蚂蟥的特征图谱及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种蚂蟥的特征图谱的构建方法，包括：制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液中包括尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品；制备供试品溶液；取预设量的所述参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸为流动相B进行梯度洗脱，建立特征图谱。本发明专利技术可为蚂蟥药材及蚂蟥标准汤剂的质量控制提供数据基础，有效保证蚂蟥药材、标准汤剂产品质量的稳定性和可控性。标准汤剂产品质量的稳定性和可控性。标准汤剂产品质量的稳定性和可控性。

【技术实现步骤摘要】
蚂蟥的特征图谱及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及中药质量分析检测
，尤其涉及一种蚂蟥的特征图谱及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]水蛭为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica Whitman或柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全体，是中医处方和成药中的常用中药，用于血瘀经闭，癥瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤。其中，本专利技术主要研究的是水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman的特征图谱及其构建方法与应用，本专利技术中将水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman简称为蚂蟥。
[0003]蚂蟥作为动物类中药，使用量较大，除中国药典2020年版收载品外，市场上也有菲牛蛭流通使用，它们性状接近，形态相似，依靠传统的鉴别方法进行区分难度较大，准确性低，尤其是经过水提取制成标准汤剂或其他剂型后，更难以进行有效的鉴别，特别是对于形态近似种的掺杂检测。为保证蚂蟥的药材质量和疗效，亟需一种能准确、快速地鉴别蚂蟥正品与其伪品的方法。
[0004]现代学者对蚂蟥研究多集中在蛋白质、核苷或蝶啶类单一成分的含量测定，但由于中药有效成分多样性及复杂性，单一成分的含量测定不足以说明药材的内在质量，亦缺乏专属性，中药指纹图谱/特征图谱能够提供更为全面、丰富的信息，因此常用于中药材的质量控制研究。目前关于蚂蟥指纹图谱多集中在核苷类或氨基酸类成分，对于其有效活性水蛭素类的指纹图谱暂无文献报道。上述含量或者指纹图谱均是从药材的角度来进行判断，对于失去外观形状的蚂蟥中药制剂的鉴别研究较少，且暂无同一方法既能鉴别蚂蟥基原及其炮制品。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题在于，提供一种蚂蟥的特征图谱的构建方法，该方法重现性良好，准确可靠，可为蚂蟥药材大生产质量控制提供数据基础，保证蚂蟥药材产品质量的稳定性和可控性。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种蚂蟥的特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
[0007]制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液中包括尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品；
[0008]制备供试品溶液；
[0009]取预设量的所述参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸为流动相B进行梯度洗脱，建立特征图谱。
[0010]在一种实施方式中，所述梯度洗脱按下述程序进行：
[0011]0min～12min，流动相A为0，流动相B为100％；
[0012]12min～15min，流动相A从0
→
1％，流动相B从100％
→
99％；
[0013]15min～27min，流动相A从1％
→
8％，流动相B从99％
→
92％；
[0014]27min～35min，流动相A从8％
→
11％，流动相B从92％
→
89％；
[0015]35min～45min，流动相A从11％
→
12％，流动相B从89％
→
88％；
[0016]45min～55min，流动相A从12％
→
21％，流动相B从88％
→
79％；
[0017]55min～65min，流动相A从21％
→
30％，流动相B从79％
→
70％。
[0018]在一种实施方式中，所述甲酸的体积浓度为0.005％～0.015％。
[0019]在一种实施方式中，所述对照品溶液和供试品溶液的预设量为4μL～6μL；
[0020]所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为4μm～6μm，柱温为25℃～32℃，洗脱流速为0.5mL/min～1.5mL/min；
[0021]所述液相色谱仪的紫外检测波长为250nm～255nm。
[0022]在一种实施方式中，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm，柱温为30℃；
[0023]所述液相色谱仪的紫外检测波长为254nm。
[0024]在一种实施方式中，所述供试品溶液采用下述方法制得：
[0025]取蚂蟥样品，制粉后过45目～55目筛网，然后称取0.1g～1.2g与30％～70％的甲醇混合，所述甲醇的加入量为20mL～30mL，超声处理20min～40min后，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液。
[0026]在一种实施方式中，所述对照品溶液按照下述方法制得：
[0027]取所述尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品，加甲醇制成每1mL含所述尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品各20μg的混合溶液，制得所述对照品溶液；
[0028]所述对照药材溶液采用下述方法制得：
[0029]取蚂蟥药材样品，制粉后过45目～55目筛网，然后称取0.1g～1.2g与30％～70％的甲醇混合，所述甲醇的加入量为20mL～30mL，超声处理20min～40min后，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得对照药材溶液。
[0030]在一种实施方式中，所述超声处理的功率为250W～350W，频率为35kHz～45kHz。
[0031]在一种实施方式中，所述特征图谱包括8个共有峰；其中与尿嘧啶对应的为1号峰，与次黄嘌呤对应的为2号峰，与黄嘌呤对应的为3号峰，与水蛭胺C羧基衍生物对应的为4号峰，与水蛭胺B对应的为5号峰。
[0032]在一种实施方式中，所述蚂蟥的特征图谱中，与次黄嘌呤对照品峰相对应的峰为S1峰，所述1号峰和3号峰与S1峰的相对保留时间符合：1号峰的相对保留时间为0.420～0.423，2号峰的相对保留时间为1.000，3号峰的相对保留时间为1.127～1.132；
[0033]与水蛭胺B对照品峰相对应的峰为S2峰，所述4号峰、6号峰、7号峰和8号峰与S2峰的相对保留时间符合：4号峰的相对保留时间为0.879～0.881，5号峰的相对保留时间为1.000，6号峰的相对保留时间为1.090～1.093，7号峰的相对保留时间为1.427～1.430，8号峰的相对保留时间为1.550～1.554。
[0034]在一种实施方式中，所述蚂蟥的特征图谱中，与次黄嘌呤对照品峰相对应的峰为S1峰，所述1号峰和3号峰与S1峰的相对峰面积符合：1号峰的相对峰面积为0.174～0.180，2号峰的相对峰面积为1.000，3号峰的相对峰面积为0.112～0.114；...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液中包括尿嘧啶对照品、次黄嘌呤对照品、黄嘌呤对照品、水蛭胺C羧基衍生物对照品、水蛭胺B对照品；制备供试品溶液；取预设量的所述参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以甲酸为流动相B进行梯度洗脱，建立特征图谱。2.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱按下述程序进行：0min～12min，流动相A为0，流动相B为100％；12min～15min，流动相A从0
→
1％，流动相B从100％
→
99％；15min～27min，流动相A从1％
→
8％，流动相B从99％
→
92％；27min～35min，流动相A从8％
→
11％，流动相B从92％
→
89％；35min～45min，流动相A从11％
→
12％，流动相B从89％
→
88％；45min～55min，流动相A从12％
→
21％，流动相B从88％
→
79％；55min～65min，流动相A从21％
→
30％，流动相B从79％
→
70％。3.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述甲酸的体积浓度为0.005％～0.015％。4.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液和供试品溶液的预设量为4μL～6μL；所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为4μm～6μm，柱温为25℃～32℃，洗脱流速为0.5mL/min～1.5mL/min；所述液相色谱仪的紫外检测波长为250nm～255nm。5.如权利要求4所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm，柱温为30℃；所述液相色谱仪的紫外检测波长为254nm。6.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液采用下述方法制得：取蚂蟥样品，制粉后过45目～55目筛网，然后称取0.1g～1.2g与30％～70％的甲醇混合，所述甲醇的加入量为20mL～30mL，超声处理20min～40min后，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液。7.如权利要求1所述的蚂蟥的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液按照下述方法制得：取所述尿...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱韵静，潘礼业，钟春琳，童培珍，杨晓东，杨丽，庞伟，林晗，李国卫，陈向东，孙冬梅，
申请(专利权)人：广东一方制药有限公司，
类型：发明
国别省市：