一种预期可用于治疗或预防包括阿尔茨海默病在内的Tau蛋白病的多核苷酸，所述多核苷酸包含以下碱基序列：(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏因子的融合蛋白的碱基序列，和(b)编码指导RNA的碱基序列，所述指导RNA靶向人类MAPT基因的表达调控区中以SEQ ID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的区域中长度为18至24个核苷酸的连续区域。域中长度为18至24个核苷酸的连续区域。域中长度为18至24个核苷酸的连续区域。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过靶向MAPT基因治疗阿尔茨海默病的方法
[0001]本专利技术涉及通过靶向人类微管相关蛋白tau(MAPT)基因等治疗阿尔茨海默病的方法。更具体地，本专利技术涉及通过使用靶向人类MAPT基因的特定序列的指导RNA和转录抑制剂与CRISPR效应蛋白的融合蛋白等来抑制人类MAPT基因的表达从而治疗或预防阿尔茨海默病的方法和药剂。
技术介绍
[0002]Tau蛋白是一种主要表达于神经系统中的微管结合蛋白。它促进微管蛋白的聚合，稳定微管，并有助于神经轴突的构建和维持。Tau蛋白是位于人类17号染色体上的一种名为MAPT(微管相关蛋白tau)的单一基因的产物，并且通过选择性剪接在人脑中表达六种同工型。已知所有这些同工型在过度磷酸化时都会失去与微管的结合能力并自聚集。Tau蛋白的自组装参与了例如阿尔茨海默病(下文称为AD)和染色体连锁伴帕金森病的额颞叶痴呆(下文称为FTDP
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17)的病理学。磷酸化tau的聚集体在大脑的神经细胞中产生，并导致许多神经退行性疾病。
[0003]因此，伴随tau的聚集和细胞内积累并被认为在疾病发作中涉及tau聚集过程的神经退行性疾病被称为Tau蛋白病。
[0004]已经提出了多种治疗AD的治疗策略(非专利文献1)，并且基因治疗方法作为策略之一已经引起关注。
[0005]作为靶向MAPT的基因疗法，例如WO2018/102665A1公开了一种针对MAPT基因的遗传调节剂的专利技术，该遗传调节剂包含与MAPT基因中至少12个核苷酸的靶位点结合的DNA结合结构域；和转录调控结构域或核酸酶结构域。
[0006]另一方面，近年来开发了一种使用具有失活核酸酶活性的Cas9(dCas9)和转录激活结构域或转录阻遏结构域的组合的系统，其中通过使用指导RNA将蛋白质靶向基因而不切割所述基因的DNA序列，来控制靶基因的表达(专利文献1，其通过引用整体并入本文)。预期其临床应用(非专利文献2，其通过引用整体并入本文)。然而，存在一个问题，即编码dCas9、指导RNA和共转录阻遏因子的复合物的序列超过了最常见的病毒载体(例如AAV)的容量，这些最常见的病毒载体代表了最有希望的体内基因递送方法(非专利文献3，其通过引用整体并入本文)。
[0007]引文列表
[0008]专利文献
[0009][PTL 1]WO2013/176772
[0010]非专利文献
[0011][NPL 1]Ballard C.等人,Lancet 2011；377:1019
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31
[0012][NPL 2]Dominguez A.等人,Nat Rev Mol Cell Biol.2016年1月；17(1):5
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15
[0013][NPL 3]Liao H.等人,Cell.2017年12月14日；171(7):1495
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技术实现思路
[0014]技术问题
[0015]因此，本专利技术的一个目的是提供针对Tau蛋白病(特别是AD)的新颖治疗方法。
[0016]这个目的和其他目的(其在下面的详细描述中将变得显而易见)已经通过本专利技术人的发现得以实现，即通过使用靶向人类MAPT基因的特定序列的指导RNA和转录阻遏因子与核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白的融合蛋白可以强烈抑制人类MAPT基因(基因ID：4137)的表达。
[0017]技术解决方案
[0018]本专利技术人已发现，使用紧凑型核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白和紧凑型转录阻遏因子，通过携带编码融合蛋白的碱基序列和编码指导RNA的碱基序列的单一AAV载体，可以强烈抑制人类MAPT基因的表达。
[0019]因此，本专利技术提供：
[0020][1]一种多核苷酸，所述多核苷酸包含以下碱基序列：
[0021](a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏因子的融合蛋白的碱基序列，和
[0022](b)编码指导RNA的碱基序列，所述指导RNA靶向人类MAPT基因的表达调控区中以SEQ ID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的区域中长度为18至24个核苷酸的连续区域。
[0023][2]如[1]所述的多核苷酸，其中所述编码指导RNA的碱基序列包含以SEQ ID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的碱基序列，或其中1至3个碱基被缺失、替换、插入和/或添加的以SEQ ID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的碱基序列。
[0024][3]如[1]或[2]所述的多核苷酸，所述多核苷酸包含至少两个不同的编码指导RNA的碱基序列。
[0025][4]如[1]至[3]中任一项所述的多核苷酸，其中所述转录阻遏因子选自KRAB、MeCP2、SIN3A、HDT1、MBD2B、NIPP1和HP1A。
[0026][5]如[4]所述的多核苷酸，其中所述转录阻遏因子是KRAB。
[0027][6]如[1]至[5]中任一项所述的多核苷酸，其中所述核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白是dCas9。
[0028][7]如[6]所述的多核苷酸，其中所述dCas9来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
[0029][8]如[1]至[7]中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸还包含用于所述编码指导RNA的碱基序列的启动子序列和/或用于所述编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏因子的融合蛋白的碱基序列的启动子序列。
[0030][9]如[8]所述的多核苷酸，其中用于所述编码指导RNA的碱基序列的启动子序列选自U6启动子、SNR6启动子、SNR52启动子、SCR1启动子、RPR1启动子、U3启动子和H1启动子。
[0031][10]如[9]所述的多核苷酸，其中用于所述编码指导RNA的碱基序列的启动子序列是U6启动子。
[0032][11]如[8]至[10]中任一项所述的多核苷酸，其中用于所述编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏因子的融合蛋白的碱基序列的启动子序列是广泛性启动子或神经元特异性启动子。
[0033][12]如[11]所述的多核苷酸，其中所述广泛性启动子选自EFS启动子、CMV启动子和CAG启动子。
[0034][13]一种载体，所述载体包含[1]至[12]中任一项所述的多核苷酸。
[0035][14]如[13]所述的载体，其中所述载体是质粒载体或病毒载体。
[0036][15]如[14]所述的载体，其中所述病毒载体选自腺相关病毒(AAV)载体、腺病毒载体和慢病毒载体。
[0037][16]如[15]所述的载体，其中所述AAV载体选自AAV1、AAV2、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、Anc80、AAV
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MTP、AAV
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MTP、AAV
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B1、AAVM41本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含以下碱基序列：(a)编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏因子的融合蛋白的碱基序列，和(b)编码指导RNA的碱基序列，所述指导RNA靶向人类MAPT基因的表达调控区中以SEQ ID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的区域中长度为18至24个核苷酸的连续区域。2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述编码指导RNA的碱基序列包含以SEQ ID NO:54、55、56、57、68、153或97所示的碱基序列，或其中1至3个碱基被缺失、替换、插入和/或添加的以SEQ IDNO:54、55、56、57、68、153或97所示的碱基序列。3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，所述多核苷酸包含至少两个不同的编码指导RNA的碱基序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的多核苷酸，其中所述转录阻遏因子选自KRAB、MeCP2、SIN3A、HDT1、MBD2B、NIPP1和HP1A。5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述转录阻遏因子是KRAB。6.根据权利要求1至5中任一项所述的多核苷酸，其中所述核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白是dCas9。7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述dCas9来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。8.根据权利要求1至7中任一项所述的多核苷酸，所述多核苷酸还包含用于所述编码指导RNA的碱基序列的启动子序列和/或用于所述编码核酸酶缺陷型CRISPR效应蛋白与转录阻遏因子的融合蛋白的碱基序列的启动子序列。9.根据权利要求8所述的多核苷酸，其中用于所述编码指导RNA的碱基序列的启动子序列选自U6启动子、SNR6启动子、SNR...
【专利技术属性】
技术研发人员：伊恩，
申请(专利权)人：摩大力斯医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：
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