一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法，涉及硝基呋喃代谢物的检测技术领域，所述的检测方法步骤如下：S101.取蜂蜜空白基质，加入硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液和硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液，进行前处理，制得硝基呋喃代谢物工作曲线标液，进行液相色谱串联质谱分析，绘制蜂蜜中代谢物的标准曲线，得到线性方程、相关系数和线性范围；S102.取待测蜂蜜样品，在其中加入硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液，进行前处理，得到前处理后的待测样品；S103.将前处理后的待测样品进行液相色谱串联质谱分析，得到代谢物的峰面积；S104.将步骤S103分析得到的代谢物的峰面积，代入步骤S101得到的标准曲线，得到对应化合物的含量。合物的含量。合物的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法


[0001]本专利技术涉及硝基呋喃代谢物的检测
，具体涉及一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法。

技术介绍

[0002]蜂蜜主要作为营养滋补品、药用和加工蜜饯食品及酿造蜜酒之用，也可以替代食糖作调味品，其在清热、解毒、美容养颜等方面有特别的功效，深受大众喜爱。然而，现有的蜂蜜产品存在抗生素残留问题，蜜蜂在养殖过程中易受到微生物和螨虫的污染而引起病害，蜂农为了预防蜜蜂的各种虫病灾害，往往直接饲喂或者在蜂巢中喷洒抗生素，如硝基呋喃类药物，导致了蜂蜜中硝基呋喃类代谢物的残留，这些药物残留不仅不利于人体的健康,还阻碍了蜂产品的出口。
[0003]硝基呋喃类药物是一类具有5
‑
硝基
‑2‑
呋喃结构的合成类广谱抗菌药物，最常用的硝基呋喃类药物主要有呋喃唑酮(furazolidone)、呋喃它酮(furaltadone)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、呋喃西林(nitrofurazone)4种，该类药物曾在养殖业中被应用于猪、牛、水产品以及蜜蜂中用来预防和治疗由沙门氏菌和埃希氏菌引起的胃肠道疾病。但是后来发现硝基呋喃类药物具有严重的遗传毒性和致畸、致癌性，因此世界各国先后颁布了禁止使用硝基呋喃类药物的相关法令，并规定在动物源性组织中不得检出硝基呋喃类药物。由于硝基呋喃类药物具有抗菌效果好，广谱抗菌，且价格低廉等优点，在畜禽养殖业、水产养殖业以及蜜蜂养殖业的实际生产过程中仍然存在违法使用的情况，给人类健康造成极大危害。
>[0004]硝基呋喃类药物在生物体内代谢迅速，代谢的部分化合物分子与细胞膜蛋白结合成为结合态，形成代谢产物，因此对于硝基呋喃类药物残留的检测方法通常是通过检测其代谢物。呋喃唑酮、呋喃它酮，呋喃妥因、呋喃西林的代谢物分别为3
‑
氨基
‑2‑
恶唑烷酮(3
‑
amino
‑2‑
oxazolidine，AOZ)、5
‑
甲基吗啉
‑3‑
氨基
‑2‑
恶唑烷酮(5
‑
morpholinomethyl
‑3‑
amino
‑2‑
oxazolidone，AMOZ)、1
‑
氨基
‑2‑
内酰胺(1
‑
aminohydantoin，AHD)、氨基脲(semicarbazide，SEM)。检测技术主要有免疫分析法、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱
‑
质谱法(LC
‑
MS)和液相色谱
‑
串联质谱法(LC
‑
MS/MS)。我国发布了关于蜂蜜中硝基呋喃类代谢物检测的国家标准如GB/T 18932.24
‑
2005，该标准采用2
‑
硝基苯甲醛作为衍生试剂，采用液相色谱
‑
串联质谱法上机检测，外标法定量，但是该方法耗时较长(衍生16小时)，且采用外标法定量，会因样品前处理过程及人为误差等原因造成定量不准确，因此，亟需开发一种既能快速检测又能准确定量蜂蜜中硝基呋喃类代谢物的检测方法。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的缺陷，本专利技术提供一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法。本专利技术提供的方法采用超高效液相色谱
‑
串联三重四极杆质谱仪技术用于蜂蜜中硝基呋喃代谢物的检测，前处理简单易操作，检测速度快，检测准确度和灵敏度高、重现性好。
[0006]本专利技术的目的在于保护一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法，步骤如下：
[0007]S101.取蜂蜜空白基质，加入硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液和硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液，进行前处理，制得硝基呋喃代谢物工作曲线标液，进行液相色谱串联质谱分析，绘制蜂蜜中代谢物的标准曲线，得到线性方程、相关系数和线性范围；
[0008]S102.取待测蜂蜜样品，在其中加入硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液，进行前处理，得到前处理后的待测样品；
[0009]S103.将前处理后的待测样品进行液相色谱串联质谱分析，得到代谢物的峰面积；
[0010]S104.将步骤S103分析得到的代谢物的峰面积，代入步骤S101得到的标准曲线，得到对应化合物的含量；
[0011]其中，所述的硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液中包括：AOZ、AMOZ、AHD、SEM；所述的硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液中包括：AOZ
‑
D4、AMOZ
‑
D5、AHD
‑
13
C3、、SEM
‑
HCl
‑
(
13
C,
15
N2)。
[0012]优选地，所述的硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液中AOZ、AMOZ、AHD、SEM的浓度均为100ng/mL；所述的硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液中AOZ
‑
D4、AMOZ
‑
D5、AHD
‑
13
C3、SEM
‑
HCl
‑
(
13
C,
15
N2)的浓度均为100ng/mL。
[0013]优选地，步骤S101中，所述的硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液和硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液的浓度比为1：1。
[0014]优选地，步骤S101和步骤S102中，所述的前处理，具体步骤如下：
[0015]S201.加入5％三氯乙酸溶液，涡旋混匀，加入0.2mol/L的2
‑
氯苯甲醛，第二次涡旋混匀，恒温超声，恒温震荡，静置降温，制得衍生液；
[0016]S202.在衍生液中加入0.1mol/L的磷酸氢二钾溶液，调节pH，再加入乙酸乙酯，涡旋混匀，加入饱合NaCl溶液，第二次涡旋混匀，离心，取上层乙酸乙酯置于离心管中，在氮吹仪上水浴吹干，加入0.1％的甲酸乙腈水溶液溶解，第三次涡旋混匀后，过有机滤膜。
[0017]进一步优选地，步骤S201中，所述的恒温超声为45℃下超声10min，所述的恒温震荡为45℃下避光震荡衍生2h，所述的静置降温为静置降温至20
‑
30℃。
[0018]进一步优选地，步骤S202中，所述的甲酸乙腈水溶液中甲酸、乙腈和水的体积比为0.01：1：9；所述的调节pH为采用采用2mol/L的NaOH溶液调节pH至pH值为7.4
±
0.2；所述的离心为以5000r/min的速率离心5mim；所述的过有机滤膜为过0.22μm有机滤膜。
[0019]进一步优选地，步骤S201和S202中，所述的5％三氯乙酸溶液、0.2mol/L的2
‑
氯苯甲醛、0.1mol/L的磷酸氢二钾溶液、乙酸乙酯、饱合NaCl溶液和0.1％甲酸乙腈水溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法，其特征在于：所述的检测方法步骤如下：S101.取蜂蜜空白基质，加入硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液和硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液，进行前处理，制得硝基呋喃代谢物工作曲线标液，进行液相色谱串联质谱分析，绘制蜂蜜中代谢物的标准曲线，得到线性方程、相关系数和线性范围；S102.取待测蜂蜜样品，在其中加入硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液，进行前处理，得到前处理后的待测样品；S103.将前处理后的待测样品进行液相色谱串联质谱分析，得到代谢物的峰面积；S104.将步骤S103分析得到的代谢物的峰面积，代入步骤S101得到的标准曲线，得到对应化合物的含量；其中，所述的硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液中包括：AOZ、AMOZ、AHD、SEM；所述的硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液中包括：AOZ
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D4、AMOZ
‑
D5、AHD
‑
13
C3、SEM
‑
HCl
‑
(
13
C,
15
N2)。2.根据权利要求1所述的蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法，其特征在于：所述的硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液中AOZ、AMOZ、AHD、SEM的浓度均为100ng/mL；所述的硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液中AOZ
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D4、AMOZ
‑
D5、AHD
‑
13
C3、SEM
‑
HCl
‑
(
13
C,
15
N2)的浓度均为100ng/mL。3.根据权利要求1所述的蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法，其特征在于：步骤S101中，所述的硝基呋喃代谢物外标混合标准溶液和硝基呋喃代谢物内标混合标准溶液的浓度比为1：1。4.根据权利要求1所述的蜂蜜中硝基呋喃代谢物残留量的检测方法，其特征在于：步骤S101和步骤S102中，所述的前处理，具体步骤如下：S201.加入5％三氯乙酸溶液，涡旋混匀，加入0.2mol/L的2
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氯苯甲醛，第二次涡旋混匀，恒温超声，恒温震荡，静置降温，制得衍生产物溶液；S202.在衍生产物溶液中加入0.1mol/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳小艳，黄珊，梁善范，范云燕，周吉，黄艳桃，蒙舒婷，唐琼，李硕，蒙德军，韦燕燕，
申请(专利权)人：南宁市疾病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：