本申请涉及生物医药技术领域,提供一种具有自分泌功能的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞及其制备方法和应用。本申请公开了一种靶向MAGE
【技术实现步骤摘要】
一种靶向MAGE
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A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体及其应用
[0001]本申请涉及生物医药领域,具体涉及一种具有自分泌功能的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]嵌合抗原受体T细胞疗法(chimeric antigen receptor T
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cell immunotherapy,CAR
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T)经过30多年的发展,已逐渐成为肿瘤治疗的新趋势。CAR
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T细胞,即利用基因工程技术构建嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR),通过病毒(逆转录病毒或慢病毒)或非病毒方法,高效转染T淋巴细胞。CAR
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T细胞可以以MHC非限制性方式特异性地识别肿瘤相关抗原,通过释放一些细胞因子(如穿孔素、颗粒酶、干扰素)以及诱导细胞凋亡等方式杀伤肿瘤细胞。完整的CAR结构包括抗原结合区、跨膜链接区和胞内信号区三个部分。经过数年研究,CAR结构经历了五代发展。第一代CAR的胞内区仅含有CD3ζ,缺乏共刺激信号,不能有效地活化T细胞且存活时间很短。第二代CAR在胞内区增加一个免疫共刺激分子如CD28、CD27或CDB7等,以增强效应T细胞的活化和增殖。第三代CAR包含CD3ζ和两个共刺激分子(如CD27、CD28、41BB、ICOS和OX
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40等),进一步增强其杀死肿瘤细胞的能力。第四代CAR增加了一个活化T细胞核因子(NFAT)域,诱导形成白细胞介素(IL)
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12、IL
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15等细胞因子,调节肿瘤微环境,从而提高CAR
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T细胞的抗肿瘤活性。第五代CAR为通用型。
[0003]CAR
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T技术在血液系统肿瘤治疗方面获得重大突破,但是在实体瘤的治疗中进展缓慢。其中主要原因有两点:1.实体肿瘤缺乏肿瘤特异性抗原(TSA),导致一系列靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR
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T细胞因脱靶概率增加而疗效欠佳;2.实体肿瘤内部免疫微环境可招募或诱导免疫抑制细胞,并释放大量免疫抑制因子,使得CAR
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T细胞增殖减慢,耗竭加快,浸润受限,大大削弱了CAR
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T细胞的杀伤效果。因此,筛选并验证更加适宜的靶抗原以降低CAR
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T细胞脱靶率、减少肿瘤免疫微环境中免疫抑制作用是增强CAR
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T细胞对实体瘤治疗效果的两大关键因素。
[0004]癌睾抗原(cancer/testis antigen,CTA)是一类可在恶性肿瘤组织中异常表达,而在睾丸外的正常组织中低表达或不表达的蛋白。因其肿瘤表达特异性,CTA也成为肿瘤免疫治疗的关注热点。黑色素瘤抗原A1(MAGE
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A1)属于CTA中MAGE
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A亚家族,是已知的致癌驱动因子,可促进肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等,在肿瘤的形成和发展过程中发挥重要作用。MAGE
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A1在各类肿瘤组织中差异性表达并可诱导自身CTL产生特异性免疫应答,是肿瘤免疫治疗的理想靶点。肿瘤微环境(TME)由复杂异质性群体组成,包含肿瘤细胞、浸润性免疫细胞、间质细胞、内皮细胞和癌症相关的成纤维细胞等。实体肿瘤TME存在大量负性免疫抑制因子,可招募或诱导免疫抑制细胞包括肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)、肿瘤相关中性粒细胞(TANs)、骨髓源性抑制细胞(MDSCs)、调节性T细胞(Tregs)和肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)。TAMs是TME中浸润性免疫细胞的主要群体,具有高度可塑性,并显示多种表型,包括M1和M2。参与抑制巨噬细胞抗肿瘤活性的一个主要抑制信号是CD47,CD47广泛表达于多种
细胞表面,几乎所有肿瘤细胞均高表达CD47,CD47高表达与多种恶性肿瘤的不良预后相关。CD47是免疫球蛋白超家族的一种糖蛋白,它有一个胞外N端IgV结构域,5个跨膜螺旋和一个胞质C端短剪接尾。CD47与巨噬细胞表面的信号调节蛋白α(SIRPα)结合,通过CD47
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SIRPα信号通路逃逸巨噬细胞的免疫监视。多项临床前及临床研究显示:针对CD47
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SIRPα通路的CD47抗体可产生良好的抑瘤作用,其机制包括影响巨噬细胞极化、增强巨噬细胞吞噬作用、提高树突状细胞抗原递呈能力等。近年来,CD47受到广泛关注,靶向CD47的免疫检查点抑制剂成为治疗人类癌症的一种新的免疫治疗策略。
[0005]目前针对肿瘤抗原MAGE
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A1及同时将免疫检查点抑制剂整合入CAR结构,使其自分泌抗CD47 scFv抗体从而构建而成的分泌型CAR
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T细胞及相关免疫疗法尚未有研究报道。
技术实现思路
[0006]本申请的研究目的是制备一种靶向MAGE
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A1且能够分泌抗CD47 scFv的特异性嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞。本专利技术所得的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞可以特异性识别并杀伤MAGE
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A1阳性的肿瘤细胞,同时自分泌CD47 scFv,增强了CAR
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T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本专利技术的目的之二,在于制备可靶向MAGE
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A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体的重组慢病毒载体。本专利技术的目的之三,在于利用上述第二点所获得的慢病毒制备可靶向MAGE
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A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞。本专利技术的目的之四,在于将第三点中所制备的可靶向MAGE
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A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞应用到肿瘤免疫治疗中。
[0007]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的:
[0008]本申请的第一方面,提供一种靶向MAGE
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A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体,所述嵌合抗原受体为由CD8α信号肽(CD8αSP)、MAGE
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A1抗体重链可变区(MAGE
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A1 scFv
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VH)、Linker区、MAGE
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A1抗体轻链可变区(MAGE
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A1 scFv
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VK)、人CD8α铰链区(CD8αHinge)、人CD8α跨膜区(CD8αTM)、CD137、免疫受体酪氨酸活化基序CD3ζ、T2A自剪切肽(T2A)、VH3
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3信号肽(VH3
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3)、CD47抗体重链可变区(CD47 scFv
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VH)、Linker区、CD47抗体轻链可变区(CD47 scFv
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VK)和HAtag串联组成。所述的嵌合抗原受体CD8αSP—MAGE
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A1 Vh—MAGE
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A1 Vk—CD8αHinge—CD137—CD3ζ—T2A本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种靶向MAGE
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A1且自分泌CD47 scFv的嵌合抗原受体,其特征在于,所述嵌合抗原受体为CD8αSP
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MAGE
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A1 Vh
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MAGE
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A1 Vk
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CD8αHinge
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CD137
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CD3ζ
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T2A
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VH3
‑3‑
CD47 scFv
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HA tag;所述的嵌合抗原受体CD8αSP
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MAGE
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A1 Vh
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MAGE
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A1 Vk
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CD8αHinge
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CD137
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CD3ζ
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T2A
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VH3
‑3‑
CD47 scFv
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HA tag的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体,其特征在于,编码所述的嵌合抗原受体的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员:毛圆,陈玉凤,杨小慧,崔代迅,吴付兵,黄雯,常新霞,唐奇,冯振卿,
申请(专利权)人:南京市浦口医院,
类型:发明
国别省市:
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