一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体及应用制造技术

本发明专利技术提供一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体4C1和2D5，抗体4C1的重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区如SEQ IDNO：2所示；抗体2D5的重链可变区的序列如SEQ ID NO：9所示，其轻链可变区如SEQ ID NO：10所示。该抗体的检测灵敏度高。该抗体的检测灵敏度高。该抗体的检测灵敏度高。

【技术实现步骤摘要】
一种纤溶酶
α
2纤溶酶抑制物复合物抗体及应用


[0001]本专利技术涉及一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体及应用，属于医学检测


技术介绍

[0002]弥散性血管内凝血(disseminated intravascμLar coagμLation；DIC)是多种疾病复杂病理生理过程的中间环节，其常见的基础疾病或诱因包括:脓毒症、恶性肿瘤、创伤、手术、可导致大量促凝物质在短时间内出现于循环血液中，引起血管内广泛血栓形成，继而造成凝血因子消耗和纤溶系统被大规模激活，造成纤维蛋白降解产物的增多阻碍正常纤维蛋白聚合以及纤维蛋白原与血小板结合，干扰纤维蛋白凝块形成和血小板聚集，造成继发的出血倾向。
[0003]血栓是血流在心血管系统血管内面剥落处或修补处的表面所形成的小块。在可变的流体依赖型中，血栓由不溶性纤维蛋白，沉积的血小板，积聚的白细胞和陷入的红细胞组成。
[0004]血栓主要形成的原因是：心、血管内膜损伤；血流改变；血液性质改变。凝血系统异常、纤溶系统异常等导致血栓过多，引发心脑血管疾病，组织缺血、血管梗塞等。目前血栓检测被涵盖在血液的各项检测中，主要涉及凝止血检测。目前临床DIC和血栓均缺乏早期诊断的实验室指标，血管内皮系统功能受损目前也无法实验室检测，外科医生术后抗凝治疗预防血栓也缺乏早期诊断的实验室依据。为此检验科特开展血栓TAT等四项检测，以辅助临床DIC、术后血栓形成的早期诊断和监测等。凝血四项是针对机体凝血功能的评估，而血栓四项是更进一步探究机体血栓异常的风险以及血栓治疗的反馈手段。
[0005]纤溶酶原(Plasminogen,PLG)是纤溶酶(Plasmin,P)的非活性形式，主要在肝脏中合成，主要的器官和组织也会表达。在生理状态下，纤溶酶原PLG通过活性环剪切后转化成纤溶酶P。活化的纤溶酶具有广泛的底物特性，包括纤维蛋白、纤维蛋白原、补体成分3、补体成分5等。纤溶酶P也可以靶向关键的凝血酶原激活剂tPA和uPA，从而产生正反馈环。有活性的纤溶酶p在纤溶和止血、细胞外基质降解、细胞迁移、组织重塑、伤口愈合、血管生成、炎症和肿瘤细胞迁移等生理和病理过程中具有重要作用。全长的纤溶酶原PLG包括791个氨基酸残基和7个结构域。纤溶酶原PLG具有封闭和开放两种不同的构象。糖基化的纤溶酶原PLG以封闭构象存在于血流中，不能被tPA和uPA激活。活化的纤溶酶P半衰期极短，体内无法直接测定。
[0006]α2抗纤溶酶(α2
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Antiplasmin，α2
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AP)是由肝脏合成分泌的，含有452个氨基酸的单链糖蛋白，分子量为70 000，属于丝氨酸酶抑制物家族成员之一，在人血浆中α2
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AP是主要的纤溶酶抑制物，在控制纤溶中起关键作用。
[0007]血液中存在大量的纤溶酶原PLG和抗纤溶酶AP，但是不存在纤溶酶P，因为纤溶酶P会被血液中的抗纤溶酶AP立刻捕获形成纤溶酶
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抗纤溶酶复合物(α2
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plasmininhibitor
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Plasmin Complex,PIC)，其中，纤溶酶P与α2抗纤溶酶AP的比例为1:1，是直接反映纤溶系统
激活程度的生物标志物。该复合物的形成伴随新的共价键形成，因此该复合物非常稳定。PIC血浆半衰期约6h，可直接测定，血浆正常值为<0.8μg/mL，PIC>0.8μg/mL常提示纤溶系统激活。PIC的检测具有以下临床意义：适用于DIC和前DIC状态的早期诊断，指导DIC治疗；临床上常见的血栓性疾病(VTE)的特异性诊断指标；升高时预警各类大手术、恶性肿瘤诱发的血栓症，并推测病情进展；抗凝、溶栓治疗的监测。因此，PIC的检测具有重要意义。
[0008]然而，由于在血液中纤溶酶原PLG也会和抗纤溶酶AP形成一种非共价键的复合物PLG
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AP，虽然该复合物PLG
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AP不够稳定，可以通过较弱的方式破坏，但是若采用PIC抗体进行PIC检测，PIC抗体不仅会结合PIC也会结合该复合物PLG
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AP，这样该复合物PLG
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AP会对复合物PIC的检测会形成一定的干扰，导致检测灵敏度受到一定影响。
[0009]综上所述，目前市面上没有满足临床需求的PIC的检测试剂，尤其是关键性原材料PIC抗体。

技术实现思路

[0010]本专利技术提供了一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体及应用，可以有效解决上述问题。
[0011]本专利技术是这样实现的：
[0012]一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体4C1，其重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区如SEQ ID NO：2所示。
[0013]在一些实施例中，纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体4C1的重链包括重链CDR1、重链CDR2及重链CDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3
‑
5所示；其轻链包括轻链CDR1、轻链CDR2及轻链CDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6
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8所示。
[0014]在一些实施例中，所述抗体是以纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物为免疫原制备的单克隆抗体。
[0015]一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体2D5，其重链可变区的序列如SEQ ID NO：9所示，其轻链可变区如SEQ ID NO：10所示。
[0016]在一些实施例中，纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体2D5的重链包括重链CDR1、重链CDR2及重链CDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO：11
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13所示；其轻链包括轻链CDR1、轻链CDR2及轻链CDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO：14
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16所示。
[0017]在一些实施例中，所述抗体是以纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物为免疫原制备的单克隆抗体。
[0018]一种上述的抗体4C1在制备纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物检测试剂中的应用。
[0019]一种上述的抗体2D5在制备纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物检测试剂中的应用。
[0020]一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物的检测试剂盒，包括上述的抗体4C1或/和抗体2D5。
[0021]一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物的保存溶液，包括以下成分：20mM PBS 7.4、150mM NaCl、1wt％BSA、10wt％蔗糖、10wt％NBS。
[0022]本专利技术的有益效果是：
[0023]现有的PIC抗体一般只对PIC本身具有较强的反应活性，对AP或P的反应活性弱，对PLG的反应活性也弱。采用此类抗体对PIC进行检测会存在以下情况：当包被抗体因其弱结
合能力与其中一个抗原单体AP或PLG结合时，该新结构就拥有与另外一个抗原单体PLG或AP结合的能力，且结合的强弱不在由两个抗原单体AP或PLG的亲和力单独决定，因为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体4C1，其特征在于，其重链可变区的序列如SEQ ID NO：1所示，其轻链可变区如SEQ ID NO：2所示。2.根据权利要求1所述的纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体4C1，其特征在于，其重链包括重链CDR1、重链CDR2及重链CDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO：3
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5所示；其轻链包括轻链CDR1、轻链CDR2及轻链CDR3，其氨基酸序列如SEQ ID NO：6
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8所示。3.根据权利要求1所述的纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体4C1，其特征在于，所述抗体是以纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物为免疫原制备的单克隆抗体。4.一种纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体2D5，其特征在于，其重链可变区的序列如SEQ ID NO：9所示，其轻链可变区如SEQ ID NO：10所示。5.根据权利要求4所述的纤溶酶α2纤溶酶抑制物复合物抗体2D5，其特征在于，其重链包括重链CDR1、重链...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘霖霏，王龙，陈自敏，熊君辉，李丽华，林秋敏，王海虹，郭清顺，宋浏伟，
申请(专利权)人：厦门万泰凯瑞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：