利用(-)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法技术

本发明专利技术公开了利用(

【技术实现步骤摘要】
利用(
‑
)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法


[0001]本专利技术涉及一种肺癌放疗增敏
，具体是利用(
‑
)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法。

技术介绍

[0002]肺癌是全世界发病率最高的恶性肿瘤，且发病率、死亡率均呈逐年上升趋势，其死亡率位居恶性肿瘤之首。肺癌主要分为非小细胞肺癌和小细胞肺癌，其中非小细胞肺癌约占85％，约70
‑
80％的NSCLC患者诊断时已为局部晚期或已发生远处转移失去手术机会，只能依靠放疗、化疗、靶向治疗、生物治疗等综合治疗。
[0003]据WHO统计：恶性肿瘤中约75％的患者需要接受放射治疗，放疗是晚期非手术NSCLC患者重要的局部治疗手段，近年来随着肺部立体定向放射治疗技术的全面开展，各期别的包括早期因各种原因无手术指征的肺癌患者的治愈率和生存率均得到明显提高，但由于放疗后获得性抵抗等问题又降低了放疗敏感性，为追求疗效不断提高放疗有效剂量，肺周围正常组织的放射性损伤随之加重，尤其是放射性心包炎及放射性肺炎的限制直接影响到放疗疗效。只有提高肺癌放疗的敏感性，才能从总体上提高肺癌放疗疗效、降低放射总剂量和降低毒副反应。因此，进一步开展放疗增敏剂的研究，对改善临床NSCLC患者的预后意义重大。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供利用(
‑
)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]利用(
‑
)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法，包括：抵抗株H460R、抵抗株A549R与(
‑
)表儿茶素，且(
‑
)表儿茶素从金荞麦中提取。
[0007]作为本专利技术进一步的方案：抵抗株H460R的制备方法如下：
[0008]S1：取指数生长期H460、A549细胞分别计数3.5
×
105个接种于T24培养瓶中，以含15％胎牛血清的RPMI
‑
1640培养基，在37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养；
[0009]S2：当细胞生长至60％密度时使用电子直线加速器辐照上述培养细胞，照射源皮距SSD为100cm，照射范围为10
×
10cm，以剂量率600cGy/min进行6MV
‑
X射线照射，根据实验要求，照射剂量为0
‑
12Gy，分为4次照射，每次间隔48h；
[0010]S3：当H460、A549细胞生长至60％密度时应用梯度增加X射线剂量法进行反复照射，历时6个月，共照射10次，剂量分别为前3次辐照剂量均为4Gy，中间4次辐照剂量均为6Gy，后3次均为8Gy，每次照射间隔为1
‑
2周，累积剂量60Gy，照射完成后抵抗株命名为抵抗株H460R。
[0011]作为本专利技术再进一步的方案：抵抗株A549R的制备方法如下：
[0012]S1：取指数生长期H460、A549细胞分别计数3.5
×
105个接种于T24培养瓶中，以含
15％胎牛血清的RPMI
‑
1640培养基，在37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养；
[0013]S2：当细胞生长至60％密度时使用电子直线加速器辐照上述培养细胞，照射源皮距SSD为100cm，照射范围为10
×
10cm，以剂量率600cGy/min进行6MV
‑
X射线照射，根据实验要求，照射剂量为0
‑
12Gy，分为4次照射，每次间隔48h；
[0014]S3：当H460、A549细胞生长至60％密度时应用梯度增加X射线剂量法进行反复照射，历时6个月，共照射10次，剂量分别为前3次辐照剂量均为4Gy，中间4次辐照剂量均为6Gy，后3次均为8Gy，每次照射间隔为1
‑
2周，累积剂量60Gy，照射完成后抵抗株命名为抵抗株A549R。
[0015]作为本专利技术再进一步的方案：在细胞水平确定(
‑
)表儿茶素在电离辐射下对肺癌放疗抵抗株A549R、抵抗株H460R放疗敏感性的作用流程：
[0016]S1：于8Gy放疗条件(每次辐照剂量为2Gy，连续照射4次，每次间隔48h)下，10μg/L(
‑
)表儿茶素处理抵抗株A549R及抵抗株H460R细胞；
[0017]S2：测定细胞自噬和恶性生物学行为：电子显微镜观察细胞中自噬小体释放情况；Western blot和免疫荧光检测细胞中凋亡和自噬相关蛋白的表达水平；CCK
‑
8实验用于检测细胞增殖活力；Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力；Annexin V
‑
FITC/PI双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡，确定(
‑
)表儿茶素对A549R、H460R细胞放疗抵抗性具有缓解作用。
[0018]作为本专利技术再进一步的方案：细胞水平探究(
‑
)表儿茶素作用下lncRNA LOC107986454/miR
‑
143
‑
3p/EZH2表达水平改变对抵抗株A549R及抵抗株H460R细胞PI3K/Akt信号通路和放疗敏感性的影响流程：
[0019]通过敲降和过表达，外源性改变A549R、H460R细胞中lncRNA LOC107986454/miR
‑
143
‑
3p的表达水平，采用LY294002、IGF
‑
1阻断或激活PI3K/Akt信号通路，10μg/L(
‑
)表儿茶素处理后，于8Gy放疗条件下RT
‑
qPCR、Western blot检测LOC107986454、miR
‑
143
‑
3p、EZH2的表达情况；检测细胞自噬水平和恶性生物行为变化：电子显微镜观察细胞中自噬小体释放情况；Western blot和免疫荧光检测细胞中凋亡和自噬相关蛋白的表达水平、PI3K/Akt通路中蛋白的表达；CCK
‑
8实验用于检测细胞增殖活力；Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力；Annexin V
‑
FITC/PI双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡，探究(
‑
)表儿茶素缓解A549R、H460R细胞放疗抵抗性的机制，验证lncRNA LOC107986454/miR
‑
143
‑
3p轴为其中的关键作用通路。
[0020]作为本专利技术再进一步的方案：动物水平验证(
‑
)表儿茶素通过LOC107986454/miR
‑
143
‑
3p/EZH2轴调控PI3K/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.利用(
‑
)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法，其特征在于：包括：抵抗株H460R、抵抗株A549R与(
‑
)表儿茶素，且(
‑
)表儿茶素从金荞麦中提取。2.根据权利要求1所述的利用(
‑
)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法，其特征在于：抵抗株H460R的制备方法如下：S1：取指数生长期H460、A549细胞分别计数3.5
×
105个接种于T24培养瓶中，以含15％胎牛血清的RPMI
‑
1640培养基，在37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养；S2：当细胞生长至60％密度时使用电子直线加速器辐照上述培养细胞，照射源皮距SSD为100cm，照射范围为10
×
10cm，以剂量率600cGy/min进行6MV
‑
X射线照射，根据实验要求，照射剂量为0
‑
12Gy，分为4次照射，每次间隔48h；S3：当H460、A549细胞生长至60％密度时应用梯度增加X射线剂量法进行反复照射，历时6个月，共照射10次，剂量分别为前3次辐照剂量均为4Gy，中间4次辐照剂量均为6Gy，后3次均为8Gy，每次照射间隔为1
‑
2周，累积剂量60Gy，照射完成后抵抗株命名为抵抗株H460R。3.根据权利要求1所述的利用(
‑
)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法，其特征在于：抵抗株A549R的制备方法如下：S1：取指数生长期H460、A549细胞分别计数3.5
×
105个接种于T24培养瓶中，以含15％胎牛血清的RPMI
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1640培养基，在37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中培养；S2：当细胞生长至60％密度时使用电子直线加速器辐照上述培养细胞，照射源皮距SSD为100cm，照射范围为10
×
10cm，以剂量率600cGy/min进行6MV
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X射线照射，根据实验要求，照射剂量为0
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12Gy，分为4次照射，每次间隔48h；S3：当H460、A549细胞生长至60％密度时应用梯度增加X射线剂量法进行反复照射，历时6个月，共照射10次，剂量分别为前3次辐照剂量均为4Gy，中间4次辐照剂量均为6Gy，后3次均为8Gy，每次照射间隔为1
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2周，累积剂量60Gy，照射完成后抵抗株命名为抵抗株A549R。4.根据权利要求1所述的利用(
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)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法，其特征在于：在细胞水平确定(
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)表儿茶素在电离辐射下对肺癌放疗抵抗株A549R、抵抗株H460R放疗敏感性的作用流程：S1：于8Gy放疗条件(每次辐照剂量为2Gy，连续照射4次，每次间隔48h)下，10μg/L(
‑
)表儿茶素处理抵抗株A549R及抵抗株H460R细胞；S2：测定细胞自噬和恶性生物学行为：电子显微镜观察细胞中自噬小体释放情况；Western blot和免疫荧光检测细胞中凋亡和自噬相关蛋白的表达水平；CCK
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8实验用于检测细胞增殖活力；Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力；Annexin V
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FITC/PI双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡，确定(
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)表儿茶素对A549R、H460R细胞放疗抵抗性具有缓解作用。5.根据权利要求1所述的利用(
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)表儿茶素协同放射治疗增加肺癌放射敏感性的方法，其特征在于：细胞水平探究(
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)表儿茶素作用下lncRNA LOC107986454/miR
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3p/EZH2表达水平改变对抵抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄梅芳，王卿，黄楠，李田芊，黄文胜，邓省益，吕艳，王俊峰，
申请(专利权)人：曲靖市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：