本发明专利技术涉及一种沙眼衣原体检测能力验证物品及其制备方法和实验室应用，所述能力验证物品为CT敏感细胞系培养CT血清型E而得，包括冻干制剂及其复溶液。本发明专利技术模拟临床CT样本，作为胶体金法、乳胶法及核酸检测方法诊断CT临床感染实验方法的能力验证物品，用于临床实验室室间质量评价、室内质量控制及试剂盒性能评价。价。价。
【技术实现步骤摘要】
一种沙眼衣原体检测能力验证物品及其制备方法和实验室应用
[0001]本专利技术属于医学检验领域，特别涉及一种沙眼衣原体检测能力验证物品及其制备方法和实验室应用。
技术介绍
[0002]沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)是一种细胞内寄生的微小微生物，分为小鼠生物型、沙眼生物型和性病淋巴肉芽肿生物型，后两种与人类疾病有关，是常见的性传播疾病感染性微生物，可引起人类泌尿生殖道感染，如男性尿道炎、附睾炎，以及女性宫颈炎、宫内感染等，孕妇生殖道感染CT可导致新生儿肺炎和眼炎。CT生殖道感染是常见性传播疾病，流行率和发病率较高，已经成为全球重要的公共卫生问题之一。有报道称，近年来女性生殖道CT感染报告发病率呈逐年增长趋势，15
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24岁年龄段人群增长迅速。
[0003]目前，临床快速诊断CT感染的常用方法为胶体金法、乳胶法及基于核酸检测的分子诊断技术。现有商品化CT检测能力验证物品多为CT蛋白粗提取物，制备成本高，蛋白浓度及抗原效价均较低，未覆盖高、中、低三种浓度水平；而且，通过蛋白提取方法制备的液体能力验证物品，易发生蛋白质变性，稳定性差，保存期短；采用胶体金法方法检测时，其阳性检测结果的显示时间短，容易褪色；同时，蛋白提取物能力验证物品，不能同时适用于核酸检测诊断技术，而通过质粒和基因扩增技术制备的CT能力验证物品，又仅仅适用于核酸检测诊断技术，不适用于胶体金法或乳胶法。试剂盒配套的能力验证物品质量不高，保存期短，不仅给实验室质量控制带来麻烦，也无法保障检测质量安全，导致临床在筛查CT感染时容易发生漏检、错检，造成误诊。同时，由于现有能力验证物品的质量不高，卫生质量主管部门无法有效组织开展全国性或区域性的CT检测室间质量评价，实验室间检测结果缺乏可比性，造成各医疗机构之间不仅无法实现检验结果互认，甚至可能由于不同医疗机构间的检测结果存在显著差异而带来医患纠纷。
技术实现思路
[0004]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种沙眼衣原体检测能力验证物品及其制备方法和实验室应用，成功制备可有效模拟临床样本的CT能力验证物品，并证实可用于临床实验室的室间质评。
[0005]本专利技术提供了一种沙眼衣原体检测能力验证物品，所述能力验证物品为CT敏感细胞系培养CT血清型E而得，包括冻干制剂及其复溶液。
[0006]所述能力验证物品的冻干制剂为经培养、富集、纯化后灭活的CT菌体，并通过真空冷冻干燥获得；所述能力验证物品的复溶液为含有0.45％氯化钠的PBS溶液，pH范围6.8～7.2。
[0007]所述CT敏感细胞系包括HELA
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299细胞、HaCaT细胞、McCoy细胞、BGMK细胞中的至少一种。
[0008]使用时通过向冻干制剂中加入不同体积的复溶液，调节能力验证物品浓度，对应于临床样本中不同的CT浓度，覆盖高、中、低三种浓度。
[0009]本专利技术还提供了一种沙眼衣原体能力验证物品的制备方法，主要包括如下步骤：
[0010]培养CT敏感细胞系生长于6孔板中，待生长成为单层细胞后倾去细胞培养液，加入含放线菌酮的细胞培养液；然后接种CT血清型E，接种完毕后离心、培养，观察生长的CT包涵体，细胞刷刮下感染细胞，超声波破碎，离心去除细胞碎片，再离心沉淀CT；最后悬浮于PBS中，灭活，分装，冷冻干燥，低温保存备用，得到沙眼衣原体能力验证物品的冻干粉剂；使用前，取出冻干粉剂，平衡至室温后用复溶液溶解。
[0011]本专利技术还提供了一种沙眼衣原体能力验证物品的实验室应用。
[0012]所述应用包括临床实验室室间质评、室内质控及试剂盒性能评价。
[0013]所述应用方法包括胶体金法、乳胶法及基于核酸检测的分子诊断技术实验方法。
[0014]有益效果
[0015](1)本专利技术成功制备可模拟临床样本的CT能力验证物品，基于CT培养、细胞裂解、离心富集、CT灭活、冷冻干燥、复溶等工艺，主要制备过程的方法成熟，成本低廉，技术易于转化；
[0016](2)本专利技术基于CT培养物，易于批量生产，能力验证物品浓度可有效控制，分为高、中、低三个浓度水平，与临床实际样本的相似度高；
[0017](3)本专利技术的制备工艺，有效保护了CT表面抗原结构及核酸成分，不仅适用于胶体金法、乳胶法，而且适用于基于核酸检测分子诊断技术，具有良好的灵敏度和特异性；
[0018](4)本专利技术对CT进行了灭活，降低了运输及实验操作过程中的生物安全风险；本专利技术以pH 6.8～7.2、含有0.45％氯化钠的PBS溶液替代蔗糖磷酸盐缓冲液，作为离心去除CT培养后细胞碎片的缓冲液，同时，也作为能力验证物品成品(干粉制剂)的复溶液；
[0019](5)本专利技术能力验证物品的成品中干粉制剂水溶性好，操作简便，复溶液提供了胶体金法、乳胶法所需最佳pH和离子介质环境，实验结果更可靠、更稳定；
[0020](6)本专利技术能力验证物品的成品为干粉制剂和复溶液，方便保存，有效期长，均一性和稳定性好；本专利技术具有广泛的临床实验室应用价值，不仅适用于临床实验室室间质评，以评价实验室的检验质量，而且，可分装制备为CT能力验证物品试剂盒，用于CT检测试剂的室内质控，评价检测试剂盒的灵敏度和特异性。
附图说明
[0021]图1为实施例1的CT PCR荧光探针法检测结果；
[0022]图2为实施例1的CT胶体金法和乳胶法检测结果；
[0023]图3为实施例2的CT PCR荧光探针法检测结果；
[0024]图4为实施例2的CT胶体金法和乳胶法检测结果。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定
的范围。
[0026]实施例1
[0027]本实施例以HELA
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299细胞株为例：
[0028]1.1细胞株和菌株
[0029]HELA
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299细胞株用于沙眼衣原体培养，购自武汉普诺赛生命科技有限公司。CT血清型E来自美国标准菌种库菌株(American type culture collection，ATCC)，由北纳创联生物科技有限公司代购。
[0030]1.2试剂
[0031]RPMI
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1640培养基(GIBCO)、胎牛血清(GIBCO)、CT核酸检测试剂盒(QIAGEN)、抗CT单克隆抗体(Micor Trak)购于上海释雁生物科技有限公司。CT抗原检测试剂盒(胶体金法)、CT抗原检测试剂盒(乳胶法)和放线菌酮(Sigma)均购于上海凯创生物技术有限公司。
[0032]1.3仪器
[0033]INC 153二氧化碳培养箱(Memmert)；NU
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种沙眼衣原体检测能力验证物品，其特征在于：所述能力验证物品为CT敏感细胞系培养CT血清型E而得，包括冻干制剂及其复溶液。2.根据权利要求1所述的能力验证物品，其特征在于：所述能力验证物品的冻干制剂为经培养、富集、纯化后灭活的CT菌体，并通过真空冷冻干燥获得；所述能力验证物品的复溶液为含有0.45％氯化钠的PBS溶液，pH范围6.8～7.2。3.根据权利要求1所述的能力验证物品，其特征在于：所述CT敏感细胞系包括HELA
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299细胞、HaCaT细胞、McCoy细胞、BGMK细胞中的至少一种。4.根据权利要求1所述的能力验证物品，其特征在于：使用时通过向冻干制剂中加入不同体积的复溶液，调节能力验证物品浓度，对应于临床样本中不同的CT浓度，覆盖高、中、低三种浓度。5.一种沙...
【专利技术属性】
技术研发人员：张敏敏，何智纯，王敬华，陈蓉，王庆忠，徐蓉，刘学杰，
申请(专利权)人：上海市临床检验中心，
类型：发明
国别省市：
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