用于CARD9的剪接调节的寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及与CARD9前体mRNA互补的剪接调节寡核苷酸(寡聚物)，其用于抑制在CARD9 mRNA中包含CARD9外显子11。本发明专利技术的寡核苷酸可用于治疗炎性疾病诸如IBD。于治疗炎性疾病诸如IBD。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于CARD9的剪接调节的寡核苷酸
[0001]参考序列表
[0002]在本申请中以电子方式提交的序列表(名称：P35120_Sequence_listing_project_ST25.txt；大小：130,099个字节；以及创建日期：2020年5月5日)的内容全文以引用方式并入本文。


[0003]本专利技术涉及与CARD9前体mRNA互补的剪接调节寡核苷酸(寡聚物)，其减少在成熟CARD9 mRNA中掺入CARD9外显子11。本专利技术的寡核苷酸可用于治疗一系列medical disorders医学病症，这些医学病症包括：炎性疾病，诸如炎性肠病(诸如克罗恩病或溃疡性结肠炎)；或选自由以下项组成的组的疾病：胰腺炎、IgA肾病、原发性硬化性胆管炎、心血管疾病、癌症和糖尿病。

技术介绍

[0004]CARD9(Caspase recruitment domain
‑
containing protein 9，含半胱天冬酶募集结构域的蛋白9)是经由C型凝集素受体的抗真菌先天免疫信号传导的中心组分。它是CARD家族的成员，通过活化NF
‑
κB而在先天免疫应答中起重要作用。CARD9介导促炎性细胞因子(包括TNFα、IL
‑
6和IL
‑
1β)的产生，从而调节Th1和Th17细胞的应答。
[0005]CARD9与许多疾病和病症相关联。例如，CARD9表达与心血管疾病、自身免疫病、癌症和肥胖症相关联(Zhong等人Cell Death and Disease(2018)9：52)。
[0006]此外，CARD9已被确定为与炎性肠病(IBD)、强直性脊柱炎、原发性硬化性胆管炎和IgA肾病风险相关联的基因(Cao等人，Immunity 2015 Oct 20；43(4)：715
‑
726)。
[0007]Yamamoto
‑
Furusho发现，CARD9的表达的不同能够区分活动性和缓解性溃疡性结肠炎(UC)。因此，提出将CARD9作为UC患者的靶标(Journal of Inflammation(2018)15：13)。
[0008]此外，发现CARD9表达在重度急性胰腺炎(SAP)患者中上调。小干扰RNA(siRNA)已被用于降低牛磺胆酸钠刺激的SAP大鼠中CARD9表达的水平。与未治疗组相比，接受siRNA治疗的队列展示出胰腺损伤、嗜中性粒细胞浸润、髓过氧化物酶活性和促炎性细胞因子显著减少。因此，建议将CARD9作为治疗急性胰腺炎的靶标(Yang等人，J Cell Mol Med.2016；21(6)：1085
‑
1093)。
[0009]此外，提出将CARD9作为治疗嗜中性粒细胞皮肤病的靶标(Tartey等人，The Journal of Immunology September 15，2018，201(6)1639
‑
1644)。
[0010]与复杂疾病的大多数遗传风险因子不同，CARD9等位基因对于IBD以易感形式和保护性形式两者存在。易感变体CARD9 S12N是一种常见的编码单核苷酸多态性，其经由全基因组关联研究(GWAS)得到鉴别并且与CARD9 mRNA的表达增加相关联(Cao等人，Immunity 2015 Oct 20；43(4)：715
‑
726)。保护性变体CARD9 S12NΔ11是一种罕见的剪接变体，其中缺失CARD9的外显子11。该等位基因通过对GWAS基因座进行深度测序得到鉴别，产生具有C
末端截短的蛋白质，并且赋予强大的疾病防护作用(P<10
‑
16)(Beaudoin等人，PLoS Genet.2013；9：e1003723；Rivas等人，Nat Genet.2011；43：1066
‑
1073)。
[0011]小分子抑制剂已被用于直接靶向CARD9外显子11剪接事件以模拟保护性CARD9 S12NΔ11变体，以确定使用小分子抑制剂概括与防护IBD相关联的CARD9突变的抗炎功能的可行性(Leshchiner等人，Proc Natl Acad Sci USA.2017Oct 24；114(43)：11392
‑
11397)。
[0012]反义介导的剪接调节是一种工具，可通过多种方式利用，为罕见的遗传疾病提供潜在的疗法。该方法已引起获得批准的用于杜氏肌营养不良和脊髓性肌萎缩症的治疗剂；有关使用反义寡核苷酸进行剪接调节的各种方法的综述，参见：Arechavala
‑
Gomeza等人，Appl Clin Genet.2014；7：245
‑
252。
[0013]本专利技术人开发出靶向CARD9外显子11的剪接转换化合物。本专利技术的化合物调节在CARD9 mRNA中包含CARD9外显子11，从而增强dΔ11CARD9 mRNA的表达。
[0014]专利技术目的
[0015]本专利技术提供了与CARD9前体mRNA互补的剪接调节寡核苷酸(寡聚物)，其能够调节CARD9外显子11的包含，从而增强CARD 9 dΔ11变体的表达。CARD 9 dΔ11蛋白变体是一种CARD9变体，其已被说明可提供对炎性肠病的保护。换言之，本专利技术的寡核苷酸为剪接转换寡核苷酸，其引起在CARD9前体mRNA的加工中跳过外显子11，导致缺失CARD9外显子11序列的一部分或全部的成熟mRNA。所得CARD 9 dΔ11转录本的表达引起CARD 9 dΔ11蛋白的表达或其表达的增加。
[0016]本专利技术的寡核苷酸可用于治疗如本文所公开的一系列医学病症，诸如炎性肠病(诸如克罗恩病和溃疡性结肠炎)；或选自由以下项组成的组的疾病：胰腺炎、IgA肾病、原发性硬化性胆管炎、心血管疾病、癌症和糖尿病。

技术实现思路

[0017]本专利技术提供与CARD9核酸互补并且能够调节CARD9核酸表达的反义寡核苷酸，及其在医药中的用途。
[0018]本专利技术涉及存在于CARD9核酸内的有利的靶位点序列的鉴定，这些靶位点序列适合于用反义寡核苷酸靶向，值得注意的靶位点引起对CARD9前体mRNA的剪接的调节。
[0019]换言之，本专利技术的寡核苷酸能够增强在CARD9前体mRNA的加工中跳过外显子11，导致缺失CARD9外显子11序列的一部分或全部的成熟mRNA。所得CARD 9 dΔ11转录本的表达引起CARD 9 dΔ11蛋白(CARD9Δ11)的表达或增加的表达，该CARD 9 dΔ11蛋白是一种提供保护或缓解炎症病状诸如炎性肠病的蛋白质变体。
[0020]本专利技术提供了与CARD9前体mRNA互补的剪接调节寡核苷酸(寡聚物)，其降低野生型CARD9(WTCARD9)蛋白的表达。WT CARD9蛋白的减少可通过产生替代转录本诸如CARD9Δ11 mRNA来实现。在一些实施例中，WTCARD9的表达的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于调节哺乳动物CARD9前体mRNA转录本的剪接的反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸具有的长度为10个至40个核苷酸并且包含具有至少10个核苷酸的、与SEQ ID NO 1具有至少90％互补性的连续核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸具有的长度为10个至25个核苷酸。3.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述连续核苷酸序列与SEQ ID NO 1具有100％互补性。4.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸或其连续核苷酸序列与SEQ ID NO 6互补，诸如完全互补。5.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸或其连续核苷酸序列与SEQ ID NO 7互补，诸如完全互补。6.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸或其连续核苷酸序列与SEQ ID NO 8互补，诸如完全互补。7.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸或其连续核苷酸序列与SEQ ID NO 9互补，诸如完全互补。8.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸，其中所述连续核苷酸序列包含与SEQ ID NO 559、SEQ ID NO 560、SEQ ID NO 561、SEQ ID NO 562、SEQ ID NO 563、SEQ ID NO 564或SEQ ID NO 565互补，诸如完全互补的核苷酸序列。9.根据权利要求1至8中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸或其连续核苷酸序列与选自由SEQ ID NO 11至SEQ ID NO 284组成的组的序列互补。10.根据权利要求1至9中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸能够增强Δ11CARD9的表达。11.根据权利要求1至9中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸能够降低WTCARD9的表达。12.根据权利要求1至9中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸能够降低WTCARD9的表达并且增强Δ11CARD9的表达。13.根据权利要求1至12中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述寡核苷酸为或包含反义寡核苷酸混聚物或全聚物。14.根据权利要求1至13中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸或其连续核苷酸序列的长度为10个至20个核苷酸。15.根据权利要求1至14中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸的所述连续核苷酸序列包含选自SEQ ID NO 285至SEQ ID NO 558的序列。16.根据权利要求1至15中任一项所述的反义寡核苷酸，其中所述反义寡核苷酸包含本文提供的寡核苷酸，诸如选自由化...

【专利技术属性】
技术研发人员：P，
申请(专利权)人：贝林格尔英格海姆国际有限公司，
类型：发明
国别省市：