一种与性反转相关的致病基因、引物对及其应用和鉴定基因型的方法技术

本发明专利技术涉及医学诊断领域，特别是涉及一种与性反转相关的致病基因、引物对及其应用和鉴定基因型的方法。本发明专利技术提供了一种与性反转相关的致病基因，在登录号为SRY:NM_003140.3的基因的第316位A突变为G形成的致病基因。本发明专利技术所述的致病基因能够用于性反转人群的筛查和诊断，可以特异性区分性反转患者和正常人群。群。群。

【技术实现步骤摘要】
一种与性反转相关的致病基因、引物对及其应用和鉴定基因型的方法


[0001]本专利技术涉及医学诊断领域，特别是涉及一种与性反转相关的致病基因、引物对及其应用和鉴定基因型的方法。

技术介绍

[0002]性反转包括46，XX性反转Ⅰ型(MIM 400045)和46，XY性反转Ⅰ型(MIM 400044)。Y染色体连锁遗传的46，XY性反转Ⅰ型(MIM 400044)又称为46，XY完全性性腺发育不良(46，XY complete gonadal dysgenesis，46，XY CGD)，患者表现为：原发性闭经，女性外观，乳房几乎不发育或有少量的发育，腋毛和阴毛均正常，正常的女性外生殖器表现。患者的雌激素水平高于其他以原发性闭经为主诉的患者，染色体核型均为46，XY。除了原发性闭经等缺乏第二性征发育等表现外，可在高达30％的患者的性腺内发现生殖细胞肿瘤，最常见的是性腺母细胞瘤。随着染色体核型和基因检测技术的展开，越来越多的46，XY性反转Ⅰ型患者被发现。该病的发生率为1/80000，为儿童罕见病之一。
[0003]从遗传学的角度，目前已发现许多基因参与该病的发生，最常见的是SRY基因(sex
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determining region ofY)(MIM 601313)基因与SOX9基因。这些基因主要参与性别决定(sex determination)或性别分化过程。SRY基因是定位于Y染色体Yp11.2，即位于Y染色体短臂上的假常染色体区域的着丝粒附近约5kb处。SRY包括1个外显子，基因长828bp，其开放阅读框为612bp，编码204个氨基酸，分子量为24kD的蛋白质，包括由79个氨基酸残基(第58～137位氨基酸残基)组成的HMG盒(high mobility group)，该区域高度保守，功能是使DNA弯曲和DNA结合域，还包括两个核定位信号。SRY蛋白质以序列特异性的方式结合线性DNA，人类SRY基因识别序列AACAATG，而序列特异性与DNA结合的特点似乎是整个SOX(SRYtype HMG box)蛋白的特点。SRY蛋白质的HMG结构域含有3个X螺旋和L型构象，并与DNA的小沟结合，这点有助于SRY蛋白质使DNA发生弯曲和解螺旋。HMG结构域在所有物种中都是高度保守区域，它对于SRY蛋白质结合和弯曲DNA是必需的。
[0004]目前已发现有10％～15％的46，XYCGD患者由SRY基因突变造成。SRY基因为睾丸决定因子的候选基因，当SRY蛋白表达足量时，无论是在空间上还是在时间上，它都会诱导下游转录因子SOX9基因的表达，导致Sertoli细胞(支持细胞)的形成，该细胞分泌的睾酮与男性表型的形成相关。当SRY基因发生突变时，核型为46，XY胚胎的双潜能的未分化性腺无法按照正常通路发育为睾丸。此时，Sertoli细胞和Leydig细胞(间质细胞)无法生成，就不能分泌抗苗勒氏管激素(anti
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mullerian hormone，AMH)和睾酮。当缺乏AMH时，副中肾管无法被抑制，未分化性腺会按照女性发育的路径，最终形成女性内生殖器，即子宫、输卵管和阴道上段或发育不良的性腺。而睾酮的缺乏导致男性外生殖器无法形成，中肾管无法发育为输精管、附睾和精囊。当这些患者出生时，可表现为完全正常的女性外生殖器。
[0005]因此，基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊性反转的重要遗传学标准。临床上需要针对不同突变建立相应的检测技术并用于明确病因和疾病诊
断。但目前并没有能特异性区分性反转的突变患者和正常人群的诊断试剂的报道。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种与性反转相关的致病基因、引物对及其应用和鉴定基因型的方法。本专利技术所述的致病基因能够用于性反转人群的筛查和诊断，可以特异性区分性反转患者和正常人群。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种与性反转相关的致病基因，在登录号为SRY:NM_003140.3的基因的第316位A突变为G形成的致病基因。
[0009]本专利技术提供了用于扩增上述技术方案所述的致病基因的引物对，所述引物对包括SRY
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F和SRY
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R；
[0010]所述SRY
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F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述SRY
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R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0011]本专利技术提供了上述技术方案所述的致病基因作为靶标基因在制备诊断性反转的试剂中的应用。
[0012]本专利技术提供了一种诊断性反转的试剂，所述试剂包括上述技术方案所述的引物对。
[0013]本专利技术提供了上述技术方案所述的致病基因作为靶标基因或上述技术方案所述的试剂在制备诊断性反转的试剂盒中的应用。
[0014]本专利技术提供了一种诊断性反转的试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的试剂和测序引物对。
[0015]优选的，所述测序引物对包括SRY
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SeqF和SRY
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SeqR；
[0016]所述SRY
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SeqF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述SRY
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SeqR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0017]优选的，所述试剂盒还包括阳性突变参考品DNA；所述阳性突变参考品DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
[0018]本专利技术提供了一种鉴定SRY:NM_003140.3:c.316位点的基因型的方法，包括以下步骤：
[0019]以待测样品DNA为模板，利用上述技术方案所述的引物对进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0020]将扩增产物进行测序，确定所述SRY:NM_003140.3:c.316位点的基因型。
[0021]优选的，所述待测样本包括血液。
[0022]有益效果：
[0023]本专利技术提供了一种与性反转相关的致病基因，在登录号为SRY:NM_003140.3的基因的第316位A突变为G形成的突变基因。本专利技术通过外显子组测序技术首次发现了SRY:NM_003140.3:c.316A>G:p.K106E位点突变可以导致性反转发病。在具体实施过程中，可以通过检测受试者是否携带有上述突变，用于筛查或诊断性反转的遗传学诊断，以指导治疗。
[0024]特别地，本专利技术所提供的试剂盒可用于快速、有效地预测或诊断性反转。而且，本专利技术为性反转的发病机制研究奠定了重要基础，为性反转患者的治疗提供全新的理论依
据。并且，本专利技术可以为治疗性反转提供可能的药物靶点，并为其药物筛选、药效评价及靶向治疗提供新的技术支持。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0026]图1显示性反转1号家系遗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与性反转相关的致病基因，在登录号为SRY:NM_003140.3的基因的第316位A突变为G形成的致病基因。2.用于扩增权利要求1所述的致病基因的引物对，其特征在于，所述引物对包括SRY
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F和SRY
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R；所述SRY
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F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述SRY
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R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.权利要求1所述的致病基因作为靶标基因在制备诊断性反转的试剂中的应用。4.一种诊断或辅助诊断性反转的试剂，其特征在于，所述试剂包括权利要求2所述的引物对。5.权利要求1所述的致病基因作为靶标基因或权利要求4所述的试剂在制备诊断性反转的试剂盒中的应用。6.一种诊断或辅助诊断性反转的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求4所述的试剂和测序引物对。7.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，王维，薛斌，李婵艺，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：