一种靶向MAGE-A1且自分泌CD47scFv的嵌合抗原受体及其应用制造技术

技术编号:37084123 阅读:18 留言:0更新日期:2023-03-29 19:59
本申请涉及生物医药技术领域,提供一种具有自分泌功能的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞及其制备方法和应用。本申请公开了一种靶向MAGE

【技术实现步骤摘要】
一种靶向MAGE

A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体及其应用


[0001]本申请涉及生物医药领域,具体涉及一种具有自分泌功能的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体T细胞疗法(chimeric antigen receptor T

cell immunotherapy,CAR

T)经过30多年的发展,已逐渐成为肿瘤治疗的新趋势。CAR

T细胞,即利用基因工程技术构建嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR),通过病毒(逆转录病毒或慢病毒)或非病毒方法,高效转染T淋巴细胞。CAR

T细胞可以以MHC非限制性方式特异性地识别肿瘤相关抗原,通过释放一些细胞因子(如穿孔素、颗粒酶、干扰素)以及诱导细胞凋亡等方式杀伤肿瘤细胞。完整的CAR结构包括抗原结合区、跨膜链接区和胞内信号区三个部分。经过数年研究,CAR结构经历了五代发展。第一代CAR的胞内区仅含有CD3ζ,缺乏共刺激信号,不能有效地活化T细胞且存活时间很短。第二代CAR在胞内区增加一个免疫共刺激分子如CD28、CD27或CDB7等,以增强效应T细胞的活化和增殖。第三代CAR包含CD3ζ和两个共刺激分子(如CD27、CD28、41BB、ICOS和OX

40等),进一步增强其杀死肿瘤细胞的能力。第四代CAR增加了一个活化T细胞核因子(NFAT)域,诱导形成白细胞介素(IL)

12、IL

15等细胞因子,调节肿瘤微环境,从而提高CAR

T细胞的抗肿瘤活性。第五代CAR为通用型。
[0003]CAR

T技术在血液系统肿瘤治疗方面获得重大突破,但是在实体瘤的治疗中进展缓慢。其中主要原因有两点:1.实体肿瘤缺乏肿瘤特异性抗原(TSA),导致一系列靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR

T细胞因脱靶概率增加而疗效欠佳;2.实体肿瘤内部免疫微环境可招募或诱导免疫抑制细胞,并释放大量免疫抑制因子,使得CAR

T细胞增殖减慢,耗竭加快,浸润受限,大大削弱了CAR

T细胞的杀伤效果。因此,筛选并验证更加适宜的靶抗原以降低CAR

T细胞脱靶率、减少肿瘤免疫微环境中免疫抑制作用是增强CAR

T细胞对实体瘤治疗效果的两大关键因素。
[0004]癌睾抗原(cancer/testis antigen,CTA)是一类可在恶性肿瘤组织中异常表达,而在睾丸外的正常组织中低表达或不表达的蛋白。因其肿瘤表达特异性,CTA也成为肿瘤免疫治疗的关注热点。黑色素瘤抗原A1(MAGE

A1)属于CTA中MAGE

A亚家族,是已知的致癌驱动因子,可促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等,在肿瘤的形成和发展过程中发挥重要作用。MAGE

A1在各类肿瘤组织中差异性表达并可诱导自身CTL产生特异性免疫应答,是肿瘤免疫治疗的理想靶点。肿瘤微环境(TME)由复杂异质性群体组成,包含肿瘤细胞、浸润性免疫细胞、间质细胞、内皮细胞和癌症相关的成纤维细胞等。实体肿瘤TME存在大量负性免疫抑制因子,可招募或诱导免疫抑制细胞包括肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、肿瘤相关中性粒细胞(TANs)、骨髓源性抑制细胞(MDSCs)、调节性T细胞(Tregs)和肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)。TAMs是TME中浸润性免疫细胞的主要群体,具有高度可塑性,并显示多种表型,包括M1和M2。参与抑制巨噬细胞抗肿瘤活性的一个主要抑制信号是CD47,CD47广泛表达于多种
细胞表面,几乎所有肿瘤细胞均高表达CD47,CD47高表达与多种恶性肿瘤的不良预后相关。CD47是免疫球蛋白超家族的一种糖蛋白,它有一个胞外N端IgV结构域,5个跨膜螺旋和一个胞质C端短剪接尾。CD47与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(SIRPα)结合,通过CD47

SIRPα信号通路逃逸巨噬细胞的免疫监视。多项临床前及临床研究显示:针对CD47

SIRPα通路的CD47抗体可产生良好的抑瘤作用,其机制包括影响巨噬细胞极化、增强巨噬细胞吞噬作用、提高树突状细胞抗原递呈能力等。近年来,CD47受到广泛关注,靶向CD47的免疫检查点抑制剂成为治疗人类癌症的一种新的免疫治疗策略。
[0005]目前针对肿瘤抗原MAGE

A1及同时将免疫检查点抑制剂整合入CAR结构,使其自分泌抗CD47 scFv抗体从而构建而成的分泌型CAR

T细胞及相关免疫疗法尚未有研究报道。

技术实现思路

[0006]本申请的研究目的是制备一种靶向MAGE

A1且能够分泌抗CD47 scFv的特异性嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞。本专利技术所得的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞可以特异性识别并杀伤MAGE

A1阳性的肿瘤细胞,同时自分泌CD47 scFv,增强了CAR

T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本专利技术的目的之二,在于制备可靶向MAGE

A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体的重组慢病毒载体。本专利技术的目的之三,在于利用上述第二点所获得的慢病毒制备可靶向MAGE

A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞。本专利技术的目的之四,在于将第三点中所制备的可靶向MAGE

A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞应用到肿瘤免疫治疗中。
[0007]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的:
[0008]本申请的第一方面,提供一种靶向MAGE

A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体,所述嵌合抗原受体为由CD8α信号肽(CD8αSP)、MAGE

A1抗体重链可变区(MAGE

A1 scFv

VH)、Linker区、MAGE

A1抗体轻链可变区(MAGE

A1 scFv

VK)、人CD8α铰链区(CD8αHinge)、人CD8α跨膜区(CD8αTM)、CD137、免疫受体酪氨酸活化基序CD3ζ、T2A自剪切肽(T2A)、VH3

3信号肽(VH3

3)、CD47抗体重链可变区(CD47 scFv

VH)、Linker区、CD47抗体轻链可变区(CD47 scFv

VK)和HAtag串联组成。所述的嵌合抗原受体CD8αSP—MAGE

A1 Vh—MAGE

A1 Vk—CD8αHinge—CD137—CD3ζ—T2A本文档来自技高网
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向MAGE

A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体,其特征在于,所述嵌合抗原受体为CD8αSP

MAGE

A1 Vh

MAGE

A1 Vk

CD8αHinge

CD137

CD3ζ

T2A

VH3
‑3‑
CD47 scFv

HA tag;所述的嵌合抗原受体CD8αSP

MAGE

A1 Vh

MAGE

A1 Vk

CD8αHinge

CD137

CD3ζ

T2A

VH3
‑3‑
CD47 scFv

HA tag的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体,其特征在于,编码所述的嵌合抗原受体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员:毛圆陈玉凤杨小慧崔代迅吴付兵黄雯常新霞唐奇冯振卿
申请(专利权)人:南京市浦口医院
类型:发明
国别省市:

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