一种检测3-苄基-6-溴-2-甲氧基喹啉中杂质的HPLC方法技术

本发明专利技术公开了一种检测3

【技术实现步骤摘要】
一种检测3
‑
苄基
‑6‑
溴
‑2‑
甲氧基喹啉中杂质的HPLC方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，具体而言，涉及一种检测3
‑
苄基
‑6‑
溴
‑2‑
甲氧基喹啉中杂质的HPLC方法。

技术介绍

[0002]富马酸贝达喹啉(Bedaquiline Fumarate)，化学名(1R，2S)
‑1‑
(6
‑
溴
‑2‑
甲氧基
‑3‑
喹啉基)
‑4‑
(二甲基氨基)
‑2‑
(1
‑
萘基)
‑1‑
苯基
‑2‑
丁醇化合物和富马酸(1:1)，于2012年在美国批准上市，2016年在中国批准上市，是一种二芳基喹啉类抗分枝杆菌药物，作为联合治疗的一部分，适用于治疗成人(≥18岁)耐多药肺结核(MDR
‑
TB)。
[0003]3‑
苄基
‑6‑
溴
‑2‑
甲氧基喹啉为合成富马酸贝达喹啉的关键中间体，3
‑
苄基
‑6‑
溴
‑2‑
甲氧基喹啉的合成反应中使用了对溴苯胺，有可能会引入杂质硝基苯、间溴硝基、2,6
‑
二溴苯胺、2,4,5
‑
三溴苯胺、2,4,6
‑
三溴苯胺，所述杂质属于苯胺类或硝基苯类化合物，具有遗传毒性杂质警示结构，是潜在致突变杂质，必须严格监控。
[0004]潜在致突变杂质是指能直接或间接损害DNA，导致基因突变或具有致癌倾向的物质，它可能存在于整个化学药物的合成过程，如起始物料、中间体、终产物和副反应产物等。由于潜在致突变杂质的高危险性，对潜在致突变杂质的控制在药物的质量控制中具有重要意义。根据“质量源于设计”的理念，要求尽可能在源头控制杂质来降低终产品的质量风险，因此有必要在起始物料中控制潜在致突变杂质的含量。目前暂未有上述杂质的质量研究方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种检测3
‑
苄基
‑6‑
溴
‑2‑
甲氧基喹啉中杂质的HPLC方法，该方法灵敏度高，分离度好，操作简单，成本低，用高效液相即可控制。
[0006]本专利技术提供一种检测3
‑
苄基
‑6‑
溴
‑2‑
甲氧基喹啉中杂质的HPLC方法，其中采用苯基己基键合硅胶填料色谱柱，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，用紫外检测器进行检测，所述流动相A为磷酸水溶液，所述流动相B为乙腈。
[0007]在一些实施方案中，所述磷酸水溶液中磷酸的体积是水体积的0.02～0.5％，优选为0.05～0.3％，更优选为0.1～0.2％。
[0008]在一些实施例中，所述梯度洗脱设置如下：0到13分钟：流动相A由85
‑
60％线性减少至40
‑
25％，流动相B由15
‑
40％线性增加至60
‑
75％；13到27分钟，流动相A由40
‑
25％线性减少至30
‑
15％，流动相B由60
‑
75％线性增加至70
‑
85％；27到27.1分钟：流动相A由30
‑
15％线性增加至85
‑
60％，流动相B由70
‑
85％线性减少至40
‑
25％；27.1分钟到37分钟，流动相A是85
‑
60％，流动相B是40
‑
25％。
[0009]在一些实施方式中，所述梯度洗脱设置如下：0到13分钟：流动相A由65％线性减少至30％，流动相B由35％线性增加至70％；13到27分钟，流动相A由30％线性减少至20％，流动相B由70％线性增加至80％；27到27.1分钟：流动相A由20％线性增加至65％，流动相B由
80％线性减少至35％；27.1分钟到37分钟，流动相A是65％，流动相B是35％。
[0010]在一些实施方案中，所述方法中的柱温为25～40℃，优选为30～35℃，流速为0.5～2mL/min，优选为1～1.5mL/min，检测波长为200～250nm，优选为220
‑
250nm。
[0011]在一些实施方案中，所述苯基己基键合硅胶填料色谱柱是Phenomenex Luna 3μm Phenyl Hexyl 100A(4.6mm
×
150mm)、Kinetex Phenyl(4.6mm
×
1250mm，5μm)或XBridge Phenyl(4.6mm
×
150mm，3.5μm)，优选Phenomenex Luna 3μm Phenyl Hexyl 100A(4.6mm
×
150mm)。
[0012]在一些实施方案中，所述方法具体包括以下步骤：
[0013]1)配制供试品溶液：取供试样品溶于溶剂，得供试品溶液；
[0014]2)配制对照品溶液：分别取杂质的对照品，用溶剂溶解稀释制成对照品溶液；
[0015]3)分别取空白溶剂、步骤1)所述供试品溶液和步骤2)中的对照品溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0016]在一些实施方案中，所述空白溶剂、步骤1)和步骤2)中的溶剂为四氢呋喃水溶液。
[0017]在一些实施方案中，所述四氢呋喃水溶液中四氢呋喃和水的体积比是1～10:1，优选2～8:1，更优选4～6:1。
[0018]在一些实施方案中，所述供试品溶液的浓度是10～50mg/ml，优选20～40mg/ml，更优选25～30mg/ml。
[0019]在一些实施方案中，所述对照品溶液的浓度是0.01～1μg/ml，优选0.03～0.5μg/ml，更优选0.05～0.1μg/ml。
[0020]在一些实施方案中，进样体积是5～60μL，优选10～50μL。
[0021]在一些实施方案中，步骤3)还包括在记录色谱图后，确定杂质的保留时间，按外标法以峰面积计算供试样品溶液中杂质的含量，计算方程如下所示：
[0022][0023]其中：
[0024]C
R
为对照品溶液中各杂质浓度；C
X
为供试品溶液浓度；
[0025]A
R
为对照品溶液中各杂质峰面积；A
X
为供试品溶液中各杂质峰面积。
[0026]在一些实施方式中，所述的杂质选自硝基苯、间溴硝基苯、2,6
‑
二溴苯胺、2,4,5
‑
三溴苯胺或2,4,6
‑
三溴苯胺。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测3
‑
苄基
‑6‑
溴
‑2‑
甲氧基喹啉中杂质的HPLC方法，其中采用苯基己基键合硅胶填料色谱柱，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，用紫外检测器进行检测，所述流动相A为磷酸水溶液，所述流动相B为乙腈。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述磷酸水溶液中磷酸的体积是水体积的0.02～0.5％，优选为0.05～0.3％，更优选为0.1～0.2％。3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述梯度洗脱设置如下：0到13分钟：流动相A由85
‑
60％线性减少至40
‑
25％，流动相B由15
‑
40％线性增加至60
‑
75％；13到27分钟，流动相A由40
‑
25％线性减少至30
‑
15％，流动相B由60
‑
75％线性增加至70
‑
85％；27到27.1分钟：流动相A由30
‑
15％线性增加至85
‑
60％，流动相B由70
‑
85％线性减少至40
‑
25％；27.1分钟到37分钟，流动相A是85
‑
60％，流动相B是40
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25％；优选地，所述梯度洗脱设置如下：0到13分钟：流动相A由65％线性减少至30％，流动相B由35％线性增加至70％；13到27分钟，流动相A由30％线性减少至20％，流动相B由70％线性增加至80％；27到27.1分钟：流动相A由20％线性增加至65％，流动相B由80％线性减少至35％；27.1分钟到37分钟，流动相A是65％，流动相B是35％。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法中的柱温为25～40℃，优选为30～35℃；流速为0.5～2mL/min，优选为1～1.5mL/min；检测波长为200～250nm，优选为220
‑
250nm。5.根据权利要求1所述的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴婷华，雷晓雪，李薇，何诗璇，任晋生，
申请(专利权)人：江苏先声药业有限公司，
类型：发明
国别省市：