降解杀菌剂的细菌融合子CCP及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种降解杀菌剂的细菌融合子CCP及其应用。所述细菌融合子CCP已于2022年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：武汉市武昌区珞珈武汉大学保藏中心，邮政编码为430072；保藏编号为CCTCC NO:M 20221284。细菌融合子CCP可同时降解多种杀菌剂，如降解百菌清、多菌灵、丙环唑、己唑醇、烯唑醇或戊唑醇，降解效果好，环境耐受性强、生物安全性高。生物安全性高。生物安全性高。

【技术实现步骤摘要】
降解杀菌剂的细菌融合子CCP及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种降解杀菌剂的细菌融合子CCP及其应用，更具体的涉及一株利用原生质体融合技术构建的能同时降解百菌清、多菌灵和丙环唑的融合子CCP及其应用。

技术介绍

[0002]百菌清化学名称为2,4,5,6
‑
四氯
‑
1，3
‑
苯二甲腈(CTN)，是一种广谱杀菌剂，已被用于防治各种作物真菌病害。在中国，CTN常用于温室中各种蔬菜、水果、水稻和其他经济作物或预防草坪叶面真菌病。与此同时，CTN的积累还会造成其他有害影响。例如，研究表明，高浓度的CTN会对鱼类和鸟类造成遗传毒性，并引发一系列其他环境问题。
[0003]多菌灵化学名称为N
‑
(2
‑
苯骈咪唑基)
‑
氨基甲酸甲酯(MBC)，与CTN一样是一种化学性质稳定的广谱杀菌剂。它在中国被大量使用的部分原因是其高度稳定的化学性质。据报道，MBC在水果、蔬菜、作物和土壤中的残留和积累可通过食物链影响人类健康。根据之前的实验报告，我们知道MBC的过度使用不仅会对人体造成一定的伤害，还会对土壤微生物产生毒性作用，使其失去原有的生理功能。MBC在土壤和水中非常稳定，降解速度相对较慢(半衰期可达12个月)。过量使用多菌灵会改变土壤微生物群落结构，导致土壤污染。
[0004]丙环唑化学名为1
‑
[2
‑
(2,4
‑
二氯苯基)
‑4‑
丙基
‑
1,3
‑
二氧戊环
‑2‑
甲基]‑
1氢
‑
1,2,4三唑(PCZ)，是一种广谱系统三唑类杀菌剂，用于防治水果、谷物、蔬菜、硬木等田间作物的真菌病害。研究结果表明PCZ的长期使用对水环境及土壤环境安全造成危害，尤其是对罗非鱼、斑马鱼等水生生物毒害较大，并且其对陆地小型生物，如家蚕，也属有毒害作用。由于PCZ在水中和土壤中的降解半衰期较长，所以PCZ长期使用极易造成农药残留，进而对生态环境及农产品等造成危害。
[0005]对于上述农药污染的环境修复主要有物理修复、化学修复、动植物和微生物修复等途径。其中微生物修复具有简便、环保、高效的特点，且微生物种类多样、分布广泛，对环境适应性强，因此，将微生物用于环境中百菌清和多菌灵双重污染的降解及污染环境的生物修复，具有很好的应用前景。目前国内外对百菌清、多菌灵和丙环唑微生物降解的研究主要侧重在菌株分离、代谢产物鉴定等方面，借助原生质体融合技术构建多功能遗传工程菌株，解决土壤环境中百菌清、多菌灵和丙环唑等多种农药残留共存问题，但是未见得到较佳的研究成果。
[0006]鉴于农药残留污染一直是一大难题，本专利技术通过原生质体融合等研究手段定向构建具高效生物降解能力的多功能降解菌株，大大减少百菌清、多菌灵和丙环唑在施用后对作物造成的药害。

技术实现思路

[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种降解杀菌剂的细菌融合子CCP。
[0008]本专利技术的第一个目的是提供一种降解杀菌剂的细菌融合子CCP，所述细菌融合子
CCP命名为假单胞菌CCP(Pseudomonas sp.CCP)，已于2022年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20221284。
[0009]优选的，上述降解杀菌剂的细菌融合子CCP，将所述细菌融合子CCP置于温度为4
‑
40℃、pH为5.0
‑
9.0的环境中培养。
[0010]优选的，上述降解杀菌剂的细菌融合子CCP，培养所述细菌融合子CCP所用培养基为LB培养基。
[0011]本专利技术的第二个目的是提供一种细菌融合子CCP在降解杀菌剂中的用途。
[0012]优选的，上述细菌融合子CCP在降解杀菌剂中的用途，所述杀菌剂为多菌灵、百菌清、丙环唑、己唑醇、烯唑醇或戊唑醇。
[0013]优选的，上述细菌融合子CCP在降解杀菌剂中的用途，将细菌融合子CCP添加至含有杀菌剂的环境中，对杀菌剂进行降解。
[0014]优选的，细菌融合子CCP在降解杀菌剂中的用途，含有杀菌剂的环境中，杀菌剂的浓度均为10
‑
300mg
·
L
‑1。
[0015]本专利技术的第三个目的是提供一种降解杀菌剂的微生物菌剂，其包括上述的细菌融合子CCP。
[0016]优选的，上述降解杀菌剂的微生物菌剂，所述微生物菌剂为细菌融合子CCP菌液。
[0017]优选的，上述降解杀菌剂的微生物菌剂，将培养得到的细菌融合子CCP接种于LB液体培养基中，28～32℃下摇床震荡培养15～16h，获得发酵培养液，pH7.0～8.0，培养所得的发酵液即为所述生物菌剂。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0019]1、本专利技术通过原生质体融合等研究手段定向构建具高效生物降解能力的多功能降解菌株(细菌融合子CCP)及复配生物菌剂，本专利技术的细菌融合子CCP来源于三株亲本细菌经原生质体融合技术融合后，通过分离及纯化获得的一株融合菌株(细菌融合子)，CCP具有环境耐受性强、生物安全性高等优点，可同时降解百菌清、多菌灵和丙环唑三重污染物，大大减少百菌清、多菌灵和丙环唑在施用后对作物造成的药害，减轻其在水体和土壤中的残留对人、畜健康的危害，更好地解决百菌清、多菌灵和丙环唑三重作用对环境的造成的污染问题，具有重大的经济效益、社会效益和环境效益。
[0020]生物保藏信息
[0021]细菌融合子CCP，命名为假单胞菌CCP(Pseudomonas sp.CCP)，属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)，已于2022年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为：武汉市武昌区珞珈武汉大学保藏中心，邮政编码为430072；保藏编号为CCTCC NO:M 20221284。
附图说明
[0022]图1是融合子菌株CCP在LB培养基上(A)及分别添加200mg
·
L
‑1百菌清(B)和500mg
·
L
‑1丙环唑(C)平板上的菌落形态。
[0023]图2是融合子菌株CCP扫描电镜照片；
[0024]A，标尺2μm，B，标尺1μm。
[0025]图3是融合子菌株CCP生长曲线。
[0026]图4是基于16S rRNA序列构建融合子菌株CCP的系统发育分析(Bar,
0.005nucleotide substitutions per nucleotide position)。
[0027]图5是引物S255、S174、S307对菌株CTN
‑
2、MBC
‑
5、PCZ
‑
3和CCP的RAPD扩增结果；
[0028]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.降解杀菌剂的细菌融合子CCP，其特征在于，所述细菌融合子CCP命名为假单胞菌CCP(Pseudomonas sp.CCP)，已于2022年8月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20221284。2.根据权利要求1所述的降解杀菌剂的细菌融合子CCP的培养方法，其特征在于，将所述细菌融合子CCP置于温度为4
‑
40℃、pH为5.0
‑
9.0的环境中培养。3.根据权利要求2所述的降解杀菌剂的细菌融合子CCP的培养方法，其特征在于，培养所述细菌融合子CCP所用培养基为LB培养基。4.权利要求1所述的细菌融合子CCP在降解杀菌剂中的用途。5.根据权利要求4所述的细菌融合子CCP在降解杀菌剂中的用途，其特征在于，所述杀菌剂为多菌灵、百菌清、丙环唑、己唑醇、烯唑醇或戊唑醇。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王光利，赵德印，李学栋，柏玲玲，陈梦晴，
申请(专利权)人：淮北师范大学，
类型：发明
国别省市：