，每克鱼皮原料，中性蛋白酶的酶活用量为4500U/g，胰蛋白酶的酶活用量为3500U/g；酶解温度为40℃。5.如权利要求1所述的方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：靳梦，张轩铭，李宁，刘可春，王利振，李雪娟，高鑫，史雨鑫，张姗姗，周爱君，
申请(专利权)人：荣成蓝润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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