用于治疗显性视网膜色素变性的AAV载体制造技术

用于治疗显性视网膜色素变性的AAV载体。本公开内容的一些方面涉及用于治疗视网膜色素变性的方法和组合物。在一些方面，本公开内容提供了用于向对象递送干扰核酸(例如干扰RNA)以降低所述对象中内源性rho基因的一个或两个等位基因(例如与视网膜色素变性相关的突变rho等位基因)的表达的组合物和方法。在一些实施方案中，还向所述对象递送对所述干扰核酸具有抗性的替代rho基因。具有抗性的替代rho基因。具有抗性的替代rho基因。

【技术实现步骤摘要】
用于治疗显性视网膜色素变性的AAV载体
[0001]本申请是申请号为201780014309.8、专利技术名称为“用于治疗显性视网膜色素变性的AAV载体”的中国专利申请的分案申请，该母案申请是2017年03月01日提交的PCT国际专利申请PCT/US2017/020289进入中国国家阶段的申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求于2016年3月1日提交的美国临时专利申请No.62/302,122和于2016年9月22日提交的美国临时专利申请No.62/398,451的权益，其各自的内容通过引用整体并入本文。
[0004]政府支持
[0005]本专利技术是在由国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的基金号R24
‑
EY022012的政府支持下完成的。政府在本专利技术中具有某些权利。


[0006]本公开内容的一些方面涉及用于治疗视网膜色素变性的方法和组合物。

技术介绍

[0007]常染色体显性视网膜色素变性(autosomal dominant retinitis pigmentosa，adRP)是致盲性疾病，其影响1/12,000的人。这些个体中的相当大部分在视网膜中感光细胞的集光色素蛋白(light harvesting pigment protein)视紫红质的基因(rho)中携带突变。该疾病是显性的，因为从任一亲本遗传该突变基因均导致视网膜变性和最终失明。在rho中鉴定的超过100种不同的突变导致失明。目前还没有批准的用于adRP的药物或基因治疗性治疗。因此，需要适合adRP和相关病症的任何和所有原因的有效治疗选择。

技术实现思路

[0008]本申请的一些方面涉及用于在对象中(例如，在人中)治疗视网膜色素变性(例如，显性视网膜色素变性)的组合物和方法。在一些实施方案中，通过向对象(例如，向患有视网膜色素变性的对象，例如向患有显性视网膜色素变性的人)施用干扰RNA分子使对象的视紫红质基因(rho基因)的一个或两个等位基因沉默。在一些实施方案中，还向对象施用替代rho基因(replacement rho gene)以提供功能性RHO蛋白以恢复对象的光感受器功能。在一些实施方案中，替代rho基因相对于内源性基因等位基因具有一个或更多个核苷酸替换，其使替代基因对干扰RNA的作用具有抗性。在一些实施方案中，替代rho基因是人rho基因(例如，野生型人rho基因)，其包含使该基因对由干扰RNA分子介导的降解具有抗性(也称为“硬化”)的一个或更多个(例如，1、2、3、4、5个或更多个)替换。在一些实施方案中，该一个或更多个核苷酸替换在rho基因的编码序列中。在一些实施方案中，该一个或更多个核苷酸替换是沉默的(例如，其不改变RHO蛋白的氨基酸序列)。在一些实施方案中，该一个或更多个替换引入氨基酸变化，但所得RHO蛋白仍具有足够的功能以在治疗上有效(以恢复或维持至少部分视力或正常视力)。
[0009]在一些实施方案中，可使用任何合适的技术来向对象递送干扰RNA和/或替代基因。在一些实施方案中，以编码干扰RNA的基因的形式向对象提供干扰RNA。在一些实施方案中，编码干扰RNA的基因以重组腺相关病毒(recombinant adeno
‑
associated virus，rAAV)向对象提供。在一些实施方案中，替代基因以rAAV向对象提供。在一些实施方案中，编码干扰RNA的基因和替代基因以同一rAAV提供(例如其均在以AAV末端反向重复(inverted terminal repeat，ITR)为侧翼的同一重组基因组上编码)。在一些实施方案中，这两种基因在同一启动子的控制之下。在一些实施方案中，基因在两种不同启动子的控制之下。在一些实施方案中，编码干扰RNA的基因和替代基因以不同的rAAV提供。
[0010]在一些实施方案中，干扰RNA是合成核糖核酸(RNA)分子，其包含：
[0011]a)序列CUGCCUACAUGUUUCUGCU(SEQ ID NO：1)的有义链和序列AGCAGAAACAUGUAGGCAG(SEQ ID NO：2)的反义链；
[0012]b)序列CCUACAUGUUUCUGCUGAU(SEQ ID NO：3)的有义链和序列AUCAGCAGAAACAUGUAGG(SEQ ID NO：4)的反义链；
[0013]c)序列GCAUGGUCAUCAUCAUGGU(SEQ ID NO：5)的有义链和序列ACCAUGAUGAUGACCAUGC(SEQ ID NO：6)的反义链；或
[0014]d)序列GUGGCAUUCUACAUCUUCA(SEQ ID NO：7)的有义链和序列UGAAGAUGUAGAAUGCCAC(SEQ ID NO：8)的反义链。
[0015]在一些实施方案中，合成RNA分子是小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)。在一些实施方案中，干扰RNA是小发夹RNA(small hairpin RNA，shRNA)。在一些实施方案中，shRNA包含具有序列UCAAGAG(SEQ ID NO：9)的RNA或序列UGUGCUU(SEQ ID NO：10)的RNA的环。
[0016]在一些实施方案中，合成RNA分子是人工微RNA(micro RNA，miRNA)。在一些实施方案中，人工miRNA具有以下RNA序列：UGCUGUUGACAGUGAGCGA(X)
n
UAGUGAAGCCACAGAUGUA(Y)
n
CUGCCUACUGCCUCGGA(SEQ ID NO：19)，其中：
[0017]a)(X)
n
包含SEQ ID NO：1且(Y)
n
包含SEQ ID NO：2；
[0018]b)(X)
n
包含SEQ ID NO：3且(Y)
n
包含SEQ ID NO：4；
[0019]c)(X)
n
包含SEQ ID NO：5且(Y)
n
包含SEQ ID NO：6；或
[0020]d)(X)
n
包含SEQ ID NO：7且(Y)
n
包含SEQ ID NO：8。
[0021]在一些实施方案中，在上文或本申请其他部分描述的合成RNA还在5
′
和/或3
′
端包含未配对的突出端序列(overhang sequence)。在一些实施方案中，未配对的突出端序列包含重复碱基的序列。在一些实施方案中，重复碱基的序列包含重复尿嘧啶(U)碱基。在一些实施方案中，未配对的突出端序列是UU。
[0022]在一些实施方案中，组合物(例如，用于施用于对象的组合物)包含一种或更多种(例如，2、3或4种)在上文或本申请其他部分描述的干扰RNA(例如，合成RNA分子)。在一些实施方案中，组合物(例如，用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.合成核糖核酸(RNA)分子，其包含：a)序列CCUACAUGUUUCUGCUGAU(SEQ ID NO：3)的有义链和序列AUCAGCAGAAACAUGUAGG(SEQ ID NO：4)的反义链；或b)序列GCAUGGUCAUCAUCAUGGU(SEQ ID NO：5)的有义链和序列ACCAUGAUGAUGACCAUGC(SEQ ID NO：6)的反义链。2.权利要求1所述的合成RNA分子，其中所述RNA是小干扰RNA(siRNA)。3.权利要求1所述的合成RNA分子，其中所述RNA是小发夹RNA(shRNA)，任选地其中所述shRNA还包含含有序列UCAAGAG(SEQ ID NO：9)的RNA或序列UGUGCUU(SEQ ID NO：10)的RNA的环。4.权利要求1所述的合成RNA分子，其中所述RNA是人工微RNA(miRNA)，任选地其中所述人工miRNA包含以下序列的RNA：UGCUGUUGACAGUGAGCGA(X)
n
UAGUGAAGCCACAGAUGUA(Y)
n
CUGCCUACUGCCUCGGA(SEQ ID NO：19)，并且其中：a)(X)
n
包含SEQ ID NO：3且(Y)
n
包含SEQ ID NO：4；或b)(X)
n
包含SEQ ID NO：5且(Y)
n
包含SEQ ID NO：6。5.权利要求1至4中任一项所述的合成RNA，其中所述合成RNA还在5
′
和/或3
′
端包含未配对的突出端序列，任选地其中所述未配对的突出端序列包含重复尿嘧啶(U)碱基的序列。6.组合物，其包含权利要求1至5中任一项所述的合成RNA，任选地其中所述组合物还包含一种或更多种生理学上可接受的载体和/或一种或更多种生理学上可接受的辅料。7.载体，其编码权利要求1至5中任一项所述的合成RNA。8.权利要求7所述的载体，其中所述合成RNA是权利要求4所述的人工miRNA。9.权利要求7所述的载体，其中所述合成RNA选自SEQ ID NO：11至18中的任一种。10.权利要求7至9中任一项所述的载体，其中所述载体是表达质粒。11.权利要求7至9中任一项所述的载体，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿尔弗雷德，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学托管会，
类型：发明
国别省市：