【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】环状RNA组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2019年5月22日提交的美国临时专利申请第62/851,548号；2019年6月4日提交的美国临时专利申请第62/857,121号；2019年6月5日提交的国际专利申请第PCT/US2019/035531号；2019年12月4日提交的美国临时专利申请第62/943,796号；2019年12月4日提交的美国临时专利申请第62/943,779号；以及2020年2月10日提交的美国临时专利申请第62/972,194号的权益和优先权，所述专利的公开内容出于所有目的特此以引用的方式整体并入。
技术介绍
[0003]常规基因疗法涉及使用DNA来将所需遗传信息插入宿主细胞中。引入细胞中的DNA通常在一定程度上整合至一个或多个转染细胞的基因组中，从而允许所引入的遗传物质在宿主中的长效作用。虽然这类持续作用可具有实质益处，但是外源性DNA整合至宿主基因组中也可具有许多有害效应。举例来说，可能所引入的DNA将插入完整基因中，导致阻碍或甚至完全消除内源性基因的功能的突变。因此，使用DNA的基因疗法可导致损害所治疗宿主的重要遗传功能，如例如，消除或有害减少必需酶的产生或干扰对于细胞生长的调控起关键作用的基因，从而导致未经调控的或癌性的细胞增殖。另外，使用常规基于DNA的基因疗法，为了有效表达所需基因产物，必需包括强启动子序列，这也可导致细胞中的正常基因表达的调控的不良变化。也可能基于DNA的遗传物质将导致诱导不需要的抗DNA抗体，其进而可触发可能致命的免疫应答。使用病毒载...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种药物组合物，所述药物组合物包含：a.环状RNA多核苷酸，所述环状RNA多核苷酸按以下顺序包含3'I组内含子片段、内部核糖体进入位点(IRES)、编码嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)复合物蛋白质的表达序列和5'I组内含子片段；和b.转移媒介物，所述转移媒介物包含(i)可电离脂质、(ii)结构脂质和(iii)PEG修饰的脂质中的至少一者，其中所述转移媒介物能够将所述环状RNA多核苷酸递送至人受试者中存在的人免疫细胞，使得所述CAR在所述人免疫细胞中翻译并在所述人免疫细胞的表面上表达。2.如权利要求1所述的药物组合物，其被配制用于向有需要的人受试者静脉内施用。3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中所述3'I组内含子片段和所述5'I组内含子片段是鱼腥藻属I组内含子片段。4.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述3'内含子片段和所述5'内含子片段由完整内含子中的L9a
‑
5置换位点限定。5.如权利要求3所述的药物组合物，其中所述3'内含子片段和所述5'内含子片段由完整内含子中的L8
‑
2置换位点限定。6.如权利要求1
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5中任一项所述的药物组合物，其中所述IRES来自桃拉综合征病毒、锥蝽病毒、蒂勒脑脊髓炎病毒、猿猴病毒40、红火蚁病毒1、禾谷缢管蚜病毒、网状内皮增生病病毒、人脊髓灰质炎病毒1、斯氏珀蝽肠病毒、克什米尔蜜蜂病毒、人鼻病毒2、琉璃叶蝉病毒
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1、人免疫缺陷病毒1型、琉璃叶蝉病毒
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1、Himetobi P病毒、丙型肝炎病毒、甲型肝炎病毒、GB型肝炎病毒、口蹄疫病毒、人肠道病毒71、马鼻炎病毒、茶尺蠖微小RNA病毒样病毒、脑心肌炎病毒、果蝇C病毒、人柯萨奇病毒B3、十字花科植物烟草花叶病毒、蟋蟀麻痹病毒、牛病毒性腹泻病毒1、黑蜂王台病毒、蚜虫致死性麻痹病毒、禽脑脊髓炎病毒、急性蜜蜂麻痹病毒、木槿褪绿环斑病毒、猪瘟病毒、人FGF2、人SFTPA1、人AML1/RUNX1、果蝇触角足、人AQP4、人AT1R、人BAG
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1、人BCL2、人BiP、人c
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IAPl、人c
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myc、人eIF4G、小鼠NDST4L、人LEF1、小鼠HIF1α、人n.myc、小鼠Gtx、人p27kipl、人PDGF2/c
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sis、人p53、人Pim
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1、小鼠Rbm3、果蝇reaper、犬Scamper、果蝇Ubx、人UNR、小鼠UtrA、人VEGF
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A、人XIAP、果蝇无毛、酿酒酵母TFIID、酿酒酵母YAP1、烟草蚀纹病毒、芜菁皱缩病毒、EMCV
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A、EMCV
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B、EMCV
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Bf、EMCV
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Cf、EMCV pEC9、小双节RNA病毒、HCV QC64、人寇沙病毒E/D、人寇沙病毒F、人寇沙病毒JMY、鼻病毒NAT001、HRV14、HRV89、HRVC
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02、HRV
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A21、萨力病毒A SH1、萨力病毒FHB、萨力病毒NG
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J1、人副肠孤病毒1、Crohivirus B、Yc
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3、Rosavirus M
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7、Shanbavirus A、Pasivirus A、Pasivirus A 2、艾柯病毒E14、人副肠孤病毒5、爱知病毒、甲型肝炎病毒HA16、Phopivirus、CVA10、肠道病毒C、肠道病毒D、肠道病毒J、人趋肝性病毒2、GBV
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C GT110、GBV
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C K1737、GBV
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C Iowa、趋肝性病毒A 1220、Pasivirus A 3、萨佩洛病毒、Rosavirus B、Bakunsa病毒、震颤病毒A、猪Pasivirus 1、PLV
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CHN、Pasivirus A、Sicinivirus、肝炎病毒K、肝炎病毒A、BVDV1、边界病病毒、BVDV2、CSFV
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PK15C、SF573双顺反子病毒、湖北微小RNA病毒样病毒、CRPV、萨力病毒A BN5、萨力病毒A BN2、萨力病毒A 02394、萨力病毒A GUT、萨力病毒A CH、萨力病毒ASZ1、萨力病毒FHB、CVB3、CVB1、艾柯病毒7、CVB5、EVA71、CVA3、CVA12、EV24或eIF4G的适体。7.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述IRES包括CVB3IRES或其片段或变体，或者
其中所述IRES包含根据SEQ ID NO:65的序列。8.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述IRES包括萨力病毒SZ1 IRES或其片段或变体。9.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述IRES包含根据SEQ ID NO:63的序列。10.如权利要求1
‑
9中任一项所述的药物组合物，其包含位于所述3'I组内含子片段与所述IRES之间的第一内部间隔区，以及位于所述表达序列与所述5'I组内含子片段之间的第二内部间隔区。11.如权利要求10所述的药物组合物，其中所述第一内部间隔区和所述第二内部间隔区各自具有约10至约60个核苷酸的长度。12.如权利要求1
‑
11中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含对选自下组的抗原具有特异性的抗原结合结构域：CD19、CD123、CD22、CD30、CD171、CS
‑
1、C型凝集素样分子
‑
1、CD33、表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)、双唾液酸神经节苷脂GD2、双唾液酸神经节苷脂GD3、TNF受体家族成员、B细胞成熟抗原(BCMA)、Tn抗原((Tn Ag)或(GaINAca
‑
Ser/Thr))、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、CD38、CD44v6、癌胚抗原(CEA)、上皮细胞粘附分子(EPCAM)、B7H3(CD276)、KIT(CD117)、白细胞介素
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13受体亚基α
‑
2、间皮素、白细胞介素11受体α(IL
‑
11Ra)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、蛋白酶丝氨酸21、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Lewis(Y)抗原、CD24、血小板源性生长因子受体β(PDGFR
‑
β)、阶段特异性胚胎抗原4(SSEA
‑
4)、CD20、叶酸受体α、HER2、HER3、粘蛋白1、细胞表面相关(MUC1)、表皮生长因子受体(EGFR)、神经细胞粘附分子(NCAM)、前列腺酶、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、延伸因子2突变型(ELF2M)、肝配蛋白B2、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、胰岛素样生长因子1受体(IGF
‑
I受体)、碳酸酐酶IX(CAIX)、蛋白酶体(前体，巨蛋白因子)亚基β型9(LMP2)、糖蛋白100(gp100)、由断裂点簇区(BCR)和艾贝尔森鼠白血病病毒致癌基因同系物1(Abl)组成的致癌基因融合蛋白(bcr
‑
abl)、酪氨酸酶、肝配蛋白A型受体2(EphA2)、岩藻糖基GM1、唾液酸化路易斯粘附分子(sLe)、神经节苷脂GM3、转谷氨酰胺酶5(TGS5)、高分子量黑素瘤相关抗原(HMWMAA)、o
‑
乙酰基
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GD2神经节苷脂(OAcGD2)、叶酸受体β、肿瘤内皮标志物1(TEM1/CD248)、肿瘤内皮标志物7相关(TEM7R)、紧密连接蛋白6(CLDN6)、紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)、促甲状腺激素受体(TSHR)、G蛋白偶联受体C类5组成员D(GPRC5D)、染色体X开放阅读框61(CXORF61)、CD97和CD179a。13.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含CAR，所述CAR包含对CD19具有特异性的抗原结合结构域。14.如权利要求1
‑
13中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含CAR，所述CAR包含选自下组的共刺激结构域：CD28、4
‑
1BB、OX40、CD27、CD30、ICOS、GITR、CD40、MYD88、CD2、SLAM以及它们的组合。15.如权利要求1
‑
14中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含CAR，所述CAR包含CD3ζ信号传导结构域。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含CAR，所述CAR包含CH2CH3、CD28和/或CD8间隔区结构域。17.如权利要求1
‑
16中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包
含CAR，所述CAR包含CD28或CD8跨膜结构域。18.如权利要求1
‑
17中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含CAR，所述CAR包含：a.抗原结合结构域，b.间隔区结构域，c.跨膜结构域，d.共刺激结构域，和e.细胞内T细胞信号传导结构域。19.如权利要求1
‑
18中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含多特异性CAR，所述多特异性CAR包含针对至少2种不同抗原的抗原结合结构域。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的药物组合物，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含选自下组的TCR复合物蛋白质：TCRα、TCRβ、TCRγ和TCRδ。21.如权利要求1
‑
20中任一项所述的药物组合物，其中所述转移媒介物包括脂质纳米颗粒、核
‑
壳纳米颗粒、生物可降解纳米颗粒、生物可降解脂质纳米颗粒、聚合物纳米颗粒或生物可降解聚合物纳米颗粒。22.如权利要求1
‑
21中任一项所述的药物组合物，其还包含靶向部分。23.如权利要求22所述的药物组合物，其中在没有细胞分离或纯化的情况下，所述靶向部分介导受体介导的内吞作用或直接融合至选定细胞群或组织的选定细胞中。24.如权利要求22所述的药物组合物，其中所述靶向部分能够结合至选自下组的蛋白质：CD3、CD4、CD8、CD5、CD7、PD
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1、4
‑
1BB、CD28、C1q和CD2。25.如权利要求22所述的药物组合物，其中所述靶向部分包含对巨噬细胞、树突细胞、NK细胞、NKT或T细胞抗原具有特异性的抗体。26.如权利要求22
‑
25中任一项所述的药物组合物，其中所述靶向部分包含scFv、纳米抗体、肽、微型抗体、多核苷酸适体、重链可变区、轻链可变区或其片段。27.如权利要求1
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26中任一项所述的药物组合物，所述药物组合物处于有效治疗所述人受试者的癌症的量。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的药物组合物，其中与包含含有编码相同CAR的外源性DNA的T细胞或载体的药物组合物相比，所述药物组合物具有增强的安全性特征。29.如权利要求1
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28中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物中少于1重量％的多核苷酸是双链RNA、DNA夹板或三磷酸化RNA。30.如权利要求1
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29中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中少于1重量％的多核苷酸和蛋白质是双链RNA、DNA夹板、三磷酸化RNA、磷酸酶蛋白质、蛋白质连接酶和加帽酶。31.如权利要求1
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30中任一项所述的药物组合物，其中所述转移媒介物包含多于一种环状RNA多核苷酸。32.一种环状RNA多核苷酸，所述环状RNA多核苷酸按以下顺序包含3'I组内含子片段、内部核糖体进入位点(IRES)、编码嵌合抗原受体(CAR)或TCR复合物蛋白质的表达序列和5'I组内含子片段。33.如权利要求32所述的环状RNA多核苷酸，其中所述3'I组内含子片段和所述5'I组内
含子片段是鱼腥藻属I组内含子片段。34.如权利要求33所述的环状RNA多核苷酸，其中所述3'内含子片段和所述5'内含子片段由完整内含子中的L9a
‑
5置换位点限定。35.如权利要求33所述的环状RNA多核苷酸，其中所述3'内含子片段和所述5'内含子片段由完整内含子中的L8
‑
2置换位点限定。36.如权利要求32
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35中任一项所述的环状RNA多核苷酸，其中所述IRES包括CVB3 IRES或其片段或变体。37.如权利要求36所述的环状RNA多核苷酸，其中所述IRES具有根据SEQ ID NO:65的序列。38.如权利要求32所述的环状RNA多核苷酸，其中所述IRES包括萨力病毒SZ1 IRES或其片段或变体。39.如权利要求38所述的环状RNA多核苷酸，其中所述IRES具有根据SEQ ID NO:63的序列。40.如权利要求32
‑
39中任一项所述的环状RNA多核苷酸，所述环状RNA多核苷酸包含位于所述3'I组内含子片段与所述IRES之间的第一内部间隔区，以及位于所述表达序列与所述5'I组内含子片段之间的第二内部间隔区。41.如权利要求40所述的环状RNA多核苷酸，其中所述第一内部间隔区和所述第二内部间隔区各自具有约10至约60个核苷酸的长度。42.如权利要求32
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41中任一项所述的环状RNA多核苷酸，所述环状RNA多核苷酸由天然核苷酸组成。43.如权利要求32
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42中任一项所述的环状RNA多核苷酸，所述环状RNA多核苷酸还包含编码治疗性蛋白质的第二表达序列。44.如权利要求43所述的环状RNA多核苷酸，其中所述治疗性蛋白质包含检查点抑制剂。45.如权利要求43所述的环状RNA多核苷酸，其中所述治疗性蛋白质包含细胞因子。46.如权利要求32
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45中任一项所述的环状RNA多核苷酸，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含对选自下组的抗原具有特异性的抗原结合结构域：CD19、CD123、CD22、CD30、CD171、CS
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1、C型凝集素样分子
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1、CD33、表皮生长因子受体变体III(EGFRvIII)、双唾液酸神经节苷脂GD2、双唾液酸神经节苷脂GD3、TNF受体家族成员、B细胞成熟抗原(BCMA)、Tn抗原((Tn Ag)或(GaINAca
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Ser/Thr))、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、CD38、CD44v6、癌胚抗原(CEA)、上皮细胞粘附分子(EPCAM)、B7H3(CD276)、KIT(CD117)、白细胞介素
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13受体亚基α
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2、间皮素、白细胞介素11受体α(IL
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11Ra)、前列腺干细胞抗原(PSCA)、蛋白酶丝氨酸21、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Lewis(Y)抗原、CD24、血小板源性生长因子受体β(PDGFR
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β)、阶段特异性胚胎抗原4(SSEA
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4)、CD20、叶酸受体α、HER2、HER3、粘蛋白1、细胞表面相关(MUC1)、表皮生长因子受体(EGFR)、神经细胞粘附分子(NCAM)、前列腺酶、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、延伸因子2突变型(ELF2M)、肝配蛋白B2、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、胰岛素样生长因子1受体(IGF
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I受体)、碳酸酐酶IX(CAIX)、蛋白酶体(前体，巨蛋白因子)亚基β型9(LMP2)、糖蛋白100(gp100)、由断裂点簇区(BCR)和艾贝尔森鼠白血病病毒致癌基因同
系物1(Abl)组成的致癌基因融合蛋白(bcr
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abl)、酪氨酸酶、肝配蛋白A型受体2(EphA2)、岩藻糖基GM1、唾液酸化路易斯粘附分子(sLe)、神经节苷脂GM3、转谷氨酰胺酶5(TGS5)、高分子量黑素瘤相关抗原(HMWMAA)、o
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乙酰基
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GD2神经节苷脂(OAcGD2)、叶酸受体β、肿瘤内皮标志物1(TEM1/CD248)、肿瘤内皮标志物7相关(TEM7R)、紧密连接蛋白6(CLDN6)、紧密连接蛋白18.2(CLDN18.2)、促甲状腺激素受体(TSHR)、G蛋白偶联受体C类5组成员D(GPRC5D)、染色体X开放阅读框61(CXORF61)、CD97和CD179a。47.如权利要求32
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46中任一项所述的环状RNA多核苷酸，其中所述CAR或TCR复合物蛋白质包含CAR，所述CAR包含对CD19具有特异性的抗原结合结构域。48.如权利要求32
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47中任一项所述的环状RNA多核苷酸，其中所述CAR或TC...
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