一种与芹菜叶柄白色性状紧密连锁的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与芹菜叶柄白色性状紧密连锁的分子标记及其应用。本发明专利技术公开的与芹菜叶柄白色性状紧密连锁的分子标记为SEQ ID No.3所示的DNA片段和SEQ ID No.4所示的DNA片段。实验表明，本发明专利技术的芹菜叶柄颜色分子标记可以鉴定芹菜叶柄颜色，具有很高的准确率，本发明专利技术的芹菜叶柄颜色分子标记可以用于芹菜育种，具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种与芹菜叶柄白色性状紧密连锁的分子标记及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
中，一种与芹菜叶柄白色性状紧密连锁的分子标记及其应用。

技术介绍

[0002]芹菜(Apium graveolens L.)别名旱芹、药芹等，是伞形科芹属二年生蔬菜作物，染色体数为2n＝2x＝22，四季均可生产，在中国有悠久的栽培历史，广泛分布于全国各地。目前我国生产应用的芹菜品种主要有本芹、西芹，本芹与西芹的杂交改良型以及少量的根芹。近年来，优质、高产、抗病、专用型新品种芹菜的推广速度已逐步加快，一些地方性特色品种在市场中的占有量逐渐增加，而在各地大面积推广的改良型实芹类品种的种植面积却逐渐减少。
[0003]近十年来，我国芹菜种植面积相对稳定，保持在55万hm2左右，其中山东、河南地区种植面积最大，分别达到7.1万hm2和5.5万hm2。随着我国各个地区栽培技术、设施水平的提高和市场消费需求的变化，芹菜种植方式由最初的露地栽培演变为塑料拱棚栽培，现已发展为日光温室栽培，其生产方式多采用播种育苗之后再定植的形式。目前，在我国现有的芹菜品种中，芹菜的叶柄颜色可分为紫色、黄色、浅绿、绿色和白色，从分布来看，白色叶柄芹菜主要分布在云南、四川、贵州、广西等地，其特点是植株矮小，叶柄纤细，多数中空，纤维较多，药香味强。
[0004]叶柄是芹菜的主要食用器官，叶柄颜色会影响芹菜的品质，但是到目前为止关于芹菜叶柄颜色控制基因的报道非常少，申请人前期通过以白色叶柄芹菜和绿色叶柄芹菜为亲本构建F2分离群体，发现白色叶柄对绿色叶柄为显性且受一个单基因控制，开发了一个和白色叶柄连锁的SRAP标记
‑‑
E67M59，但该标记为一个显性标记，无法区分杂合和显性纯合白色单株，且连锁距离较远。因此开发和白色叶柄连锁距离更为紧密的共显性分子标记不仅能够提高芹菜的育种效率，同时也能为芹菜叶柄性状的改良提供一定的参考依据。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是如何检测芹菜叶柄颜色。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了检测芹菜叶柄颜色分子标记的物质在检测或辅助检测芹菜叶柄颜色性状中的应用，所述芹菜叶柄颜色分子标记为SEQ ID No.3所示的DNA片段和SEQ ID No.4所示的DNA片段。
[0007]上述应用中，所述检测芹菜叶柄颜色分子标记的物质可为由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对。
[0008]本专利技术还提供了检测芹菜叶柄颜色性状的方法，所述方法包括：以待测芹菜的基因组DNA为模板，利用由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对进行PCR扩增，所得PCR产物序列为SEQ ID No.3的纯合芹菜的叶柄颜色为或候选绿色，所得PCR产物序列为SEQ ID No.4的纯合芹菜的叶柄颜色为或候选为白色，所得PCR产物序
列为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的杂合芹菜的叶柄颜色为或候选为白色。
[0009]本专利技术还提供了检测芹菜叶柄颜色性状的方法，所述方法包括：以待测芹菜的基因组DNA为模板，利用由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对进行PCR扩增，所得PCR产物大小为163bp的纯合芹菜的叶柄颜色为或候选绿色，所得PCR产物大小为159bp的纯合芹菜的叶柄颜色为或候选白色，所得PCR产物大小为163bp和159bp的杂合芹菜的叶柄颜色为或候选白色。
[0010]本专利技术还提供了芹菜育种方法，所述方法包括：以待测芹菜的基因组DNA为模板，利用由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对进行PCR扩增，选择PCR产物含有SEQ ID No.4或PCR产物含有SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的待测芹菜作为亲本完成育种。
[0011]上文中，利用由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对进行PCR扩增的反应体系可为：0.5μL浓度为10μmo1/L的SEQ ID No.1所示的单链DNA；0.5μL浓度为10μmo1/L的SEQ ID No.2所示的单链DNA；2μL基因组DNA；10μL 2
×
Es Taq MasterMix(Dye)；ddH2O将总体积补齐至20μl。
[0012]利用由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对进行PCR扩增的反应条件可为：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5min。
[0013]本专利技术还提供了所述检测芹菜叶柄颜色分子标记的物质在制备检测芹菜叶柄颜色性状产品中的应用。
[0014]本专利技术还提供了所述芹菜叶柄颜色分子标记在检测或辅助检测芹菜叶柄颜色性状中的应用。
[0015]本专利技术还提供了所述芹菜叶柄颜色分子标记在芹菜育种中的应用。
[0016]本专利技术的实验表明，本专利技术的芹菜叶柄颜色分子标记可以鉴定芹菜叶柄颜色：利用SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对进行PCR扩增，所得PCR产物含有SEQ ID No.4所示DNA片段、且不含SEQ ID No.3所示DNA片段的芹菜叶柄为白色，所得PCR产物既含有SEQ ID No.4所示DNA片段、也含有SEQ ID No.3所示DNA片段的芹菜叶柄为白色，所得PCR产物含有SEQ ID No.3所示DNA片段、且不含SEQ ID No.4所示DNA片段的芹菜叶柄为绿色。本专利技术的芹菜叶柄颜色分子标记鉴定芹菜叶柄颜色具有很高的准确率，具有很好的应用前景。
[0017]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
附图说明
[0018]图1为W121X引物在白色叶柄亲本、绿色叶柄亲本和二者杂交F1代扩增胶图。注：A：上带，绿色叶柄芹菜亲本CE82L；B：下带，白色叶柄芹菜亲本CE72W，H：杂合，白色叶柄亲本和绿色叶柄亲本杂交F1代。
[0019]图2为W121X与芹菜白色叶柄基因WH的遗传距离(0.4cM)。
[0020]图3为44份已知芹菜叶柄颜色材料对W121X的验证。注：A：上带，绿色叶柄；B：下带，
白色叶柄，H：杂合，白色叶柄。
具体实施方式
[0021]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测芹菜叶柄颜色分子标记的物质在检测或辅助检测芹菜叶柄颜色性状中的应用，所述芹菜叶柄颜色分子标记为SEQ ID No.3所示的DNA片段和SEQ ID No.4所示的DNA片段。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测芹菜叶柄颜色分子标记的物质为由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对。3.检测芹菜叶柄颜色性状的方法，包括：以待测芹菜的基因组DNA为模板，利用由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成的引物对进行PCR扩增，所得PCR产物序列为SEQ ID No.3的纯合芹菜的叶柄颜色为或候选绿色，所得PCR产物序列为SEQ ID No.4的纯合芹菜的叶柄颜色为或候选为白色，所得PCR产物序列为SEQ ID No.3和SEQ ID No.4的杂合芹菜的叶柄颜色为或候选为白色。4.检测芹菜叶柄颜色性状的方法，包括：以待测芹菜的基因组DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：程青，沈火林，何玉娇，孙亮，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：