一种抗棘球绦虫的药物靶点、靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗棘球绦虫的药物靶点、靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂、试剂盒及其应用。该试剂靶向负责对棘球绦虫RNA进行1

【技术实现步骤摘要】
一种抗棘球绦虫的药物靶点、靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种抗棘球绦虫的药物靶点、靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]棘球绦虫(主要包括细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫)的中绦期幼虫寄生于人和牲畜(中间宿主)，可引起棘球蚴病，又称包虫病。该病呈全球分布，严重危害人民身体健康及畜牧业发展。我国的患病人数和疾病负担均居全球首位。人主要是食入虫卵感染棘球绦虫，可产生占位性病变，使患者丧失劳动能力，严重者可导致死亡。因此，棘球蚴病已经被列为全球十大被忽视热带病，是我国重点防控的重大寄生虫病之一。除此之外，棘球绦虫的成虫寄生于终宿主犬或者狐狸，引起犬或狐棘球绦虫病，棘球绦虫在该阶段可产生成熟的虫卵，因此，该阶段是控制棘球蚴病的关键阶段。但是，目前棘球蚴病的临床治疗药物只有苯并咪唑类药物，其治愈率低且药物靶点及作用机制未明，另外犬或狐棘球绦虫病的控制药物仅有吡喹酮，因此亟需发现用于棘球蚴病和犬科动物棘球绦虫病治疗的新的药物靶点及药物。
[0003]棘球绦虫在其生长发育中，需要寄生于不同的宿主，其基因表达受到调控，从而影响其生理功能的改变以适应不同的宿主环境。其中，RNA修饰通过调控生物体基因表达和翻译，从而影响细胞的活性、生长、分化以及环境的适应性等。RNA修饰机制包括三种类型的RNA结合蛋白：写入器、读取器和擦除器，它们分别负责添加、识别和去除RNA分子上的修饰。在这些RNA结合蛋白的调控下，RNA修饰在基因表达控制上是动态的。事实上，大多数RNA修饰酶及其功能已在人和细菌等生物体中得到广泛研究。RNA修饰酶突变与多种人类疾病有关，包括癌症、心血管疾病、代谢疾病、神经系统疾病等。因此，靶向RNA修饰开发治疗药物有可能成为人类疾病可行的治疗策略。相比之下，人们对寄生虫的RNA修饰知之甚少。最近，在单细胞寄生虫(如疟原虫和锥虫)的RNA中鉴定到一些RNA修饰类型可在其生长发育过程中发挥调节功能。然而，尚未揭示或讨论其他寄生虫的RNA修饰特征。
[0004]在前期研究中，本专利技术创造性地发现在提取的棘球绦虫RNA中存在丰富的1
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甲基腺苷(m1A)修饰，在该寄生虫基因组中鉴定到了相应的甲基化酶(RNA修饰酶)，其在关键位点的序列同宿主有显著性的差异，可作为药物靶点，开发靶点和作用机制明确的棘球蚴病和犬科动物棘球绦虫病治疗药物。

技术实现思路

[0005]为了有效的治疗棘球蚴病和犬科动物棘球绦虫病，一方面，本专利技术公开了一种抗棘球绦虫的药物靶点，为负责对棘球绦虫RNA进行1
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甲基腺苷修饰的甲基化酶(以下简称为RNA m1A修饰的甲基化酶)；所述甲基化酶包括Rrp8、Trmt10、Trmt61和Trmt6的蛋白序列中的一种或多种。
[0006]所说的RNA m1A修饰的甲基化酶包括多房棘球蚴绦虫(Echinococcus multilocularis)和细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的Rrp8基因相同序列(多房棘球绦虫Genebank登录号：XM_024491311.1；Sanger database序列号：EmuJ_000954200.1)或同源序列，该序列包含pfam01209结构域。
[0007]上述棘球绦虫药物靶点的一种优选方式为，所说的RNA m1A修饰的甲基化酶包括多房棘球蚴绦虫和细粒棘球绦虫的Trmt10C基因相同序列(多房棘球绦虫Genebank登录号：XM_024493858.1；Sanger database序列号：EmuJ_000605700.1)或同源序列，该序列包含Trm10_MRRP1和SPOUT结构域。
[0008]上述棘球绦虫药物靶点的一种优选方式为，所说的RNA m1A修饰的甲基化酶包括多房棘球蚴绦虫和细粒棘球绦虫的Trmt61基因相同序列(细粒棘球绦虫Genebank登录号：EgrG_000079300；Sanger database序列号：EmuJ_000079300.1)或同源序列，该序列包含Gcd14结构域。
[0009]上述棘球绦虫药物靶点的一种优选方式为，所说的RNA m1A修饰的甲基化酶包括多房棘球蚴绦虫和细粒棘球绦虫的Trmt6基因相同序列(多房棘球绦虫Genebank登录号：XM_024497794.1；Sanger database序列号：EmuJ_000106300.1)或同源序列，该序列包含Gcd10p结构域。
[0010]另一方面，本专利技术还公开了一种靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂，靶向负责对棘球绦虫RNA进行1
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甲基腺苷修饰的甲基化酶；所述甲基化酶包括Rrp8、Trmt10、Trmt61和Trmt6的蛋白序列中的一种或多种；所述靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂为siRNA、shRNA、反义RNA和基因编辑载体中的一种或多种。
[0011]在一些实施方案中，所述靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂为siRNA；所述siRNA是靶向所述甲基化酶Rrp8、Trmt10、Trmt61和/或Trmt6的蛋白序列对应的核酸序列。
[0012]在一些实施方案中，所述siRNA是以Rrp8、Trmt10、Trmt61和/或Trmt6的基因编码区的mRNA为对应的靶序列。
[0013]在一些实施方案中，所述siRNA以Rrp8、Trmt10、Trmt61和/或Trmt6的基因编码区选取的19～22个核苷酸作为siRNA作用靶点，从而抑制RNA m1A甲基化酶基因表达。
[0014]在一些实施方案中，所述siRNA中的每段核酸序列的长度为15
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30bp。
[0015]在一些实施方案中，所述靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂为siRNA；所述siRNA对应的靶序列选自SEQ ID NO:10～SEQ ID NO:23中的一种或多种；所述siRNA未经修饰，或者包含至少1个经修饰的核苷酸或核苷酸类似物。
[0016]表1本专利技术筛选的靶序列
[0017][0018]在一些实施方案中，所述siRNA未经修饰，或者包含至少1个经修饰的核苷酸或核苷酸类似物。在一些实施方案中，所述棘球绦虫为多房棘球绦虫和/或细粒棘球绦虫。
[0019]第三方面，本专利技术公开了一种靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂盒，含有如上所述的靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂。
[0020]第四方面，本专利技术还公开了如上所述的靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂在制备预防或治疗棘球蚴病药物和/或犬科动物棘球绦虫病药物方面的应用。
[0021]第五方面，本专利技术还公开了一种药物筛选方法，以如上所述的抗棘球绦虫的药物靶点的活性及底物特异性作为药物作用对象，筛选出在影响其活性或者底物特异性的化合物。
[0022]进一步地，包括在体外对如上所述的抗棘球绦虫的药物靶点的活性和底物特异性的影响，体内对如上所述的抗棘球绦虫的药物靶点的活性和底物特异性的影响，以及通过如上所述的抗棘球绦虫的药物靶点影响本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂，其特征在于，靶向负责对棘球绦虫RNA进行1
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甲基腺苷修饰的甲基化酶；所述甲基化酶包括Rrp8、Trmt10、Trmt61和Trmt6的蛋白序列中的一种或多种；所述靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂为siRNA、shRNA、反义RNA和基因编辑载体中的一种或多种。2.如权利要求1所述的靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂，其特征在于，所述靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂为siRNA；所述siRNA是靶向所述甲基化酶Rrp8、Trmt10、Trmt61和/或Trmt6的蛋白序列对应的核酸序列。3.如权利要求2所述的靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂，其特征在于，所述siRNA是以Rrp8、Trmt10、Trmt61和/或Trmt6的基因编码区的mRNA为对应的靶序列。4.如权利要求3所述的靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂，其特征在于，所述siRNA以Rrp8、Trmt10、Trmt61和/或Trmt6的基因编码区选取的19～22个核苷酸作为siRNA作用靶点，从而抑制RNA m1A甲基化酶基因表达。5.如权利要求2所述的靶向棘球绦虫甲基化酶的试剂，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丛珊，尹建海，曹建平，张皓冰，陶奕，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所国家热带病研究中心，
类型：发明
国别省市：