分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，生物保藏编号为CCTCCNO:C2022310的杂交瘤细胞株1A8，生物保藏编号为CCTCCNO:C2022311的杂交瘤细胞株9C7。杂交瘤细胞株1A8分泌获得的单克隆抗体以及杂交瘤细胞株9C7分泌获得的单克隆抗体所组成的抗PGE2单克隆抗体对；抗PGE2单克隆抗体在检测PGE2中的应用。本发明专利技术能够有效的对PGE2含量进行检测。量进行检测。量进行检测。

【技术实现步骤摘要】
分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术涉及一种杂交瘤细胞株，特别是一种分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]前列腺素(PG)是一类具有生理活性的不饱和脂肪酸，广泛存在于机体各组织及体液中。人体的脑、肺、肾、胃肠、精囊等各组织细胞几乎都可分泌前列腺素，当机体受多种因素刺激时，体内的多种细胞均可合成并迅速释放，作用于临近组织或外周组织来维持内环境的稳态，抵御外界应激对机体的损伤。按照五碳环及五碳环上各种取代基的不同可将前列腺素分为A、B、C、D、E、F、G、H、I等不同类，按侧链数目的不同，又可将其分为1、2、3型。不同类型的前列腺素具有不同的生理作用，可对体内多种生理功能产生影响，并与多种疾病密切相关，如疼痛、炎症、癌症、心血管疾病和神经学疾病等。
[0003]其中，前列腺素E2(PGE2)是人体内最丰富的前列腺素，与多种生理过程有关，对生殖、胃肠、免疫、心血管和神经系统均有影响，参与多种病理过程，如高血压、血脂异常、神经病变、肾病、动脉粥样硬化、糖尿病等，还可诱发炎症，增加疼痛敏感性。
[0004]因此，在相关疾病的发生发展过程中对病人体液及其他生物样品中的PGE2含量水平进行检测，可为后续的疾病诊断和治疗提供重要参考。然而，现有技术无法有效的对PGE2含量进行检测，精度也较低。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，提供一种分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。本专利技术能够有效的对PGE2含量进行检测。
[0006]本专利技术的技术方案：分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，生物保藏编号为CCTCC NO:C2022310的杂交瘤细胞株1A8，生物保藏编号为CCTCC NO:C2022311的杂交瘤细胞株9C7。
[0007]抗PGE2单克隆抗体，包括由前述的杂交瘤细胞株1A8分泌获得的单克隆抗体以及由前述的杂交瘤细胞株9C7分泌获得的单克隆抗体。
[0008]前述的抗PGE2单克隆抗体在检测PGE2中的应用。
[0009]一种针对PGE2的夹心ELISA检测方法，所述方法采用前述的抗PGE2单克隆抗体进行。
[0010]前述的一种针对PGE2的夹心ELISA检测方法中，以杂交瘤细胞株1A8分泌获得的单克隆抗体作为捕获抗体，以杂交瘤细胞株9C7分泌获得的单克隆抗体作为检测抗体，建立检测PGE2的双抗体夹心ELISA方法。
[0011]本专利技术提供的杂交瘤细胞株1A8和杂交瘤细胞株9C7，已依次于2022年10月26日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武汉大学。保藏编号依次为CCTCC NO:C2022310和CCTCC NO:C2022311。
[0012]与现有技术相比，本专利技术通过杂交瘤技术，制备了杂交瘤细胞株1A8和9C7，分泌抗PGE2特异性单克隆抗体。两株单克隆抗体以PGE2特异性抗体1A8为捕获抗体，9C7为检测抗体，进行配对和检测PGE2，成功建立了检测PGE2的双抗体夹心ELISA方法。
附图说明
[0013]图1是本专利技术中利用单克隆抗体检测PGE2的标准曲线图。
具体实施方式
[0014]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不作为对本专利技术限制的依据。
[0015]实施例1。分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，生物保藏编号为CCTCC NO:C2022310的杂交瘤细胞株1A8，生物保藏编号为CCTCC NO:C2022311的杂交瘤细胞株9C7。
[0016]抗PGE2单克隆抗体，其由前述的杂交瘤细胞株1A8分泌获得的单克隆抗体以及由前述的杂交瘤细胞株9C7分泌获得的单克隆抗体。
[0017]抗PGE2单克隆抗体对在检测PGE2中的应用。
[0018]一种针对PGE2的夹心ELISA检测方法，所述方法采用权利要求2所述的抗PGE2单克隆抗体进行。
[0019]以杂交瘤细胞株1A8分泌获得的单克隆抗体作为捕获抗体，以杂交瘤细胞株9C7分泌获得的单克隆抗体作为检测抗体，建立检测PGE2的双抗体夹心ELISA方法。
[0020]杂交瘤细胞株的制备方法，其由PGE2偶联载体蛋白为免疫原免疫小鼠后，小鼠脾脏B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合后培养、筛选得到。筛选所用包被原为PGE2偶联另一种载体蛋白，其中，所述载体蛋白包括但不限于钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、甲状腺蛋白、人血清白蛋白等。
[0021]建立分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞库的方法，采用PGE2偶联KLH作为免疫原，PGE2偶联BSA作为包被原，弗氏完全佐剂及弗氏不完全佐剂作为免疫佐剂，对BALB/c小鼠进行至少4次免疫，并在细胞融合前4天进行一次冲击免疫。
[0022]进一步地，取免疫后的小鼠脾细胞与对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞进行以1:1
‑
5:1的比例充分混匀后，使用PEG进行细胞融合；
[0023]进一步地，分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞库的筛选和克隆采用间接ELISA法和有限稀释法进行。
[0024]实施例2。
[0025]以下实施例2用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例2中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
[0026]NHS为N
‑
羟基琥珀酰亚胺的缩写。EDC为1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐的缩写。DMF为N,N
‑
二甲基甲酰胺的缩写。
[0027]单克隆抗体杂交瘤细胞库的建立
[0028]1.PGE2抗原的制备
[0029]由PGE2与载体蛋白偶联后获得，所述免疫原载体蛋白主要采用KLH，所述包被原载体蛋白主要采用BSA，所用偶联方法为活泼酯法(活化酯法)。
[0030](1)PGE2包被原的制备
[0031]将32mg PGE2粉末溶于500μL DMF中，加入15mg NHS和30mg EDC，室温下搅拌过夜，得到溶液I。将60mg BSA加入10mL PBS缓冲液中，充分溶解，即为溶液II。将溶液I缓慢滴加至溶液II中至溶液出现浑浊，缓慢4℃搅拌24h后装入透析袋，在生理盐水中4℃透析48h(缓冲液为PBS，共透析三次)，得到PGE2包被原溶液，
‑
20℃保存。
[0032](2)PGE2免疫原的制备
[0033]用KLH代替BSA，其余同步骤1。
[0034]2.小鼠免疫
[0035]使用前述制备的免疫原及包被原，首次免疫使用完全佐剂，之后的加强免疫均使用弗氏不完全佐剂。首次免疫时抗原使用剂量为100μg/只，加强免疫时抗原使用剂量为50μg/只，佐剂与抗原的体积比为1:1。乳化完成后进行小鼠颈背部皮下多点注射，每3...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分泌抗PGE2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，生物保藏编号为CCTCC NO:C2022310的杂交瘤细胞株1A8，生物保藏编号为CCTCC NO:C2022311的杂交瘤细胞株9C7。2.抗PGE2单克隆抗体，其特征在于，包括由权利要求1所述的杂交瘤细胞株1A8分泌获得的单克隆抗体以及由权利要求1所述的杂交瘤细胞株9C7分泌获得的单克隆抗体。3.权利要求2所述的抗PGE2单...

【专利技术属性】
技术研发人员：栾会芹，吴赛男，郭欢，董宜君，栾呈博，李晓娟，刘红梅，
申请(专利权)人：国家康复辅具研究中心，
类型：发明
国别省市：