用于治疗蛋白的中和抗体测定制造技术

本发明专利技术总体上涉及测试针对治疗蛋白的中和抗体(NAb)的存在的方法。具体地，本发明专利技术涉及针对干扰性竞争性药物的减轻剂在用于检测针对治疗蛋白的中和抗体的配体结合测定或基于细胞的测定中的用途。细胞的测定中的用途。细胞的测定中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗蛋白的中和抗体测定
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年5月1日提交的美国临时专利申请第63/018,821号、于2020年6月19日提交的美国临时专利申请第63/041,768号以及于2021年4月8日提交的美国临时专利申请第63/172,488号的优先权和权益，所述美国临时专利申请各自通过引用并入本文。


[0003]本申请涉及用于进行用于检测针对治疗蛋白的中和抗体的诊断测定的测定方法、模块和试剂盒。

技术介绍

[0004]向患者施用生物治疗剂可能在患者体内诱导不期望的免疫原性应答，所述免疫原性应答可能导致抗药物抗体(ADA)的产生(Mire
‑
Sluis,A.R.等人,《免疫学方法杂志(J Immunol Methods)》,289(1):1
‑
16(2004))。中和抗体(NAb)是ADA的子集，其抑制药物与其靶标的结合，从而使得药物在生物学上无活性。根据定义，NAb中和药物的作用，从而潜在地降低临床活性。另外，在药物是内源性蛋白质的生物模拟物的情况下，NAb可以与药物的内源性类似物交叉反应，这可能会对药物安全性产生严重后果(Finco,D.等人,《药学和生物医学分析杂志(J Pharm Biomed Anal)》,54(2):351
‑
358(2011)；Hu,J.等人,《免疫学方法杂志》,419:1
‑
8(2015))。
[0005]免疫原性应答的检测涉及分级方法，在所述分级方法中，首先通常使用桥接免疫测定测试样品中的ADA的存在(Mire
‑
Sluis,A.R.等人,《免疫学方法杂志》,289(1):1
‑
16(2004))。ADA应答的进一步表征可以包含用于确定ADA的相对量的滴度测定，以及确定抗体应答是否是中和的测定(Wu,B.等人,《美国药学科学家协会杂志(AAPS Journal)》18(6):1335
‑
1350(2016)；Shankar,G等人,《药学和生物医学分析杂志》48(5):1267
‑
1281(2008)；Gupta,S.等人,《药学和生物医学分析杂志》,55(5):878
‑
888(2011))。
[0006]NAb测定可以经受干扰，所述干扰阻止针对治疗蛋白的中和的准确定量。例如，如果内源性药物靶标是可溶的，则其可以存在于受试者样品中并且与治疗剂竞争性结合，从而产生假阳性NAb信号。在受试者样品中还可能存在来自先前施用治疗剂的残留药物，所述残留药物可以与NAb竞争性结合并且产生假阴性NAb信号。已经开发了不同的技术来处理这些干扰源，以获得对NAb的准确定量(Xu,W.等人,《免疫学方法杂志》,462:34
‑
41(2018)；Xu,W.等人,《免疫学方法杂志》,416:94
‑
104(2015)；Xiang,Y.等人,《美国药学科学家协会杂志》,21(1):4(2019)；Sloan,J.H.等人,《生物分析(Bioanalysis)》,8(20):2157
‑
2168(2016))。
[0007]尚未被表征的潜在干扰的另外的来源是不同于所测试的治疗蛋白的残留药物的干扰，所述残留药物和与治疗剂相同的药物靶标竞争性结合，这将产生假阳性NAb信号。因此，到目前为止，还没有开发出减轻这种类型的干扰的策略。
[0008]因此，应当理解，需要用于在用于检测针对治疗蛋白的中和抗体的配体结合测定
或基于细胞的测定中识别和减轻来自竞争性药物的干扰的方法。

技术实现思路

[0009]本公开提供了一种用于检测样品中针对治疗蛋白的中和剂的方法。在一些示例性实施例中，所述方法包括：(a)使具有所述中和剂和竞争性药物的所述样品与(i)所述治疗蛋白、(ii)所述治疗蛋白的靶标以及(iii)减轻剂接触；(b)测量所述治疗蛋白与所述靶标的结合；以及(c)将(b)的结果与对照测量进行比较以检测所述中和剂。
[0010]在一方面，所述对照测量是通过在不存在中和剂的情况下测量所述治疗蛋白与所述靶标的结合来获得的。在另一方面，所述中和剂是中和抗体。
[0011]在一方面，所述治疗蛋白是抗体、可溶性受体、抗体
‑
药物缀合物或酶。在具体方面，所述治疗蛋白是单克隆抗体。在又另一具体方面，所述单克隆抗体是抗PD
‑
1抗体、抗TNF抗体、抗PD
‑
L1抗体、抗EGFR抗体、抗CD20抗体、抗CD38抗体或抗LAG3抗体。
[0012]在一方面，所述治疗蛋白是双特异性抗体。在具体方面，所述双特异性抗体是CD20xCD3抗体、BCMAxCD3抗体、EGFRxCD28抗体或CD38xCD28抗体。
[0013]在一方面，所述治疗蛋白固定到固相载体上。在另一方面，所述治疗蛋白经过标记以便进行检测。在具体方面，所述标记可通过荧光、化学发光、电化学发光、放射性或亲和纯化来检测。在又另一具体方面，所述标记包括钌。
[0014]在一方面，所述靶标是抗原、受体、配体或酶底物。在另一方面，所述靶标是细胞表面蛋白。在又另一方面，所述靶标是重组蛋白。在又另一方面，所述靶标由细胞表达。在具体方面，所述细胞是HEK293细胞、MOLP
‑
8细胞、Jurkat细胞或其经修饰形式。
[0015]在一方面，所述靶标固定到固相载体上。在另一方面，所述靶标经过标记以便进行检测。在具体方面，所述标记可通过荧光、化学发光、电化学发光、放射性或亲和纯化来检测。在另一方面，所述靶标是酶底物。在又另一方面，所述靶标是CD20、CD3、BCMA、PD
‑
1、EGFR、CD28、CD38、TNF、PD
‑
L1或LAG3。在又另一方面，所述方法另外包括第二靶标。
[0016]在一方面，所述竞争性药物是单克隆抗体。在具体方面，所述竞争性药物是利妥昔单抗(rituximab)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、奥妥珠单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、托西莫单抗(tositumomab)、乌妥昔单抗(ublituximab)、西妥昔单抗(cetuximab)、达雷木单抗(daratumumab)或阿达木单抗(adalimumab)在另一方面，所述竞争性药物是双特异性抗体。
[0017]在一方面，所述减轻剂是单克隆抗体。在另一方面，所述方法包括使用两种、三种、四种或更多种减轻剂。
[0018]在一方面，所述治疗蛋白与所述靶标的结合是通过测量以下来测量的：受体磷酸化、信号转导途径中下游蛋白质的磷酸化、细胞因子释放、细胞增殖、细胞死亡或次级蛋白的产生。在另一方面，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于检测样品中针对治疗蛋白的中和剂的方法，所述方法包括：(a)使具有所述中和剂和竞争性药物的所述样品与所述治疗蛋白、所述治疗蛋白的靶标和减轻剂接触；(b)测量所述治疗蛋白与所述靶标的结合；以及(c)将(b)的结果与对照测量进行比较以检测所述中和剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述对照测量包含在不存在中和剂的情况下测量所述治疗蛋白与所述靶标的结合。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述中和剂是中和抗体。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗蛋白选自由以下组成的组：抗体、可溶性受体、抗体
‑
药物缀合物和酶。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗蛋白是单克隆抗体。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述单克隆抗体选自由以下组成的组：抗PD
‑
1抗体、抗TNF抗体、抗PD
‑
L1抗体、抗EGFR抗体、抗CD20抗体、抗CD38抗体和抗LAG3抗体。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗蛋白是双特异性抗体。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述双特异性抗体选自由以下组成的组：CD20xCD3抗体、BCMAxCD3抗体、EGFRxCD28抗体和CD38xCD28抗体。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗蛋白固定到固相载体上。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述治疗蛋白经过标记以便进行检测。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述标记能够通过荧光、化学发光、电化学发光、放射性或亲和纯化来检测。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述标记包括钌。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标是抗原、受体、配体或酶底物。14.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标是细胞表面蛋白。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标是重组蛋白。16.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标由细胞表达。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述细胞是HEK293细胞、MOLP
‑
8细胞、Jurkat细胞或其经修饰形式。18.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标固定到固相载体上。19.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标经过标记以便进行检测。20.根据权利要求19所述的方法，其中所述标记能够通过荧光、化学发光、电化学发光、放射性或亲和纯化来检测。21.根据权利要求1所述的方法，其中所述靶标是酶底物。22.根据权利要求1所述的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：